本发明专利技术公开了一种鉴定散叶叶用莴苣品种的方法，采用SSR分子标记法对散叶叶用莴苣进行品种鉴定，SSR分子标记法在散叶叶用莴苣多态性研究中，其专用引物如下：SML026；SML022；SML021；SML013；SML007；SML002；SML001；SH86；SH66；SH49；SH43；SH42；KSL271；KSL173；KSL123；KSL115；KSL97；KSL92；KSL87；KSL51；KSL32；KSL26。用上述专用引物获取散叶叶用莴苣SSR指纹图谱和待鉴定品种的指纹，将待测品种的指纹与所述的SSR指纹图谱进行对比，获得鉴定结果。能方便、准确的鉴定散叶叶用莴苣品种。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种鉴定散叶叶用莴苣品种技术，尤其涉及一种鉴定散叶叶用莴苣品种的方法。
技术介绍
目前，我国国家蔬菜种质资源库收集和保存散叶叶用莴苣种质资源200余份，但目前生产上使用的栽培品种多数引自国外。散叶叶用莴苣是一种低投入、高收益、营养价值丰富的速生蔬菜，近年来栽培面积迅速扩大，逐渐成为人们食用的首选绿叶蔬菜之一。但是，我国散叶叶用莴苣的栽培品种主要靠引进国外已有品种，具有自主知识产权的品种和类型很有限，并且在品种资源搜集、鉴定上几乎是空白。因此，需要多角度、多方法开展种质资源的创新工作，开发出品质优良的散叶叶用莴苣新品种，来满足当前生产的需要。种质资源是蔬菜遗传育种和品种改良的基本材料，种质资源的鉴定和筛选是培育和改良优异品种的一项基础工作。由于不同地区之间频繁引种，使得品种名称十分混乱，同物异名和同名异物的现象非常普遍。所以，利用SSR指纹图谱技术鉴定散叶叶用莴苣品种很有必要。现阶段，对于蔬菜的种质资源鉴定，大多用的基于PCR技术的DNA标记技术，可综合为三大类：一是以分子杂交为基础的标记技术，主要是RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)及VNTR(Variable number tandem repeat)；二是以PCR为基础的标记技术，如RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)、SCAR(Sequence Characterized Amplified Regions)、STS(Sequence Tagged Site)、SSR(Simple Sequence Repeat)、ISSR(Inter-Simple Sequence Repeat)、DAF(DNA Amplified Fingerprinting)及ERPAR(Ex-tended Random Primer Amplified Regions)等；三是酶切和PCR相结合的标记技术，主要有AFLP(Amplified ragment Length Polymorphism)和CAPS(Cleaved Amplified Polymorphic Sequence)。此外，还有一类新近发展起来的基于单个核苷酸多态性的DNA标记，即SNP(Simple Nucleotide Polymorphism)。随着逆转座子研究，一项基于反转录转座子的植物分子标记技术—RTN技术得到了很大的发展，主要有SSAP(Sequence-l Variation Polymorphism)、RIAP(Inverse Retrotransposon Amplified Polymorphism)、RBIP(Retrotransposon based Insertion Polymorphism)等5种。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种使用方便、结果准确的鉴定散叶叶用莴苣品种的方法。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：本专利技术的鉴定散叶叶用莴苣品种的方法，采用SSR分子标记法对散叶叶用莴苣进行品种鉴定，所述的SSR分子标记法在散叶叶用莴苣多态性研究中，其专用引物如下：(1)SML026(2)SML022(3)SML021(4)SML013(5)SML007(6)SML002(7)SML001(8)SH86(9)SH66(10)SH49(11)SH43(12)SH42(13)KSL271(14)KSL173(15)KSL123(16)KSL115(17)KSL97(18)KSL92(19)KSL87(20)KSL51(21)KSL32(22)KSL26用所述专用引物获取散叶叶用莴苣SSR指纹图谱，并用所述专用引物获取待鉴定品种的指纹，将待测品种的指纹与所述的SSR指纹图谱进行对比，获得鉴定结果。由上述本专利技术提供的技术方案可以看出，本专利技术实施例提供的鉴定散叶叶用莴苣品种的方法，能方便、准确的鉴定散叶叶用莴苣品种。具体实施方式下面将对本专利技术实施例作进一步地详细描述。本专利技术的鉴定散叶叶用莴苣品种的方法，其较佳的具体实施方式是：采用SSR分子标记法对散叶叶用莴苣进行品种鉴定，所述的SSR分子标记法在散叶叶用莴苣多态性研究中，其专用引物如下：(1)SML026(2)SML022(3)SML021(4)SML013(5)SML007(6)SML002(7)SML001(8)SH86(9)SH66(10)SH49(11)SH43(12)SH42(13)KSL271(14)KSL173(15)KSL123(16)KSL115(17)KSL97(18)KSL92(19)KSL87(20)KSL51(21)KSL32(22)KSL26用所述专用引物获取散叶叶用莴苣SSR指纹图谱，并用所述专用引物获取待鉴定品种的指纹，将待测品种的指纹与所述的SSR指纹图谱进行对比，获得鉴定结果。通过以下方法获取散叶叶用莴苣SSR指纹图谱，包括以下步骤：A、以叶用莴苣的基因组DNA为模板，用所述专用引物进行PCR扩增；B、将步骤A中得到的扩增产物进行毛细管电泳，分别记录品种中SSR片段的长度；C、按照电泳的峰值图读数，有峰记为1，无峰记为0，根据(0,1)数据矩阵，构建SSR指纹图谱。应用于品种鉴定时，将待鉴定品种的DNA用所述专用引物经PCR产物扩增，将产物对应的条带填写入相应的(0,1)标记表中得出待测品种的指纹，而后将待测品种的指纹与上述的SSR指纹图谱进行对比，直接获得鉴定结果。具体实施例：实例1、用SSR分子标记法建立散叶叶用莴苣指纹图谱。操作流程为：制备模板DNA→DNA扩增→毛细管电泳→统计分析结果。具体方法和过程如下：1、使用改良的CTAB法提取的叶用莴苣基因组DNA：提取的基因组DNA经Eppendorf Biophotometer测定OD260/OD280值在1.7-1.9范围内。将DNA提取液稀释成100ng/μl，取3μl DNA样品加入1μl loading buffer稀释液，在1％的琼脂糖凝胶上检测，稳压4V/cm，电泳45min。电泳结果显示，DNA主带清晰，无降解现象，RNA去除干净，可以作为模板。2、SSR引物的设计和筛选：在SSR分子标记实验中，不同引物组合对某一特定基因组的扩增效率是不同的。引物扩增效率的高低由它产生的多态性条带数决定。本实例对109对引物组合进行分别进行扩增，从中筛选出了22对谱带分布均匀，条带丰富，多态性较高且谱带质量较好的引物组合，可用于提供样品种质资源遗传多样性研究。这十一对引物如下：引物对1：SML026；GGGTTCTCATTGGCTGACAT/TGTCTTCCAACCAAAACATACA(GAA)11引物对2：SML022；GGGCCTCAAATCCTCTCTG/TGTTCTTCCCCTCTTTGGAA(ATC)13引物对3：SML021；TTGGGAGAATTTTCATTTCCA/AGTCATCTTTTTCACCCCACA(TA)8引物对4：SML013；TCCCATGATGGAGAGACTCA/CCCAAAAGGGAATAGCAACC(GAA)14(CTG)5引物对5：SML007；ACACTTGCCGAT本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种鉴定散叶叶用莴苣品种的方法，其特征在于，采用SSR分子标记法对散叶叶用莴苣进行品种鉴定，所述的SSR分子标记法在散叶叶用莴苣多态性研究中，其专用引物如下：(1)SML026(2)SML022(3)SML021(4)SML013(5)SML007(6)SML002(7)SML001(8)SH86(9)SH66(10)SH49(11)SH43(12)SH42(13)KSL271(14)KSL173(15)KSL123(16)KSL115(17)KSL97(18)KSL92(19)KSL87(20)KSL51(21)KSL32(22)KSL26用所述专用引物获取散叶叶用莴苣SSR指纹图谱，并用所述专用引物获取待鉴定品种的指纹，将待测品种的指纹与所述的SSR指纹图谱进行对比，获得鉴定结果。
【技术特征摘要】
1.一种鉴定散叶叶用莴苣品种的方法，其特征在于，采用SSR分子标记法对散叶叶用莴苣进行品种鉴定，所述的SSR分子标记法在散叶叶用莴苣多态性研究中，其专用引物如下：(1)SML026(2)SML022(3)SML021(4)SML013(5)SML007(6)SML002(7)SML001(8)SH86(9)SH66(10)SH49(11)SH43(12)SH42(13)KSL271(14)KSL173(15)KSL123(16)KSL115(17)KSL97(18)KSL92(19)KSL87(20)KSL51(21)KSL32(22)KSL26用所述专用引物获取散叶叶用莴苣SSR指纹图谱，并用所述专用引物获取待鉴定品种的指纹，将待测品种的指纹与所述的S...
【专利技术属性】
技术研发人员：范双喜，罗江，韩莹琰，张鹏航，高琦，谷建田，刘超杰，
申请(专利权)人：北京农学院，
类型：发明
国别省市：北京;11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。