本发明专利技术涉及一种定量检测DNA含量的SYBR Green I定量检测试剂盒及其检测方法，包括盒体，支架，第一EP管以及第二EP管，其中，所述盒体内设置支架；所述支架上设有4‑6个管架；所述第一EP管设置于第一管架上，所述第一EP管底部设有钻孔，管内设有定性滤纸；所述第二EP管设置于第二管架上，所述第二EP管底部设有钻孔，管内设有定性滤纸。本发明专利技术方法操作简便、成本低廉、准确度高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物化学及分子生物学领域，具体涉及一种定量检测DNA含量的SYBR Green I定量检测试剂盒及其检测方法，适用于各种DNA的定量检测。
技术介绍
在分子生物学领域进行DNA分析时常常需要对DNA进行准确定量。在临床诊断方面，病毒DNA的定量检测是临床诊断的重要依据。SYBR Green I是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料。在游离状态下，SYBR Green I发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA结合后，荧光大大增强。因此，SYBR Green I的荧光信号强度与双链DNA的数量相关，可以根据荧光信号检测出PCR体系存在的双链DNA数量。SYBR Green I的最大吸收波长约为497nm，发射波长最大约为520nm。SYBR Green I核酸凝胶染液是一种高敏感性的荧光染液，可用于检测琼脂糖凝胶及聚丙烯酰胺凝胶中的双链DNA和寡核苷酸。当染液与核酸结合后，SYBR Green I核酸凝胶染液的荧光信号会明显增强，因此经SYBR Green I核酸凝胶染液染色的凝胶显示出非常好的性价比，没有背景荧光。目前，常规利用SYBR Green I荧光染料检测DNA含量的方法存在以下方面的不足：1、PCR扩增过程中SYBR Green I荧光染料与DNA结合的方法存在非特异性扩增导致定量不准确的风险；2、SYBR Green I荧光染料直接作用于样本存在对样本含量、检测仪器灵敏度要求高的问题，检测成本较高，而且样本中其他杂质也会对检测结果造成一定影响，导致定量不准确。
技术实现思路
针对以上现有技术问题，本专利技术的目的在于提供一种定量检测DNA含量的SYBR Green I定量检测试剂盒及其检测方法，排出了样本中其他杂质和非特异性扩增产物对最终检测结果的影响，更准确、低成本的完成DNA含量的定量检测，包括以下步骤：粗滤；琼脂糖凝胶电泳；DNA回收；SYBR Green I荧光染色；检测及结果分析。该方法利用简化的DNA回收方法得到高纯度的DNA，再通过SYBR Green I染色和紫外分光光度计检测荧光，计算分析得到DNA浓度。具体技术方案如下：一种定量检测DNA含量的SYBR Green I定量检测试剂盒，包括盒体，支架，第一EP管以及第二EP管，其中，所述盒体内设置支架；所述支架上设有4-6个管架；所述第一EP管设置于第一管架上，所述第一EP管底部设有钻孔，管内设有定性滤纸；所述第二EP管设置于第二管架上，所述第二EP管底部设有钻孔，管内设有定性滤纸。进一步地，还包括盒盖，所述盒盖一侧连接至盒体并用于扣合盒体。进一步地，所述第一EP管为0.5ml或1.5ml的EP管，所述第二EP管为0.5ml或1.5ml的EP管。上述定量检测DNA含量的SYBR Green I定量检测试剂盒的检测方法，包括如下步骤：(1)粗滤；(2)琼脂糖凝胶电泳；(3)DNA回收；(4)SYBR Green I荧光染色；(5)检测；(6)结果分析。进一步地，步骤(1)中包括：(1-1)取待测样品放入已在底部钻好孔并放入小块定性滤纸的0.5ml的EP管中，再将这个0.5ml的EP管套入一个1.5ml的EP管中；(1-2)将套好的EP管离心，去掉0.5ml的EP管，并将1.5ml的EP管得到液体全部进行琼脂糖凝胶电泳。进一步地，步骤(2)中包括：(2-1)配胶；(2-2)电泳准备；(2-3)上样；(2-4)电泳。进一步地，步骤(3)中包括：(3-1)将切下来的含目的DNA的胶块切碎，放入已在底部钻好孔并放入小块定性滤纸的0.5ml的EP管中，再将这个0.5ml的EP管套入一个1.5ml的EP管中；(3-2)将套好的EP管离心，去掉0.5ml的EP管，并将1.5ml的EP管得到液体定容；(3-3)加入NaAc和无水乙醇，冷冻；沉淀干燥后溶于TE溶液。进一步地，步骤(4)中包括：(4-1)加入与DNA复溶液等体积的稀释好的SYBR Green I工作液，混匀；(4-2)放置30分钟左右。进一步地，步骤(5)中包括：(5-1)将染色好的DNA溶液放置到紫外分光光度计上，260nm波长处分别读取荧光值A260；(5-2)根据WdsDNA＝A260×50μg/ml公式换算待测样品中目的DNA含量。进一步地，(2-1)配胶：根据基因组片段大小，配置相应浓度的琼脂糖凝胶；取适量的琼脂和TAE缓冲液至锥形瓶中，摇匀并用锡纸封口，放入微波炉煮，煮好的凝胶应无气泡、色泽均匀；将煮好的凝胶放入65℃的水浴锅中，待凝胶冷却至65℃时，加入适量的SYBR Green I荧光染料，及时将凝胶倒入装好的干净电泳模具中；待凝胶完全凝固后，小心的将梳子拔出；(2-2)电泳准备：把凝胶连同胶托一起放入电泳槽正中央，胶孔的方向朝向负极，往电泳槽中倒入一定量的TAE缓冲液至刚好将凝胶淹没；(2-3)上样：将样品、6×溴酚蓝按5：1的比例混匀，轻甩后按照规定的顺序上样；(2-4)电泳：上样后，盖上电泳槽盖，接通电泳仪和电泳槽，设置电泳参数：120V 30min。本专利技术方法操作简便、成本低廉、准确度高。附图说明图1为本专利技术电泳后得到的电泳图图2是已在底部钻好孔并放入小块定性滤纸的0.5ml的EP管示意图图3是套入已在底部钻好孔并放入小块定性滤纸的0.5ml EP的1.5ml的EP管示意图图4是一种定量检测DNA含量的SYBR Green I定量检测试剂盒图中：泳道1、2为待测样品A，泳道3、4为DNA标准对照具体实施方式下面根据附图对本专利技术进行详细描述，其为本专利技术多种实施方式中的一种优选实施例。在一个优选实施例中，一种定量检测DNA含量的SYBR Green I定量检测试剂盒及其检测方法，进一步地包括以下步骤：(1)粗滤：①取待测样品100μl，放入已在底部钻好孔并放入小块定性滤纸的0.5ml的EP管中，再将这个0.5ml的EP管套入一个1.5ml的EP管中；②将套好的EP管在4℃10000rpm下离心10min，去掉0.5ml的EP管，并将1.5ml的EP管得到液体全部进行琼脂糖凝胶电泳；(2)琼脂糖凝胶电泳：①配胶：根据基因组片段大小，配置相应浓度的琼脂糖凝胶。取适量的琼脂和TAE缓冲液至锥形瓶中，摇匀并用锡纸封口，放入微波炉煮，煮好的凝胶应无气泡、色泽均匀。将煮好的凝胶放入65℃的水浴锅中，待凝胶冷却至65℃时，加入适量的SYBR Green I荧光染料，及时将凝胶倒入装好的干净电泳模具中。待凝胶完全凝固后，小心的将梳子拔出；②电泳准备：把凝胶连同胶托一起放入电泳槽正中央，胶孔的方向朝向负极，往电泳槽中倒入一定量的TAE缓冲液至刚好将凝胶淹没；③上样：将样品、6×溴酚蓝按5：1的比例混匀，轻甩后按照规定的顺序上样；④电泳：上样后，盖上电泳槽盖，接通电泳仪和电泳槽，设置电泳参数：120V 30min；(3)DNA回收：①将切下来的含目的DNA的胶块切碎，放入已在底部钻好孔并放入小块定性滤纸的0.5ml的EP管中，再将这个0.5ml的EP管套入一个1.5ml的EP管中；②将套好的EP管在4℃10000rpm下离心10min，去掉0.5ml的EP管，并将1.5ml的EP管得到液体用移液枪定容；③加入1/10体积的3mol/L本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种定量检测DNA含量的SYBR Green I定量检测试剂盒，其特征在于，包括盒体，支架，第一EP管以及第二EP管，其中，所述盒体内设置支架；所述支架上设有4‑6个管架；所述第一EP管设置于第一管架上，所述第一EP管底部设有钻孔，管内设有定性滤纸；所述第二EP管设置于第二管架上，所述第二EP管底部设有钻孔，管内设有定性滤纸。
【技术特征摘要】
1.一种定量检测DNA含量的SYBR Green I定量检测试剂盒，其特征在于，包括盒体，支架，第一EP管以及第二EP管，其中，所述盒体内设置支架；所述支架上设有4-6个管架；所述第一EP管设置于第一管架上，所述第一EP管底部设有钻孔，管内设有定性滤纸；所述第二EP管设置于第二管架上，所述第二EP管底部设有钻孔，管内设有定性滤纸。2.如权利要求1所述的定量检测DNA含量的SYBR Green I定量检测试剂盒，其特征在于，还包括盒盖，所述盒盖一侧连接至盒体并用于扣合盒体。3.如权利要求1和2所述的定量检测DNA含量的SYBR Green I定量检测试剂盒，其特征在于，所述第一EP管为0.5ml或1.5ml的EP管，所述第二EP管为0.5ml或1.5ml的EP管。4.如权利要求1-3所述定量检测DNA含量的SYBR Green I定量检测试剂盒的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)粗滤；(2)琼脂糖凝胶电泳；(3)DNA回收；(4)SYBR Green I荧光染色；(5)检测；(6)结果分析。5.如权利要求4所述定量检测DNA含量的SYBR Green I定量检测试剂盒的检测方法，其特征在于，步骤(1)中包括：(1-1)取待测样品放入已在底部钻好孔并放入小块定性滤纸的0.5ml的EP管中，再将这个0.5ml的EP管套入一个1.5ml的EP管中；(1-2)将套好的EP管离心，去掉0.5ml的EP管，并将1.5ml的EP管得到液体全部进行琼脂糖凝胶电泳。6.如权利要求4和5所述定量检测DNA含量的SYBR Green I定量检测试剂盒的检测方法，其特征在于，步骤(2)中包括：(2-1)配胶；(2-2)电泳准备；(2-3)上样；(2-4)电泳。7.如权利要求4-6所述定量检测DNA含量的SYBR Green I定量检测试剂盒的检测方法，其特征在于，步骤(3)中包括：...
【专利技术属性】
技术研发人员：周辉，
申请(专利权)人：周辉，
类型：发明
国别省市：安徽;34
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