一种蛋白铁补铁剂的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种蛋白铁补铁剂的制备方法，它是将磁性纳米粒子载体与样品溶液反应，使样品溶液中的转铁蛋白与磁性纳米粒子载体上的三价铁离子结合；然后用磁铁将吸附了转铁蛋白的磁性纳米粒子载体与溶液分离，并通过调节pH使结合的转铁蛋白再次从磁性纳米粒子载体中释放出来并与FeCl3反应，经干燥后得到铁结合转铁蛋白；将铁结合转铁蛋白与富马酸亚铁、L‑抗坏血酸、补血中药提取物和药学上可接受的载体混合，制成蛋白铁补铁剂。本发明专利技术具有补铁效果好，副作用和不良反应少等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于补血剂领域，具体涉及一种蛋白铁补铁剂的制备方法。
技术介绍
铁离子是人体所必须的微量元素，它参与血红蛋白的合成，是机体运输和供应氧气的保障。铁缺乏是造成贫血的重要因素，约50％以上的贫血(即缺铁性贫血，IDA)是由于铁元素缺乏所引起的，而通过补铁剂对铁缺乏人群进行营养强化，是预防和治疗作用铁缺乏及缺铁性贫血的有效措施。目前，常用补铁剂的种类已达数十种，但现有补铁剂具有一些缺点：具有较重的铁腥味，不易为消费者所接受；很容易引起胃肠道不适，使用者很难长期坚持服用，耐受性差；部分补铁剂会干扰药物的代谢。转铁蛋白具有结合铁离子的活性位点，可以非常牢固地结合铁离子，将其作为铁离子载体具有显著的优势：可以有效地屏蔽铁腥味，易于被消费者接受；经胃肠道消化后逐步释放铁离子，起到缓释的作用，减轻铁离子对胃肠道的刺激，降低副作用；减少铁离子与其他药物在消化道内的接触，避免干扰其它药物的代谢。因此，以转铁蛋白作为载体的补铁剂具有可以克服目前常用补铁剂的缺点，具有显著的优势。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服传统补铁剂的缺陷，提供一种没有铁腥味，胃肠道刺激小，副作用和不良反应少的蛋白铁补铁剂的制备方法。本专利技术所提供的制备方法包括以下步骤：(1)以戊二醛为交联剂，将磁性氧化铁纳米粒与三价铁离子反应，制成磁性纳米粒子载体；(2)将含有转铁蛋白的样品稀释后，调节溶液pH至6.8-9.5，然后按溶液重量的0.02-1％加入磁性纳米粒子载体，搅拌5-60分钟，使溶液中的转铁蛋白与磁性纳米粒子载体上的三价铁离子结合；(3)用磁铁将吸附了转铁蛋白的磁性纳米粒子载体吸附至溶液底部，弃去上层溶液，用pH为6.8-9.5的缓冲液洗涤下层固体，然后转移至pH为3.2-4.8的缓冲液中，搅拌5-60分钟，使结合的转铁蛋白从磁性纳米粒子载体中释放出来；再次用磁铁将磁性纳米粒子载体和溶液分离，向溶液中加入FeCl3反应，经干燥后得到铁结合转铁蛋白；(4)将铁结合转铁蛋白与富马酸亚铁、L-抗坏血酸、补血中药提取物和药学上可接受的载体混合，制成蛋白铁补铁剂，所述铁结合转铁蛋白、富马酸亚铁、L-抗坏血酸、补血中药提取物的重量比为100∶(0.1-0.5)∶(1-5)∶(5-20)。所述补血中药提取物是指具有补血功能的中药如当归、白芍、阿胶、大枣、枸杞等的水提取或乙醇提取物，优选地，所述补血中药为阿胶、大枣、枸杞中的一种或多种。优选地，所述含有转铁蛋白的样品是鸡蛋清或牛乳。本专利技术的有益效果：(1)本专利技术制备的蛋白铁补铁剂由多种成分组成，各成分之间相互协调，不可或缺，补铁效果明显优于常用补铁剂，而且副作用和不良反应更少，使用更加安全。(2)本专利技术通过改进铁结合转铁蛋白的制备方法，使铁离子与转铁蛋白紧密结合，在胃肠道中不易释放出来，从而有效地屏蔽了铁腥味，减轻了铁离子对胃肠道的刺激，降低了副作用和不良反应。(3)本专利技术提高了铁结合转铁蛋白的纯度，减少了杂质和其它结合状态的铁离子，从而进一步降低了副作用和不良反应。(3)本专利技术操作简单，生产周期短，产物收率高，同时利用了物理吸附的原理进行纯化分离，尽可能减少了有机试剂的使用，不仅降低了成本，而且更加安全、环保。具体实施方式以下通过实施例对本专利技术进行详细地说明。实施例1(1)将市售的以四氧化三铁为基质的磁性氧化铁纳米粒(平均粒径小于100nm)按0.3g/mL的比例分散于pH为8的磷酸盐缓冲液中，然后按缓冲液的体积添加2.5％的戊二醛，避光搅拌3h，使戊二醛与磁性氧化铁纳米粒交联，用蒸馏水洗去未交联的戊二醛分子，超声波处理10s使纳米粒分散，然后向溶液中加入三价铁离子(FeCl3，20mmol/L)，搅拌反应5h，蒸馏水洗去多余的铁离子，制备成磁性纳米粒子载体；(2)将鸡蛋清稀释8倍，调节pH至8.5，然后按溶液重量的0.5％加入磁性纳米粒子载体，搅拌10分钟，使溶液中的卵转铁蛋白与磁性纳米粒子载体上的三价铁离子结合；(3)用磁铁将吸附了转铁蛋白的磁性纳米粒子载体吸附至容器底部，弃去上层溶液，用pH为8.5的缓冲液洗涤下层固体，除去未吸附的杂蛋白，然后将固体转移至pH为4的缓冲液中，搅拌45分钟，使结合的转铁蛋白从磁性纳米粒子载体中释放出来；再次使用磁铁将磁性纳米粒子载体和溶液分离，向溶液中加入FeCl3(25mmol/L)反应，经干燥后得到铁结合转铁蛋白；(4)取铁结合转铁蛋白100g、富马酸亚铁0.2g、L-抗坏血酸2g、阿胶10g、混均，再加入微晶纤维素10g，制粒，压片，即得补铁片剂。实施例2(1)与实施例1的步骤(1)相同；(2)将牛乳稀释5倍，调节溶液pH至6.8，然后按溶液重量的0.02％加入磁性纳米粒子载体，搅拌5分钟，使溶液中的转铁蛋白与磁性纳米粒子载体上的三价铁离子结合；(3)用磁铁将吸附了转铁蛋白的磁性纳米粒子载体吸附至溶液底部，弃去上层溶液，用pH为6.8的缓冲液洗涤下层固体，然后转移至pH为3.2的缓冲液中，搅拌60分钟，使结合的转铁蛋白从磁性纳米粒子载体中释放出来；再次用磁铁将磁性纳米粒子载体和溶液分离，向溶液中加入FeCl3(20mmol/L)反应，经干燥后得到铁结合转铁蛋白；(4)取铁结合转铁蛋白100g，富马酸亚铁0.1g，L-抗坏血酸1g，大枣提取物(大枣的水提取物，通过市售途径购买)20g，混匀后加入糖粉制粒，干燥，即得补铁颗粒剂。实施例3(1)与实施例1的步骤(1)相同；(2)将鸡蛋清稀释10倍，调节溶液pH至9.5，然后按溶液重量的1％加入磁性纳米粒子载体，搅拌60分钟，使溶液中的转铁蛋白与磁性纳米粒子载体上的三价铁离子结合；(3)用磁铁将吸附了转铁蛋白的磁性纳米粒子载体吸附至溶液底部，弃去上层溶液，用pH为9.5的缓冲液洗涤下层固体，然后转移至pH为4.8的缓冲液中，搅拌5分钟，使结合的转铁蛋白从磁性纳米粒子载体中释放出来；再次用磁铁将磁性纳米粒子载体和溶液分离，向溶液中加入FeCl3(5mmol/L)反应，经干燥后得到铁结合转铁蛋白；(4)取铁结合转铁蛋白100g，富马酸亚铁0.5g，L-抗坏血酸5g，枸杞子提取物(枸杞子的乙醇和水提取物，通过市售途径购买)5g；混匀，加入淀粉制粒，用胶囊填充，即得复合补铁胶囊剂。经SDS-PAGE电泳分析，实施例1～3铁结合转铁蛋白的产物纯度和收率见下表1。表1 铁结合转铁蛋白的纯度和收率产物纯度收率实施例192％80％实施例287％73％实施例382％75％实施例4为验证本专利技术的补血效果，我们进行以下实验：雌性初断乳大鼠42只，4周龄，健康状况良好，血象正常，平均体重76.57±9.49g。随机选取6只大鼠作为正常对照组，全程饲喂普通饲料，饮自来水；其余大鼠饲喂低铁饲料4周，饮去离子水，建立IDA模型。缺铁性贫血为典型的低色素小细胞型贫血，其表现为血清血红蛋白(Hb)的显著降低，当Hb<100g/L时即为建模成功。因此，在4周后对所有大鼠进行尾静脉取血，测定Hb，结果显示，正常组含量为148.75±6.90g/L，而IDA模型组的大鼠Hb值均降低至100g/L以下，平均值为85.79±4.85g/L，由此可以判定IDA模型构建成功。从IDA大鼠中选取6只作为阴性对照组，不添加补铁剂，使其本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛋白铁补铁剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)以戊二醛为交联剂，将磁性氧化铁纳米粒与三价铁离子反应，制成磁性纳米粒子载体；(2)将含有转铁蛋白的样品稀释后，调节溶液pH至6.8‑9.5，然后按溶液重量的0.02‑1％加入磁性纳米粒子载体，搅拌5‑60分钟，使溶液中的转铁蛋白与磁性纳米粒子载体上的三价铁离子结合；(3)用磁铁将吸附了转铁蛋白的磁性纳米粒子载体吸附至溶液底部，弃去上层溶液，用pH为6.8‑9.5的缓冲液洗涤下层固体，然后转移至pH为3.2‑4.8的缓冲液中，搅拌5‑60分钟，使结合的转铁蛋白从磁性纳米粒子载体中释放出来；再次用磁铁将磁性纳米粒子载体和溶液分离，向溶液中加入FeCl3反应，经干燥后得到铁结合转铁蛋白；(4)将铁结合转铁蛋白与富马酸亚铁、L‑抗坏血酸、补血中药提取物和药学上可接受的载体混合，制成蛋白铁补铁剂，所述铁结合转铁蛋白、富马酸亚铁、L‑抗坏血酸、补血中药提取物的重量比为100∶(0.1‑0.5)∶(1‑5)∶(5‑20)。

【技术特征摘要】
1.一种蛋白铁补铁剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)以戊二醛为交联剂，将磁性氧化铁纳米粒与三价铁离子反应，制成磁性纳米粒子载体；(2)将含有转铁蛋白的样品稀释后，调节溶液pH至6.8-9.5，然后按溶液重量的0.02-1％加入磁性纳米粒子载体，搅拌5-60分钟，使溶液中的转铁蛋白与磁性纳米粒子载体上的三价铁离子结合；(3)用磁铁将吸附了转铁蛋白的磁性纳米粒子载体吸附至溶液底部，弃去上层溶液，用pH为6.8-9.5的缓冲液洗涤下层固体，然后转移至pH为3.2-4.8的缓冲液中，搅拌5-60分钟，使结合的转铁蛋白从磁性纳米粒子载...

【专利技术属性】
技术研发人员：马美湖，耿放，袁小军，任国栋，何恩祺，付星，王一博，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42