本发明专利技术提供一种室温条件下草莓表面鼠伤寒沙门氏菌预测模型，如下式(5)所示，并提供了该预测模型的建立方法。本发明专利技术通过模型验证证实该模型能准确、客观、定量的反应室温条件下草莓表面鼠伤寒沙门氏菌的生长情况，为草莓风险评估模型研究提供数据基础，有利于草莓的品质控制和风险预警、评估。Ygro＝log10Nt‑log10N0＝0.359+0.081×t (5)。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种室温条件下草莓表面鼠伤寒沙门氏菌预测模型及其建立方法。
技术介绍
鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhimurium)为革兰氏阴性肠杆菌，属于沙门氏菌乙组，能导致多种宿主动物肠道疾病，可以通过被污染的饮用水及食物进入人体，引起腹泻、呕吐、肠炎等疾病，严重时可致人死亡，其致病机理在于鼠伤寒沙门氏菌进入人体肠道后，通过入侵小肠上皮细胞及在肠毒素、内毒素的作用下，能够引起肠膜水肿、充血、组织炎症。沙门氏菌普遍存在动物粪便中，并通过农业设施中的灌溉水、施肥等途径传播。2015年9月，美国因沙门氏菌污染紧急召回墨西哥进口黄瓜事件再次引起公众对食源性微生物疾病的关注，该次事件已造成超过285人患病，其中53人入院，1人死亡。2008年美国爆发鼠伤寒沙门氏菌中毒事件，原因是西红柿污染。2012年2月英国出现西瓜大规模中毒事件，也与沙门氏菌感染有关[2]。我国草莓种植面积从1985年的0.33万平方公顷增加至2009年的9.01万平方公顷，总产量达到220.6万吨，占世界总产量的35.7％，是世界草莓生产第一大国[2]。居民草莓消费量近年来逐渐增加，2007年鲜果消费总量约为177万吨，2009年初步估计已超过200吨，按13亿人口计算，人均消费量接近1.5kg[3]。然而，成熟后草莓果实娇嫩，含水量达到95％，采摘、加工、运输、销售过程中极易受机械伤害而渗出汁液，为有害微生物生长提供丰富的营养物质，常温条件下草莓储藏期仅1-2天[4]。近年来，我国各省市生食果蔬类的沙门氏菌阳性率调查结果显示，果蔬中沙门氏菌的阳性率平均值为3.38％，个别地区沙门氏菌污染较为严重达到10％[5-8]。虽然我国尚缺少草莓表面鼠伤寒沙门氏菌污染率和污染水平的相关报道，但施肥、灌溉等过程可能造成细菌污染，且春季草莓成熟季节较温暖的温度可造成果实表面的细菌增长，对居民健康造成风险。目前国内鲜见有关草莓表面沙门氏菌的定量风险评估研究，也缺少根据科学研究结果对消费者家庭环节提出的健康消费指导。预测微生物模型是风险评估的重要数据基础，草莓表面鼠伤寒沙门氏菌的预测模型是风险评估中的数据缺陷，因此，本专利技术对春季室温条件下鼠伤寒沙门氏菌的数量变化规律进行模型拟合，建立微生物预测方程，为风险评估模型研究提供数据基础。
技术实现思路
本专利技术提供一种室温条件下草莓表面鼠伤寒沙门氏菌预测模型及其建立方法，可以通过模型预测室温条件下草莓表面鼠伤寒沙门氏菌的生长情况，模型预测值与实验数据偏差较小，可较好的拟合细菌生长与时间关系。本专利技术采用的技术方案是：一种室温条件下草莓表面鼠伤寒沙门氏菌预测模型的建立方法，所述方法包括以下步骤：(1)鼠伤寒沙门氏菌活化培养，得到细菌培养液(2)新鲜草莓用体积分数75％的酒精浸泡灭菌，灭菌后的草莓浸泡于细菌培养液中接种；(3)接种后的草莓于室温下储藏，测定不同储藏时间下草莓上的菌株数；所述室温为22℃；(4)将细菌计数后进行对数转换，用式(2)的线性模型进行生长曲线拟合Ygro＝log10Nt-log10N0＝a+b×t (2)其中，t为室温下储藏时间，单位为小时；Nt(CFU/g)为t时的细菌数，N0(CFU/g)为样品初始带菌量；Ygro为t时细菌对数值变化量，a,b分别为线性方程待拟合的参数；线性拟合求出a、b。线性拟合求出a、b后，可以得到细菌对数值变化量与时间的关系如下式(5)，即为室温条件下草莓表面鼠伤寒沙门氏菌预测模型Ygro＝log10Nt-log10N0＝0.359+0.081×t (5)进一步，本专利技术使用鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhimurium)，编号ATCC14028，由浙江省农业科学院农产品质量标准研究所提供。所述步骤(1)中，鼠伤寒沙门氏菌活化培养的步骤是：鼠伤寒沙门氏菌株保存于1ml冷冻管中，储存于-80℃冰箱，使用前取出，融化后吸取1ml菌液培养于300mlNB肉汤培养基中，37℃条件下震荡培养12h，得到细菌浓度为108CFU/ml的细菌培养液备用。所述步骤(2)中，新鲜草莓用体积分数75％的酒精浸泡灭菌，一般将新鲜无伤口的草莓浸泡于体积分数75％的酒精溶液中2分钟，以杀灭表面微生物，取出后用无菌水反复冲洗，直至无酒精味后置于无菌烧杯中备用。所述步骤(2)中，灭菌后的草莓浸泡于细菌培养液中接种，具体步骤一般为：灭菌后的草莓用细菌培养液浸没浸泡30分钟后将草莓取出置于无菌塑料盘上，于生物安全柜中静置30分钟，确保菌液接种至草莓表面，得到接种后的草莓。所述步骤(3)中，室温下储藏，本专利技术选取春季平均室温22℃模拟草莓表面鼠伤寒沙门氏菌生长过程。储藏时间考虑消费者日常储存草莓的平均最长时间，选取72小时为最长时间周期。所述步骤(3)中，测定不同储藏时间下草莓上的菌株数，一般每隔一段时间取出草莓样品，采用平板计数法计数。更具体的，按以下方法进行计数：取出草莓样品后，迅速转移至含有20ml生理盐水的均质袋中，用拍击式均质器拍打均质袋中的草莓1-2min，制成样品匀液，使用无菌枪头吸取1ml样品匀液加入9mL生理盐水试管稀释，漩涡混匀后制成1:10的样品匀液，再用生理盐水稀释2次，分别制成1：100、1：1000的样品匀液，用无菌枪头吸取0.1mL不同稀释度样品匀液，分别对应均匀涂布在10-1、10-2、10-3稀释度编号的XLD琼脂平板上，将涂布后的平板平放于桌上20-30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，36±1℃培养24±2h后计数。这是本领域技术人员公知的平板计数法。一般每个时间点做3个重复实验，取3次实验平均值。本专利技术所述方法还可以包括以下步骤(5)(5)线性拟合求出a、b后，对模型进行验证，进一步，模型验证包括内验和外验，所述内验采用相关系数(R2)及标准误平方根(RMSE)作为内验结果来验证模型拟合度；所述外验是利用预测模型预测室温下不同储藏时间下草莓上的菌株数对数值变化量，然后进行验证实验，将实际测量值与预测值进行比较，利用方程(3)及(4)计算Ross提出的偏差因子Bf及精确因子Af，用于模型外验结果，以评价模型的准确性。 B f = 10 [ Σ i = 1 n log ( p r e d o b s ) / n ] - - - ( 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种室温条件下草莓表面鼠伤寒沙门氏菌预测模型的建立方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：(1)鼠伤寒沙门氏菌活化培养，得到细菌培养液(2)新鲜草莓用体积分数75％的酒精浸泡灭菌，灭菌后的草莓浸泡于细菌培养液中接种；(3)接种后的草莓于室温下储藏，测定不同储藏时间下草莓上的菌株数；(4)将细菌计数后进行对数转换，用式(2)的线性模型进行生长曲线拟合Ygro＝log10Nt‑log10N0＝a+b×t (2)其中，t为室温下储藏时间，单位为小时；Nt为t时的细菌数，单位为CFU/g；N0为样品初始带菌量，单位为CFU/g；Ygro为t时细菌对数值变化量，a,b分别为线性方程待拟合的参数；线性拟合求出a、b。
【技术特征摘要】
1.一种室温条件下草莓表面鼠伤寒沙门氏菌预测模型的建立方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：(1)鼠伤寒沙门氏菌活化培养，得到细菌培养液(2)新鲜草莓用体积分数75％的酒精浸泡灭菌，灭菌后的草莓浸泡于细菌培养液中接种；(3)接种后的草莓于室温下储藏，测定不同储藏时间下草莓上的菌株数；(4)将细菌计数后进行对数转换，用式(2)的线性模型进行生长曲线拟合Ygro＝log10Nt-log10N0＝a+b×t (2)其中，t为室温下储藏时间，单位为小时；Nt为t时的细...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨桂玲，汪雯，王强，周育，蔡铮，宋雯，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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