一种建立湿热泄泻动物模型的方法技术

本发明专利技术涉及一种建立湿热泄泻动物模型的方法，包括以下步骤：将Wistar大鼠置于代谢笼中，自由饮用蜂蜜水；禁食与饲喂充足饲料并灌胃猪油隔日交替进行，连续10天；第10‑15天灌适量白酒，并置于高温高湿环境，连续5天；第16天腹腔注射大肠杆菌，24h后再注射一次。通过观察大鼠的一般状况，检测血常规、血粘度、血生化、血清细胞因子，证明该法成功的建立了湿热泄泻动物模型。本发明专利技术所构建的动物模型重复性、稳定性好，经得起以药测证的检验，为研发新型治疗药物提供了理想的动物模型。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及中(兽)医药评价领域，具体涉及一种建立湿热泄泻动物模型的方法。
技术介绍
泄泻系因感受外邪，或饮食内伤，致脾失健运，大肠传导失司，湿盛内阻，以大便次数增多，质稀溏或完谷不化，甚如水样为主要表现的病症，在中(兽)医临床中很常见。近年来，国内外学者为研究泄泻机制、开发治疗泄泻的药物，对泄泻动物模型进行了大量研究。其造模方法主要包括：细菌、病毒、中药、西药等诱导的泄泻模型。这些模型大多忽略了与中(兽)医证型的吻合，且造模因素单一。从中(兽)医证型上来说，泄泻主要分为：湿热泄泻、寒湿泄泻、伤食泄泻、脾虚泄泻、肾阳虚泄和肝郁乘脾泄等。其中最常见的为湿热泄泻。《素问·六元正纪大论篇》曰“湿盛则濡泄，甚则水闭腑肿。”指出泄泻尤以湿邪为重。《杂病源流犀烛·泄泻源流》云：“湿盛则飧泄，乃独由于湿耳。不知风寒热虚，虽皆能为病，苟脾强无湿，四者均不得而干之，何自成泄？是泄虽有风寒热虚之不同，要未有不原于湿者也。”湿热泄泻，证见腹痛即泻，或暴注下迫，色黄而臭；或泄而不爽，粪色黄粘稠腥臭；伴见肛门灼热红肿；小便短赤，身热口渴，舌红苔黄腻，脉象滑数。湿热泄泻多由外感六淫，或为夏令暑湿，或饥饱失常或饮食肥甘及误食不洁之物等而致邪气客于肠道，久而湿热内生，阻滞气血，肠胃黏涩，气血熏蒸，因湿热蕴蒸，大肠传导失司，清浊不分，混杂而下，并走大肠，而导致泄泻。《古今医鉴》有云：“夫泄泻者，注下之症也。盖大肠为传送之官，脾胃为水谷之海，或为饮食生冷之所伤，或为暑湿风寒之所感，脾胃停滞，以致阑门清浊不分，发注于下而为泄泻也”。无论寒邪、毒邪或暑邪等多与湿邪混杂，进一步损伤脾胃，造成湿邪内生的恶性循环，湿邪日久多化热，湿热胶结难解，致使大肠传导功能紊乱，清浊混杂而下，故见腹泻、黏液、脓血便、腹痛、里急后重等。平素暴饮暴食，或饥饱无度，或偏嗜醇酒厚味，或纵恣口腹，或误食溲腐不洁之物，或夏月恣食生冷瓜果，或过食辛辣刺激等，损伤脾胃，致中焦运化失司，湿浊内生，郁久化热，而成湿热，湿热内蕴，腑气受阻，气血凝滞，或为脓血，而成本病。建立科学可靠的湿热泄泻动物模型是进行其机理研究的基础。为进一步深入探讨湿热泄泻的本质及探寻其有效治疗中药，很有必要进行湿热泄泻动物模型复制的研究。理想的证型动物模型复制方法要求客观、稳定、重复性好，病因、临床表现、疗效等符合中(兽)医理论的指导。现有的表现为湿热型泄泻病证的动物模型其造模方法存在以下不足之处：(1)有些造模方法与临床实际不贴近，如高糖高脂、高温高湿+葡聚糖硫酸钠配合乙酸，高糖高脂、高温高湿+番泻叶等，能模拟出湿热泄泻的症状，但是临床上这些原因导致泄泻的情况较少；(2)模型大多采用饲喂高糖高脂饲料的方法来造“内湿”，没有把“饥饱失常”对脾胃损失的因素加入其中，这种方法对脾胃造成损伤需要的时间较长，短时间内难以积累足够“内湿”；(3)模型大多采用大肠杆菌灌胃的方法，大肠杆菌经胃的消化以及低PH环境后，其致泻能力大大减弱。
技术实现思路
针对现有技术的不足之处，本专利技术提供了一种湿热泄泻动物模型的复制方法，设计饮蜂蜜水、禁食与饲喂充足饲料并灌胃猪油隔日交替进行的方法来模拟过食肥甘厚味、饥饱失常损伤脾胃造成内湿；设计高温高湿环境来模拟外在湿热环境；设计灌酒的方法，因酒既能生湿又能生热，使内湿和外湿相结合；大肠杆菌为生物致病因子，诱导泄泻。这样建立了一种湿热泄泻的动物模型，并对其进行评价。结果表明，该方法可成功复制湿热泄泻动物模型，而且复制方法稳定性、重复性好，符合中(兽)医理论的指导。本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种建立湿热泄泻动物模型的方法，该方法具体包括以下步骤：将大鼠置于代谢笼中，自由饮用蜂蜜水；隔日禁食隔日饲喂充足饲料并灌胃猪油，连续10天；第11-15天每日灌酒并置于高温高湿环境，连续5天；第16天腹腔注射大肠杆菌，24h后再注射一次。所述蜂蜜水浓度为30％，其各组分的百分比为：能量16％，蛋白质0％，脂肪0％，碳水化合物26％，钠5％。所述代谢笼为单笼，笼内空间以保持大鼠基本安静、且能够转身移动为标准。所述酒为56°红星二锅头。所述高温高湿环境温度为33±2℃，相对湿度为93±2％。所述大肠杆菌为侵袭性大肠杆菌，血清型为O101，培养浓度为1.6×109CFU/ml。所用大鼠为SPF级Wistar大鼠，8周龄，体重200±20g。为更好的实现本专利技术目的，本专利技术选用以下方法对湿热泄泻大鼠模型进行评价：大鼠的一般状况指标即精神状态、活动状态、被毛光泽、舌苔、肛周、粪便及体重、体温等；血常规、血粘度、血生化检测；血清细胞因子检测；病理组织学观察。动物模型建立后，用清热解毒、涩肠止泻方药进行干预，如能改变湿热泄泻大鼠的症状表现，以及血常规、血流变、血生化、血清细胞因子和病理组织上的损伤，则佐证了该模型的成立。为了增加以药测证的科学性和客观性，本专利技术设治疗湿热泄泻的代表方剂郁金散为药物对照组对动物模型进行验证。实验结束后对上述评价指标进行统计学分析，模型组和对照组大鼠相比，差异有统计学意义，且用郁金散干预后，能显著改善本专利技术所建立模型的湿热症状以及其他评价指标，说明造模成功。本专利技术解决了目前湿热泄泻动物模型存在的不足之处，为规范、标准、科学的评价中(兽)医药提供了一种新方法，具有造模稳定性和重复性好、易于操作和控制、贴近临床等特点。附图说明图1为湿热泄泻大鼠模型的肛周粪便图，其中A正常对照组，B模型组。图2为湿热泄泻整个造模过程中大鼠的体重变化趋势图。图3为湿热泄泻大鼠模型的结肠病理切片图。其中Control为正常组，Model为模型组，Treatment为郁金散组。图4为湿热泄泻大鼠模型的回肠病理切片图。其中Control为正常组，Model为模型组，Treatment为郁金散组。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步的说明，但本专利技术并不受限于此。实施例11模型制备材料及方法1.1动物：SPF级Wistar大鼠36只，雌雄各半，8周龄，体重200±20g，由兰州大学实验动物中心提供，实验动物许可证号：SCXK(甘)2013-0002。室温调整在18-25℃，湿度在50％±5％，12h光照和12h黑暗环境，标准饮食，自由给水。适应5天后，进行试验。1.2药物：郁金散组成比例：郁金30g、诃子15g、黄芩30g、大黄60g、黄连30g、栀子30g、白芍15g、黄柏30g，均购自甘肃西域阳光大药房。首先将全部药物放入10倍水中浸泡30min，以武火煮沸，以文火煎煮30min，纱布过滤；药渣再分别加入8倍和6倍水，煎煮2次；合并3次滤液，布氏漏斗抽滤，计算大鼠给药剂量，水浴浓缩至浓度为临床等效剂量。1.3菌种：侵袭性大肠杆菌干燥菌种O101，购自中国兽医药品监察所，菌号CVCC231。1.4试剂：戊巴比妥钠，货号:P3761，美国Sigma公司；无水乙醇，分析纯，天津市光复科技发展有限公司；丙三醇，分析纯，批号100117，天津市富宇精细化工有限公司；磷酸二氢钠，分析纯，天津市光复精细化工研究所；磷酸氢二钠，分析纯，天津市大茂化学试剂厂；氯化钠，分析纯，批号20150410，国药集团化学试剂有限公司；胰蛋白胨，批号20140608，北京奥博星生物技术有限责任公司；牛肉膏，批号20131018，北本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种建立湿热泄泻动物模型的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：将大鼠置于代谢笼中，自由饮用蜂蜜水；隔日禁食隔日饲喂充足饲料并灌胃猪油，连续10天；第11‑15天每日灌白酒并置于高温高湿环境，连续5天；第16天腹腔注射大肠杆菌，24h后再注射一次，模型即得。其中，所述蜂蜜水浓度为30％，其各组分的百分比为：能量16％，蛋白质0％，脂肪0％，碳水化合物26％，钠5％。

【技术特征摘要】
1.一种建立湿热泄泻动物模型的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：将大鼠置于代谢笼中，自由饮用蜂蜜水；隔日禁食隔日饲喂充足饲料并灌胃猪油，连续10天；第11-15天每日灌白酒并置于高温高湿环境，连续5天；第16天腹腔注射大肠杆菌，24h后再注射一次，模型即得。其中，所述蜂蜜水浓度为30％，其各组分的百分比为：能量16％，蛋白质0％，脂肪0％，碳水化合物26％，钠5％。2.根据权利要求1所述的建立湿热泄泻动物模型的方法，其特征在于：所述代谢笼为单笼，笼内空间以保持大鼠基本安静、且能够转身移动为标准。3.根据权利要求1所述的建立湿热泄泻动物模型的方法，其特征在于：所述猪油的灌胃量为20ml/kg。4.根据权利要求1所述的建立湿热泄泻动物模型的方法，其特征在于：所述白...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏彦明，姚万玲，张晓松，华永丽，胡俊杰，
申请(专利权)人：甘肃农业大学，
类型：发明
国别省市：甘肃;62