本发明专利技术提供了一种母乳中左乙拉西坦的检测方法，包括以下步骤：(1)供试品制备：取供试母乳，加入供试母乳5倍体积的乙酸乙酯混匀，离心，取乙酸乙酯层，吹干，复溶，作为供试品；(2)检测：取步骤(1)的供试品用高效液相色谱进行检测，检测条件为：固定相：C18色谱柱；流动相：甲醇-无机盐溶液，二者的体积比为17:83，所述无机盐溶液的pH为4.5；检测波长：210nm。本发明专利技术方法可以准确检测母乳中左乙拉西坦，并且检测方法快速简便，专属性强，灵敏度高，稳定性好，可用于临床检测母乳中左乙拉西坦的浓度，为服用左乙拉西坦的哺乳期妇女喂母乳提供指导。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物药物分析领域，具体涉及一种母乳中左乙拉西坦的检测方法。
技术介绍
左乙拉西坦(levetiracetam，LEV，商品名KePPra)是新一代抗癫痫药物，属吡咯烷酮衍生物。吡咯烷酮类促智药属于五元杂环内酞胺类促智药，可视为γ-氨基丁酸(GABA)的衍生物，对参与神经保护和记忆过程的受体具有特殊作用，是目前最引人注目的一类促智药，具有广谱、起效迅速的抗癫痫活性，药物代谢动力学特性较理想、耐受性和安全性好，特别适用于成人和儿童的难治性部分性发作的辅助治疗。左乙拉西坦的结构与作用机制均与其他抗癫痫药物不同，它的药代动力学与给药剂量呈线性关系，生物利用度能达到100％，不具备肝药酶诱导效应，大约91％的剂量能通过肾脏排泄；而且可以通过监控血浆中LEV的浓度来优化治疗效果，特别对于有肾损伤的病人或者小孩具有良好的效果，且不良反应小，LEV于2000年经FDA获准在美国上市，2007年3月10日在中国上市(商品名开浦兰)。由于上述优点，该药物成了全世界妊娠期女性常用的抗癫痫药物。然而，因哺乳期妇女服用左乙拉西坦以后，母乳中是否含有左乙拉西坦以及含有的左乙拉西坦浓度均不清楚，导致很多服用左乙拉西坦的癫痫女性不敢给孩子喂母乳，最后只能直接选择奶粉喂养，增加了癫痫患者家庭的经济负担，最重要的是奶粉不含母乳所含的所有免疫成分，而且奶粉喂养也不能替代母乳喂养在培养亲子感情方面的重要作用。因此，有效检测母乳中的左乙拉西坦具有重要意义。但是，目前尚没有关于检测母乳中左乙拉西坦方法的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了一种母乳中左乙拉西坦的检测方法。本专利技术提供了一种母乳中左乙拉西坦的检测方法：它是采用高效液相色谱法进行检测，包括以下步骤：(1)供试品制备：取供试母乳，加入供试母乳5倍体积的乙酸乙酯混匀，离心，取乙酸乙酯层，吹干，复溶，作为供试品；(2)检测：取步骤(1)的供试品用高效液相色谱进行检测，检测条件为：固定相：C18色谱柱；流动相：甲醇-无机盐溶液，二者的体积比为17:83，所述无机盐溶液的pH为4.5；检测波长：210nm。进一步优选地，所述检测方法是定量检测方法，步骤如下：a、供试品制备：取供试母乳，加入1/9倍体积的对乙酰氨基酚标准品溶液，混匀，得内标供试母乳，再加入内标供试母乳5倍体积的乙酸乙酯混匀，离心，取乙酸乙酯层，吹干，复溶，作为供试品；b、标准品制备：取空白母乳，加入1/8倍体积的左乙拉西坦标准品溶液和1/8倍体积的对乙酰氨基酚标准品溶液，混匀，得标样母乳，再加入标样母乳5倍体积的乙酸乙酯，混匀，离心，取乙酸乙酯层，吹干，复溶，作为标准品；c、检测：取步骤a的供试品和步骤b的标准品，用高效液相色谱进行检测，检测条件为：固定相：C18色谱柱；流动相：甲醇-无机盐溶液，二者的体积比为17:83，所述无机盐的溶液的pH为4.5；检测波长：210nm；d、绘制标准曲线，计算供试品中左乙拉西坦的含量。进一步优选地，步骤a或步骤b中，对乙酰氨基酚标准品溶液的浓度为10μg/mL。母乳：是产后女性乳房产生的用作哺育婴儿的汁液。空白母乳：是指来自于未服用左乙拉西坦妇女的母乳。进一步优选地，步骤(1)、步骤a或步骤b中，离心的转速是4000r/min，离心的时间为10min。进一步优选地，步骤(1)、步骤a或步骤b中，吹干是在50℃条件下用氮气吹干。进一步优选地，步骤(1)、步骤a或步骤b中，复溶是采用步骤(2)中的流动相复溶。进一步优选地，步骤(2)或步骤c中，所述C18色谱柱的规格为150mm×4.6mm，填料粒径为5μm。进一步优选地，步骤(2)或步骤c中，所述流动相中，无机盐溶液是浓度为0.01mol/L的磷酸二氢钾溶液。进一步优选地，步骤(2)或步骤c中，流动相的流速1.0mL/min。进一步优选地，步骤(2)或步骤c中，检测的柱温为30℃。高效液相色谱是检测领域常用的检测方法，但是由于母乳本身的成分复杂，干扰杂质多，会干扰左乙拉西坦的测定，而且左乙拉西坦在母乳中的代谢产物也会干扰左乙拉西坦的测定，另外，由于母乳中左乙拉西坦的浓度低，不易富集，检测难度大。本专利技术通过特定的前处理方法与特定高效液相色谱检测条件的结合，达到了准确检测母乳中左乙拉西坦的目的，并且，本专利技术方法快速简便，专属性强，灵敏度高，稳定性好，可用于临床检测母乳中左乙拉西坦的浓度，为服用左乙拉西坦的哺乳期妇女喂母乳提供指导。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1为本专利技术试验例1空白母乳的高效液相色谱图。图2为本专利技术试验例1标样母乳的高效液相色谱图。图3为本专利技术试验例1供试母乳的高效液相色谱图。图4为按本专利技术试验例2方法所得的标准曲线图。图5为本专利技术试验例5拉莫三嗪的高效液相色谱图。图6为本专利技术试验例5奥卡西平的高效液相色谱图。具体实施方式本专利技术具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。具体如下：实验材料：左乙拉西坦标准品：12-YM-175-1,Toronto Research Chemicals Inc；甲醇：分析纯(20120921)，成都市科龙化工试剂厂；磷酸二氢钾：分析纯(20091010)，成都市科龙化工试剂厂；乙酸乙酯：分析纯(20120414)，成都市科龙化工试剂厂。主要实验仪器：高效液相色谱仪：LC-20AB，日本岛津公司；紫外扫描仪：UV-VIS282PC，Unico仪器有限公司。供试母乳来自服用了左乙拉西坦妇女的母乳。实施例1本专利技术定量检测方法(1)供试品的制备：取供试母乳180μL，置于1.5mL离心管中，加入浓度为10μg/mL的对乙酰氨基酚标准液20μL，旋涡混合20s，作为内标供试母乳。向上述内标供试母乳中加入1mL乙酸乙酯，旋涡混合20s，4000r/min离心10min，吸取上层乙酸乙酯层于1.5mL离心管中，在50℃水浴下用氮气吹干，加入100μL流动相后旋涡混合20s，作为供试品。(2)标准品的制备：取空白母乳160μL，置于1.5mL离心管中，加入浓度为10μg/mL的对乙酰氨基酚标准液20μL，再分别加入浓度为10，20，40，100，200和400μg/mL左乙拉西坦标准品溶液20μL，旋涡混合20s，使左乙拉西坦浓度分别为1，2，4，10，20，40μg/mL，作为标样母乳。向该标样母乳中加入1mL乙酸乙酯，旋涡混合20s，4000r/min离心10min，吸取上层乙酸乙酯层于1.5mL离心管中，在50℃水浴下用氮气吹干，加入100μL流动相后旋涡混合20s，作为标准品。(3)分别取供试品和标准品进行检测，进样量为20μL，色谱条件如下：色谱柱为Diamonsil C18(5μm 150mm×4.6mm)，流动相为甲醇-磷酸二氢钾(0.01mol/L，pH4.5)(17:83)，等度洗脱；柱温为30℃；流速为1mL/min；检本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种母乳中左乙拉西坦的检测方法，其特征在于：它是采用高效液相色谱法进行检测，包括以下步骤：(1)供试品制备：取供试母乳，加入供试母乳5倍体积的乙酸乙酯混匀，离心，取乙酸乙酯层，吹干，复溶，作为供试品；(2)检测：取步骤(1)的供试品用高效液相色谱进行检测，检测条件为：固定相：C18色谱柱；流动相：甲醇‑无机盐溶液，二者的体积比为17:83，所述无机盐溶液的pH为4.5；检测波长：210nm。
【技术特征摘要】
1.一种母乳中左乙拉西坦的检测方法，其特征在于：它是采用高效液相色谱法进行检测，包括以下步骤：(1)供试品制备：取供试母乳，加入供试母乳5倍体积的乙酸乙酯混匀，离心，取乙酸乙酯层，吹干，复溶，作为供试品；(2)检测：取步骤(1)的供试品用高效液相色谱进行检测，检测条件为：固定相：C18色谱柱；流动相：甲醇-无机盐溶液，二者的体积比为17:83，所述无机盐溶液的pH为4.5；检测波长：210nm。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述检测方法是定量检测方法，步骤如下：a、供试品制备：取供试母乳，加入1/9倍体积的对乙酰氨基酚标准品溶液，混匀，得内标供试母乳，再加入内标供试母乳5倍体积的乙酸乙酯混匀，离心，取乙酸乙酯层，吹干，复溶，作为供试品；b、标准品制备：取空白母乳，加入1/8倍体积的左乙拉西坦标准品溶液和1/8倍体积的对乙酰氨基酚标准品溶液，混匀，得标样母乳，再加入标样母乳5倍体积的乙酸乙酯，混匀，离心，取乙酸乙酯层，吹干，复溶，作为标准品；c、检测：取步骤a的供试品和步骤b的标准品，用高效液相色谱进行检测，检测条件为：固定相：C18色谱柱；流动相：甲醇-无机盐溶液，二者的体积比为1...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈蕾，周东，谢贞建，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：四川;51
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