一种快速测定饲料用植酸酶酶活力的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速测定饲料用植酸酶酶活力的方法。该测定饲料用植酸酶酶活力的方法，包括如下步骤：将用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸加入到含有待测饲料用植酸酶的液体中，获得酶解反应液；将所述酶解反应液进行酶解反应，测定所述酶解反应产生的游离无机磷的含量，得到所述待测饲料用植酸酶的酶活力；以干重计，所述用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸中淀粉的质量百分含量为≤0.01％。该方法既可以快速检测饲料用植酸酶在缓冲溶液中的酶活力，又可以快速检测饲料用植酸酶在离体动物消化液中的酶活力。饲料生产企业和养殖户可以参照本发明专利技术的方法对植酸酶的酶活力进行分析和比较，适用于饲料用植酸酶的研究、生产和应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及饲料领域中一种快速测定饲料用植酸酶酶活力的方法。
技术介绍
植酸酶是目前饲料工业中应用最广的单体酶，也是一种很成熟的饲料酶，约占整个饲料酶产值的30％左右。植酸酶可水解饲料中的植酸，使其释放出可利用的磷，从而减少单胃动物饲料中无机磷的使用量，也可以减少动物粪便中的磷对环境的污染。因此无论从社会效益和经济效益来看，植酸酶都是一种很好的饲料添加剂，也是一种极有发展前途的饲料用酶。随着植酸酶在饲料中的广泛应用，对植酸酶酶活力评价方法的需求也越来越迫切。长期以来，植酸酶酶活力的分析测定一直是饲料工业领域中很有争议的话题，现有分析方法所提供的分析数据的实用性和重复性都不理想。目前，植酸酶酶活力的评价主要以植酸钠为底物，所用植酸钠纯度高而且易溶于水，但是饲料成分相对比较复杂，所含植酸盐基本上都是不溶于水的化合物，而且这些化合物通常与饲料原料中的其它成分(主要是蛋白、纤维和金属离子)相互交联在一起，组成结构复杂的鳌合物，因此纯化的植酸钠不能模拟植酸酶在体内作用时所面对的复杂底物成分。动物饲养试验虽然直观，可靠性也比较好，但是试验的时间太长(至少需要2个月)，成本很高，在实际生产过程中很难推广，与科研过程中的快速分析要求相差甚远。另外，植酸酶还有很多同工酶，它们对酸碱环境的适应性、对温度的耐受性以及对动物消化道环境的抗逆性都有差异，用目前标准的实验室分析方法是很难区别的，而实际生产应用却很需要这些数据。因此，探索并建立一种更为科学、客观和简便评价植酸酶酶活力的体外检测方法是迫切需要的。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何快速、更符合实际地测定饲料用植酸酶的酶活力。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了一种测定饲料用植酸酶酶活力的方法。本专利技术所提供的一种测定饲料用植酸酶酶活力的方法，包括如下步骤：将用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸加入到含有待测饲料用植酸酶的液体中，获得酶解反应液；将所述酶解反应液进行酶解反应，测定所述酶解反应产生的游离无机磷的含量，得到所述待测饲料用植酸酶的酶活力；以干重计，所述用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸中淀粉的质量百分含量为≤0.01％(如0.01％)。上述方法中，所述含有待测饲料用植酸酶的液体可为含有待测饲料用植酸酶的缓
冲溶液或含有待测饲料用植酸酶的离体动物消化液。所述含有待测饲料用植酸酶的缓冲溶液可用所述待测饲料用植酸酶和醋酸-醋酸钠缓冲溶液配制，所述含有待测饲料用植酸酶的离体动物消化液可用所述待测饲料用植酸酶和所述离体动物消化液配制。所述离体动物消化液具体可为离体动物胃液或离体动物肠液，所述离体动物胃液具体可为离体猪胃液，所述离体动物肠液具体可为离体猪小肠液或离体鸡小肠液。上述方法中，所述酶解反应液中，所述植酸酶的浓度可为0.196-0.500mg/mL，具体可为0.196mg/mL或0.500mg/mL；所述麦麸的浓度可为19.6-25.0mg/mL，具体可为19.6mg/mL或25.0mg/mL；所述植酸酶与所述麦麸的质量比可为1：(50-100)，具体可为1:100或1:50。上述方法中，所述酶解反应的反应温度可为37-41.5℃，具体可为37℃。上述方法中，所述酶解反应液的pH值可为2.4-5.8，具体可为5.3-5.8、2.4-5.5、2.4、5.3、5.5或5.8；所述酶解反应时间可为10-100min，具体可为10-90min、90-100min、10min、20min、30min、40min、50min、60min、70min、80min、90min或100min。上述方法中，所述无机磷可为磷酸。上述方法中，所述用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸可按照下述用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸的制备方法制备。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了上述用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸的制备方法。本专利技术所提供的用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸的制备方法，包括如下步骤：将麦麸进行糊化反应，获得糊化后的麦麸；向所述糊化后的麦麸中加入淀粉酶得到淀粉酶反应体系，进行淀粉酶酶解反应，获得淀粉酶酶解后的麦麸；向所述淀粉酶酶解后的麦麸中加入糖化酶得到糖化酶反应体系，进行糖化酶酶解反应，获得糖化酶酶解后的麦麸；将所述糖化酶酶解后的麦麸进行清洗，得到所述用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸。上述用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸的制备方法中，所述糊化反应可为在95-100℃反应10-15min，具体可为在98℃反应12min。所述淀粉酶反应体系中，所述淀粉酶可为α-淀粉酶；所述α-淀粉酶和所述糊化后的麦麸的配比可为40000Uα-淀粉酶：(8.74-12)kg以干重计的所述糊化后的麦麸，所述α-淀粉酶和所述糊化后的麦麸的配比具体可为40000Uα-淀粉酶：8.74kg以干重计的所述糊化后的麦麸；所述淀粉酶酶解反应可为在65-70℃反应25-30min，具体可为在65℃反应30min。所述α-淀粉酶的一个酶活力单位是指在60℃和pH值为6.0的条件下，每小时水
解可溶性淀粉产生出1μmol麦芽糖所需要的α-淀粉酶的量。所述α-淀粉酶可为北京东华强盛生物工程有限公司的产品，产品目录号为107658305。所述糖化酶反应体系中，所述糖化酶和所述淀粉酶酶解后的麦麸的配比可为1600000U糖化酶：(8.74-12)kg以干重计的所述淀粉酶酶解后的麦麸，所述糖化酶和所述淀粉酶酶解后的麦麸的配比具体可为1600000U糖化酶：8.74kg以干重计的所述淀粉酶酶解后的麦麸；其中所述淀粉酶酶解后的麦麸的质量以所述糊化后的麦麸的干重计；所述糖化酶酶解反应可为在95-100℃反应30-90min，具体可为在95℃反应60min。所述糖化酶的一个酶活力单位是指在40℃和pH值为4.6的条件下，每小时水解可溶性淀粉产生1mg葡萄糖所需要的糖化酶的量。所述糖化酶可为北京东华强盛生物工程有限公司的产品，产品目录号为1003301。所述清洗用水进行，所述清洗的次数可为3-4次，具体可为3次。上文中，所述麦麸为大麦麸。本专利技术所提供的上述方法在鉴别饲料用植酸酶酶活力中的应用也属于本专利技术的保护范围。实验证明，本专利技术的测定饲料用植酸酶酶活力的方法能够直观、简便，客观全面地测定饲料用植酸酶的酶活力。本专利技术的测定饲料用植酸酶酶活力的方法，以淀粉含量≤0.01％的麦麸为底物，既可以快速检测饲料用植酸酶在缓冲溶液中的酶活力，又可以快速检测饲料用植酸酶在离体动物消化液中的酶活力。饲料生产企业和养殖户可以参照本专利技术的方法对植酸酶的酶活力进行分析和比较，适用于饲料用植酸酶的研究、生产和应用。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中的植酸酶A为巩义市益康生物科技有限公司的产品(5000型)，植酸酶B为河南集美化工产品有限公司的产品(PW5型)，植酸酶C为江苏奕农生物工程有限公司的产品(植酸酶5000)，植酸酶D为江苏远方中汇生物科技有限公司的产品(植酸酶5000)，植酸酶X为上海纪亭实业有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定饲料用植酸酶酶活力的方法，包括如下步骤：将用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸加入到含有待测饲料用植酸酶的液体中，获得酶解反应液；将所述酶解反应液进行酶解反应，测定所述酶解反应产生的游离无机磷的含量，得到所述待测饲料用植酸酶的酶活力；以干重计，所述用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸中淀粉的质量百分含量为≤0.01％。

【技术特征摘要】
1.一种测定饲料用植酸酶酶活力的方法，包括如下步骤：将用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸加入到含有待测饲料用植酸酶的液体中，获得酶解反应液；将所述酶解反应液进行酶解反应，测定所述酶解反应产生的游离无机磷的含量，得到所述待测饲料用植酸酶的酶活力；以干重计，所述用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸中淀粉的质量百分含量为≤0.01％。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述酶解反应的反应温度为37-41.5℃。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述酶解反应液的pH值为2.4-5.8。4.根据权利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：所述用于测定饲料用植酸酶酶活力的麦麸的制备方法包括将麦麸进行糊化反应，获得糊化后的麦麸；向所述糊化后的麦麸中加入淀粉酶得到淀粉酶反应体系，进行淀粉酶酶解反应，获得淀...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋慧，
申请(专利权)人：北京晟亚育达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11