一种1-脱氧野尻霉素的结晶方法技术

本发明专利技术公开了一种1‑脱氧野尻霉素的结晶方法，该方法包括：先将桑叶粉用酸性乙醇浸泡，并在超声波细胞破碎机中处理，过滤，收取滤液进行离心分离，制得粗提取液；通过阳离子交换树脂，进行洗脱；收集洗脱液后置于旋转蒸发仪中进行浓缩，再用正丁醇对浓缩物进行萃取；萃取后回收萃取液，将余物置于低温干燥箱中进行干燥；干燥后置于乙醇中，形成过饱和溶液后析出晶体，收集晶体干燥后即得成品。本发明专利技术提供的1‑脱氧野尻霉素的结晶方法可获得约0.2％的桑叶1‑DNJ提取率，显著高于传统的乙醇提取率0.00139％，及稀酸提取效率0.00147％，说明稀酸和乙醇在浸提桑叶1‑DNJ中发生了协同作用，产生了不可预见的效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医学医药
，尤其涉及一种1-脱氧野尻霉素的结晶方法。
技术介绍
1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin，DNJ)为一种极性含N化合物，其化学名称是3，4，5-三羟基-2-羟甲基四氢吡啶，分子式为C6H13NO4，相对分子质量为163。1-脱氧野尻霉素具有很强的抑制α-葡萄糖苷酶的作用，是降血糖、治疗糖尿病的有效成分，此外还具有抗病毒、抗肿瘤转移等药理作用。近年来，国内外学者对1-脱氧野尻霉素的来源、在生物体内的合成机制及化学合成方法进行了大量的研究探索，研究发现桑树的桑叶中1-脱氧野尻霉素的含量相当的可观，且提取方法、操作简单。中国专利技术(03101988.9)报道了一种含有桑叶总碱浸膏的制剂及其制备方法：桑叶用水或者亲水溶剂提取，絮凝，上清液离子交换，亲水性溶剂回流提取，浓缩至干得到浸膏。产品的纯度达到50％以上，该制剂具有明显的降血糖及改善糖耐量作用。该方法需要絮凝；被树脂吸附的物资需要用亲水溶剂回流洗脱下来，实际操作中有些不便。中国专利技术(02113004.3)报道了桑枝提取物及其提取方法和新用途：桑枝提取物由单味药材桑枝用0～95％乙醇水溶液或氯仿、丙酮、乙酸乙酯、甲醇等溶剂或它们的组合在10-100℃温度条件下提取1次或1次以上，合并提取液，回收溶剂即得；或用下列方法进一步纯化：提取液调pH为7.5-9.5，离心后上清液调pH为4-6，沉淀水洗至中性，干燥即得；提取液经石油醚或汽油脱脂而得；提取液经石油醚或汽油脱脂后，用氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇或水分别或依次提取而得；提取液经大孔吸附树脂吸附后，用10-95％乙醇水溶液解吸附而得；提取液经硅藻土、氧化铝等吸附后，用氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇等溶剂洗脱后，浓缩干燥而得；提取液经聚酰胺、硅胶或离子交换树脂等柱层析分离。以上纯化方法可单用或采用几种方法的组合。所得的桑枝提取物中含有大量黄酮类成分，包括芦丁、槲皮素、桑色素等。该专利技术未明确提取物含DNJ的纯度，而且纯化时石油醚脱脂、大孔树脂吸附等，操作程序复杂。中国专利技术(200710060127.2)报道了从桑叶中连续提取生物碱、黄酮和多糖活性成分的方法：选用溶剂为20％～90％的乙醇或10％～90％的丙酮回流提取，得到滤液和滤渣；滤液浓缩、加水溶解后，通过大孔树脂分离得含量为30％～50％的黄酮类化合物；经过大孔树脂后的溶液，再通过离子交换树脂分离得含量为40％～60％的生物碱类化合物；桑叶滤渣，用水煎煮并脱色，10％～60％醇沉，得含量为55％～85％的酸性多糖类化合物。该技术需要大量的乙醇或者丙酮进行提取，工艺技术成本高，能耗高，未得DNJ纯品。中国专利技术(200510030333.X)报道了从桑叶中提取有效成分的方法：将吸附有桑叶提取物的树脂置于萃取釜中，连续通入CO2进行萃取洗脱，收集流出萃取釜的CO2，卸压至常压，CO2放空或加压后回用，获得卸压后的残留物，即为桑叶有效成分，萃取釜中CO2为超临界状态。本专利技术的方法，纯化过程不易氧化，便于进行规模化从桑叶中提取、提纯桑叶脱氧野尻霉素类生物碱和桑叶黄酮，选择性高，产物中，脱氧野尻霉素生物碱和桑叶黄酮的总含量可达到75～90％。该技术采用超临界萃取技术，最终产品也未得到脱氧野尻霉素纯品。中国专利技术(200710067498.3)报道了一种从桑叶中提取1-脱氧野尻霉素的方法：通过在桑叶的提取液中加入无机酸酸化处理，经冷却除去杂质，再经过柱层析获得。可使桑叶提取物含量不低于10％，但是未得纯品。中国专利技术(200810122998.7)报道了一种从桑叶总生物碱中分离1-脱氧野尻霉素单体的方法：桑叶总碱溶于水，离子交换树脂吸附，吸附完成后，分布洗脱并收集脱氧野尻霉素纯品部分，减压浓缩干燥，多次重结晶，得到纯品。该方法要求原料的“总生物碱”含脱氧野尻霉素40％以上，分步洗脱剂为不同浓度的醇溶液，重结晶为甲醇和丙酮混合溶液；分步洗脱时需要大量的检测工作和收集纯品部位，操作比较麻烦，重结晶的混合溶剂难以处理。中国专利技术(200810236144.1)报道了一种联产桑叶黄酮、多糖和生物碱的复合提取工艺，但是并未分离得到脱氧野尻霉素纯品。中国专利技术(200910192542.2)报道了一种从桑叶中连续提取分离1-脱氧野尻霉素(DNJ)、黄酮的方法：将桑叶和乙醇混合后提取，离心过滤，浓缩后加入絮凝剂絮凝沉淀；除去沉淀后将滤液加入连通的多个阳离子交换树脂柱，并流经与该树脂柱串连在一起的大孔吸附树脂柱；滤液加入结束后用纯净水洗至大孔树脂柱流出液无色时将其断开，再用氨水或含氨的乙醇溶液从阳离子树脂柱上洗脱1-脱氧野尻霉素(DNJ)；洗脱液再上阳离子树脂柱，重复操作后收集洗脱液，用80D纳滤膜浓缩过滤后喷雾干燥，得棕黄色粉末状1-脱氧野尻霉素(DNJ)。用3％～10％的乙醇洗涤大孔树脂柱以除去胶性杂质，再用50％～70％乙醇洗脱黄酮，收集棕红色洗脱液，减压浓缩回收乙醇后喷雾干燥，得黄棕色粉末状桑叶总黄酮。该技术原料需要用乙醇反复提取，生产成本较高，能耗也较高。中国专利技术(200710099911.4)报道了一种用离子交换树脂分离桑叶总生物碱的方法。该技术未获得脱氧野尻霉素单体。中国专利技术(201010130263.6)报道了一种从桑叶中制备黄酮、生物碱的方法：碱水加热提取黄酮，90-95％乙醇和活性炭再提取生物碱，黄酮提取液调酸过大孔树脂柱，酸化结晶和70-80％乙醇溶解重结晶，生物碱提取液浓缩，丙酮再溶解，过氧化铝短粗柱，氨化结晶和85-90％乙醇溶解重结晶。本技术需要大量的有机溶剂，而且未得到脱氧野尻霉素单体。中国专利技术(201110021131.4)报道了桑叶中1-脱氧野尻霉素的制备方法：采用高电压脉冲电场技术生产1-脱氧野尻霉素的方法，由于是常温提取，同时提高了产品质量和生产效率，降低了生产成本。该技术未得到脱氧野尻霉素纯品。中国专利技术(200910167602.5)报道了天然产物中提取分离高纯1-脱氧野尻霉素的方法：原料干粉用亲水溶剂提取，提取液酸化、浓缩后以阴离子交换树脂浸泡，流出液和水洗液浓缩后用阳离子交换柱层析、有机溶剂萃取、重结晶、凝胶柱层析纯化，所得产物中1-脱氧野尻霉素含量不少于98％，具体实施已进入中试。该技术需要阴离子交换树脂和阳离子交换树脂，同时需要醇、丙酮、氯仿、丁醇等多种有机溶剂，尤其是涉及氯仿，毒性较大；提取过程中需要多次浓缩，能耗较高。中国专利技术(201110038204.0)报道了由桑叶中提取分离高纯度1-脱氧野尻霉素的方法：将原料粉末用含水溶剂提取，滤掉药渣，物料离心，得提取液；提取液浓缩至无乙醇，超滤膜过滤；再用无机酸调pH至3.0-4.0，沉淀，离心除杂；酸化料液上强酸性阳离子树脂柱，水洗，再进行氨水洗脱；料液上大孔树脂柱，水洗，再用不同浓度的乙醇梯度洗脱，收集目标洗脱液；目标洗脱液减压浓缩、干燥，得到粗品；粗品用无水乙醇溶解，过碱性吸附柱除杂，收集流出液；流出液减压浓缩，进行常温结晶和重结晶，得到1-DNJ精制品。本专利技术整个工艺过程中，除乙醇外未使用其它有机溶剂，操作安全，1-DNJ含量可达98.3％。该工艺需要采用超滤技术，乙醇分布本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种1‑脱氧野尻霉素的结晶方法，其特征在于，该1‑脱氧野尻霉素的结晶方法包括以下步骤：先将桑叶粉用酸性乙醇浸泡，并在超声波细胞破碎机中处理，过滤，收取滤液进行离心分离，制得粗提取液；再将制备好的粗提取液通过阳离子交换树脂，进行洗脱；收集洗脱液后置于旋转蒸发仪中进行浓缩，再用正丁醇对浓缩物进行萃取；萃取后回收萃取液，将余物置于低温干燥箱中进行干燥；干燥后置于乙醇中，形成过饱和溶液后析出晶体，收集晶体干燥后即得成品。

【技术特征摘要】
1.一种1-脱氧野尻霉素的结晶方法，其特征在于，该1-脱氧野尻霉素的结晶方法包括以下步骤：先将桑叶粉用酸性乙醇浸泡，并在超声波细胞破碎机中处理，过滤，收取滤液进行离心分离，制得粗提取液；再将制备好的粗提取液通过阳离子交换树脂，进行洗脱；收集洗脱液后置于旋转蒸发仪中进行浓缩，再用正丁醇对浓缩物进行萃取；萃取后回收萃取液，将余物置于低温干燥箱中进行干燥；干燥后置于乙醇中，形成过饱和溶液后析出晶体，收集晶体干燥后即得成品。2.如权利要求1所述的1-脱氧野尻霉素的结晶方法，其特征在于，所述1-脱氧野尻霉素的结晶方法具体为：提取：将桑叶粉碎过40目筛，称取300g于1000mL烧杯中，加入由HCL与乙醇混合得到pH为6.5的65％酸性乙醇800mL浸泡30min，放入功率为300W的超声波处理20min，过滤，收集滤液，残渣加入400mL 65％的酸性乙醇重复处理一次，过滤，弃去残渣，合并两次滤液，将合并两次后的滤液用旋转蒸发仪回收乙醇并浓缩至小体积，进行离心分离提取液，制得粗提取液；纯化：将制备后收集的1-脱氧野尻霉素粗提取溶液上样到阳离子交换树脂的交换柱，并用蒸馏水洗脱，流速为1.0～2.0ml/min；待洗脱液由无色变为淡黄色时开始收集，直至洗脱液基本无色为止得到第一洗脱液，然后...

【专利技术属性】
技术研发人员：林巧，王治潘，清源，史碧波，黄海燕，郑飞，焦钰，
申请(专利权)人：西昌学院，
类型：发明
国别省市：四川;51