本发明专利技术公开了一种降低黄曲霉毒素吸收度和肝损伤的复方纳米粒制备方法，包括以下步骤：1)、先将儿茶素和原花青素等质量混合，得混合料；在12g混合料中加入质量浓度为1.4～1.6％的多聚磷酸钠溶液200ml混合均匀；2)、在4～6g的壳聚糖中加水定容至1000ml，磁力搅拌后，调节pH为3.5～4.5，得壳聚糖液；3)、将步骤1)所得溶液全部加入至步骤2)所得的壳聚糖液中，所得的反应体系于20～30℃继续搅拌40～80min，得复方纳米粒混悬液。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种降低黄曲霉毒素肠道吸收度和肝损伤的复方纳米粒的制备方法。
技术介绍
茶多酚(Tea Polyphenols,TP)是茶叶中多酚类及其衍生物的总称，主要有儿茶素、黄酮类、花青素和酚酸等物质组成，其中儿茶素类占茶多酚总量60％-90％。儿茶素为茶叶中最主要的天然活性成分，具有多种药理和保健活性；儿茶素具有很强的生物活性，大量研究均表明儿茶素具有抗氧化清除自由基、抗心血管疾病、抑菌消炎等多种保健和药理作用。原花青素为存在于葡萄籽、黑枸杞、银杏叶、松树皮以及玫瑰花等植物中的一种天然超强抗氧化剂，已经成为医学和营养学中使用最强的天然清除自由基的物质。原花青素是一种有着特殊分子结构的生物类黄酮，是目前国际上公认的清除人体内自由基最有效的天然抗氧化剂。一般为红棕色粉末，气微、味涩，溶于水和大多有机溶剂。一般为葡萄籽提取物或法国海岸松树皮提取物。原花青素(葡萄籽提取物，GSPE)是一种新型高效抗氧化剂，是目前为止所发现的最强效的自由基清除剂，具有非常强的体内活性。实验证明，原花青素的抗自由基氧化能力是维生素E的50倍，维生素C的20倍。在结构上，原花青素是由不同数量的儿茶素或表儿茶素聚合而成。最简单的原花青素是儿茶素、或表儿茶素、或儿茶素与表儿茶素形成的二聚体，此外还有三聚体、四聚体以及直至十聚体。黄曲霉毒素(AFT)是黄曲霉、寄生曲霉菌等产毒菌株产生的次生代谢产物，广泛存在于污染的食品中，尤其以霉变的花生、玉米及谷类含量最多。AFT微溶于水，易溶于油脂、氯仿和甲醇等有机溶剂。AFT对温度的敏感性差，280℃才能裂解，因此一般的烹饪条件下不易被破坏。1993年AFT就被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构列为I类致癌物，是一种毒性极强的剧毒物质。天然污染的食物中黄曲霉毒素B1(AFB1)最多，是目前已知最强的化学致癌物之一，因此AFT一般以AFB1为代表，在食品监测中作为污染监测指标。大量研究均表明AFT是肝癌最强烈的致癌物。目前由于经济快速发展、人们生活节奏的加快，加之生活水平的提高、饮食结构的改变，导致的高尿酸血症和各种心脑血管慢性病逐渐呈现升高的趋势，往往相伴有高血压、高血脂、高血糖等现代内分泌、代谢紊乱性疾病。由于生活和工作压力过大，往往导致内分泌发生紊乱，从而导致机体机能和各种复合疾病进一步发生和加剧，大部分人都处于亚健康状态。加之各种快餐饮食和食品安全问题突出，从而使得人们在不知不觉中体内积聚了大量的自由基，同时可能会慢慢滋生各种疾病，尤其是肝脏损伤风险处于高危状态。一旦饮食中有大量黄曲霉毒素摄入，肝脏的解毒和抗损伤能力不堪一击，更加易于导致肝癌的发生。因此，开发符合现代人生活方式并能够抵抗黄曲霉毒素吸收和代谢所致肝损伤的新型保健品，具有重要意义和市场前景。目前在提高儿茶素和原花青素生物膜转运方面的研究主要集中在儿茶素衍生化物的制备和应用上，近来年也有学者开展了儿茶素/茶多酚纳米粒制剂或注射用纳米乳剂的研究，但此类研究主要是针对如何促进天然植物多酚跨膜转运进行的有益探索。然而关于儿茶素和原花青素复方纳米粒制备以及通过降低抗黄曲霉毒素生物利用度来发挥抗损伤方面的研究尚未见报道。虽然有文献报道了不同浓度绿茶及茶叶渣对黄曲霉毒素B1导致大鼠肝癌作用的影响，同时也有研究报道了茶多酚在树鼩肝癌形成中的化学预防作用，但是上述研究只是从肝脏损伤角度来研究茶多酚对黄曲霉毒素损伤的保护或干预作用。关于原花青素对黄曲霉毒素、肝损伤的保护功能研究也尚未见有报道。从新型儿茶素和原花青素复方纳米溶液和降低黄曲霉毒素生物利用度视角来研究对黄曲霉毒素保护功能，尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种降低黄曲霉毒素肠道吸收度和肝损伤的复方纳米粒的制备方法，采用该方法可以制备出能够显著降低黄曲霉毒素肠道吸收度和肝损伤的复方纳米粒，使得儿茶素和原花青素协同降低黄曲霉毒素的损伤毒性。为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种降低黄曲霉毒素吸收度和肝损伤的复方纳米粒制备方法，包括以下步骤：1)、先将儿茶素和原花青素等质量混合，得混合料；在12g混合料中加入质量浓度为1.4～1.6％(最佳为1.5％)的多聚磷酸钠溶液200ml混合均匀；2)、在4～6g的壳聚糖中加水定容至1000ml，磁力搅拌后，调节pH为3.5～4.5(较佳为4.0)，得壳聚糖液；3)、将步骤1)所得溶液(即，儿茶素和原花青素的多聚磷酸钠溶液)全部加入至步骤2)所得的壳聚糖液中，所得的反应体系于20～30℃(较佳为25℃)继续搅拌40～80min(例如为60min)，得复方纳米粒混悬液。作为本专利技术的降低黄曲霉毒素吸收度和肝损伤的复方纳米粒制备方法的改进：所述步骤3)中，将步骤1)所得溶液(即，儿茶素和原花青素的多聚磷酸钠溶液)于60～80分钟(较佳为70分钟)内均匀滴加至步骤2)所得的壳聚糖液中。作为本专利技术的降低黄曲霉毒素吸收度和肝损伤的复方纳米粒制备方法的进一步改进：所述步骤2)中，磁力搅拌的转速为800～1200r/min。在本专利技术中：选用满足以下条件的壳聚糖：分子量为11万，脱乙酰度＞80％，含量＞99％。选用满足以下条件的儿茶素：总多酚含量＞98％，其中儿茶素EGCG＞80％。步骤3)中的搅拌为200～400r/min。步骤1)中，根据实际需要，配制1mol/L的盐酸或氢氧化钠溶液，通过边滴加边测pH方法来达到目的pH值。本专利技术的用法为：口服，用量约为10mg/kg。本专利技术在专利技术过程中，采用了如下的检测方法：方法一、血浆中儿茶素EGCG的定量分析方法(以EGCG溶出作为检测指标)采用向0.3mL空白血浆中加入儿茶素EGCG标准品的方法，配制浓度范围为0.1-200mg/L的儿茶素EGCG标准样品，再向其中加入30μL 20％(质量百分浓度)的抗坏血酸，再加入30μL 100μg/mL香兰素作为内标，混合后加入3mL乙酸乙酯进行萃取，振荡1min，6000r/min高速离心5min，分别得有机相(位于上层)和水相(位于下层)；将水相(位于下层)用3mL乙酸乙酯重复萃取一次(萃取条件同上)，合并两次萃取有机相，于45℃水浴中氮气流(弱氮气流)吹干，所得残渣用0.1mL 20％(体积％)的乙腈水溶液溶解，超声振荡后，18000r/min高速离心3min，取20μL上清液HPLC进样分析。具体为：以日本岛津高效液相色谱，两元高压泵，紫外检测器，大连伊利特Hypersil BDS C18柱(5μm,250mm×4.6mm)，流动相为乙腈∶0.1％(质量％)柠檬酸水溶液＝10∶90；柱温30℃，波长280nm；流速为1.0mL·min-1；进样量为20μL。备注说明：空白血浆即为没有加入EGCG的纯血浆。根据HPLC检测结果，以儿茶素EGCG峰面积与内标香兰素峰面积之比(Y)为纵坐标，以儿茶素EGCG浓度的质量浓度(X)为横坐标，绘制标准曲线，求出曲线方程和相关系数(r)。同时制备含儿茶素EGCG曲线范围内高、中、低浓度血浆样品0.2，10.0，50.0mg/L作为质控样品(QC)，分别按照上述样品处理方法处理后进样分析，每个浓度样品重复5次，以样品中EGCG峰面积与直接溶于流动相下所测峰面积之比，计算高、中、低3种浓度下本文档来自技高网...
【技术保护点】
降低黄曲霉毒素吸收度和肝损伤的复方纳米粒制备方法，其特征是包括以下步骤：1)、先将儿茶素和原花青素等质量混合，得混合料；在12g混合料中加入质量浓度为1.4～1.6％的多聚磷酸钠溶液200ml混合均匀；2)、在4～6g的壳聚糖中加水定容至1000ml，磁力搅拌后，调节pH为3.5～4.5，得壳聚糖液；3)、将步骤1)所得溶液全部加入至步骤2)所得的壳聚糖液中，所得的反应体系于20～30℃继续搅拌40～80min，得复方纳米粒混悬液。
【技术特征摘要】
1.降低黄曲霉毒素吸收度和肝损伤的复方纳米粒制备方法，其特征是包括以下步骤：1)、先将儿茶素和原花青素等质量混合，得混合料；在12g混合料中加入质量浓度为1.4～1.6％的多聚磷酸钠溶液200ml混合均匀；2)、在4～6g的壳聚糖中加水定容至1000ml，磁力搅拌后，调节pH为3.5～4.5，得壳聚糖液；3)、将步骤1)所得溶液全部加入至步骤2)所得的壳聚糖液中，所得的反应体系...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖英平，杨华，吉小凤，钱鸣蓉，李锐，王小骊，吴俐勤，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。