一种具有抗炎作用的蛋白及其制备与应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及一种具有抗炎作用的蛋白及其制备与应用。所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述蛋白不会产生过度的免疫排斥反应；其次，所述蛋白对TLR信号通路的干扰作用存在剂量依赖关系，通过降低作用浓度使其产生适度的抑制，但却不损害宿主的防御能力，以避免过度抑炎反应造成的副作用；所述蛋白与临床所应用的抗炎症因子抗体不同的是，它们针对的不是单一一种致炎因子，而是多种因子、多条途径，利于损伤组织的修复。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体涉及一种具有抗炎作用的蛋白及其制备与应用。
技术介绍
沙门菌是一类人兽共患的肠道致病菌，在全球范围内每年大约有13亿人因感染沙门菌而导致胃肠炎、腹泻和伤寒等疾病。天然免疫系统作为机体第一道免疫防线，可以通过模式识别受体(Pattern recognition receptors,PRRs)识别病原相关分子模式(Pathogen-associated molecular patterns,PAMPs)，激活核转录因子κB(Nuclear factorκB,NFκB)信号通路，诱导产生前炎性细胞因子和抗菌肽来抵抗病原微生物的入侵。NFκB通路的激活对防御病原微生物的侵袭尤为重要，然而，信号的异常活化可能会引起炎性和自身免疫疾病或癌症。许多感染性疾病、自身免疫病和恶性肿瘤都会引发机体产生过度炎症反应，因而靶向天然免疫应答和信号传递的药物具有潜在的医疗前景。在革兰氏阴性菌引起的败血症病人中，TLR4拮抗剂可用于预防因LPS引起的内毒素性休克，目前已有两种脂质A类似物TAK-242和Eritoran被批准用于治疗败血病人的临床试验。TLRs拮抗剂可用于治疗自身免疫性疾病，尤其是系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)。TLR7和TLR9参与了机体自身抗体的产生，并靶向内源性TLR配体，同时也是pDC介导的Ⅰ型IFN产生所必需的。靶向TLRs的治疗学方法可能会有效地抑制自身免疫疾病的发展和恶化。细菌逃逸TLRs-NFκB信号通路的机制为未来抗炎性药物的研究提供了理论基础。微生物已经进化出相应的策略来抑制机体的炎性应答，这些细菌效应分子本身或经修饰后或许会具有治疗药物的潜能。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种具有抗炎作用的蛋白及其制备与应用，该蛋白能够干扰TLR信号通路，并抑制炎性细胞因子的分泌，具有抑制炎症反应的功能。本专利技术一方面提供了一种分离的蛋白，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，具体为：MSISTTMSNINRIQKDIASLQKQLSDEQRKEAQLSGKINQIKRSVTKSTSLSTLNSKMSEISR
HKNDISRCNSKKADINKKITAKTGDLHRYQLQLIKEQENDQKKRIAAQKKLEKEQLDYQKKITRELKSQKRAISPSHKFNRPVINKSDETEDITESYDVFISHATEDKDSFVRPLAELLRAKGINVWYDEFSLGWGKSLRKTIDYGLANSRFGVVVLSKSFIKKDWTEYELNGLTAREMSGENQVILPIWHEVSKSDILKFSPTLVDKMALNTSINTIDEIAEQLESLLK。在本专利技术的实施例中，将本专利技术的蛋白，取名为TcpS。本专利技术第二方面提供了一种分离的多核苷酸，其编码所述蛋白。本专利技术的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。进一步的，所述多核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，具体为：ATGTCTATAAGCACCACAATGTCAAATATCAACAGAATACAAAAAGACATTGCTAGTCTACAAAAACAACTTTCTGATGAGCAGCGTAAAGAGGCCCAACTTTCAGGAAAAATCAATCAAATAAAGCGTAGCGTCACTAAGTCAACGTCTTTAAGCACATTGAATTCCAAAATGTCAGAGATCTCTCGTCATAAAAATGATATTTCAAGATGTAACTCTAAAAAAGCAGATATTAATAAAAAAATAACAGCAAAAACTGGAGACTTACACCGTTATCAATTACAACTCATTAAAGAGCAAGAGAATGACCAGAAAAAAAGAATTGCTGCACAGAAGAAACTTGAAAAAGAACAATTAGATTACCAGAAGAAAATCACACGAGAATTGAAATCGCAGAAAAGGGCAATATCTCCAAGCCATAAATTCAATCGTCCAGTCATCAACAAATCTGATGAGACAGAAGATATTACAGAGAGTTATGATGTTTTTATCTCTCATGCAACAGAAGATAAAGATAGTTTTGTCCGTCCCCTTGCTGAGTTGTTAAGAGCAAAAGGGATAAATGTATGGTATGACGAATTCTCTTTAGGCTGGGGTAAAAGTCTACGTAAGACAATCGATTATGGATTAGCAAATTCTCGGTTTGGAGTTGTTGTTTTATCTAAATCCTTTATCAAAAAGGACTGGACAGAGTATGAATTAAATGGTTTGACTGCTAGAGAGATGAGCGGTGAAAACCAAGTAATACTGCCTATCTGGCACGAAGTATCTAAATCTGATATTTTAAAATTCAGCCCTACACTAGTAGATAAAATGGCATTAAATACATCGATAAATACCATTGATGAAATTGCTGAACAGCTTGAATCATTATTGAAATGA。本专利技术第三方面提供了一种表达载体，其含有前述多核苷酸。本领域的技术人员熟知的方法能用于构建所述表达载体。这些方法包括重组DNA技术、DNA合成技术等。可将编码所述蛋白的DNA有效连接到表达载体中的适当启动子上，以指导mRNA合成，进而表达蛋白。较佳的，所述表达载体为真核表达载体。进一步的，所述真核表达载体可在HEK293T
和RAW264.7真核细胞内稳定表达，如真核载体pCMV-Myc等。本专利技术第四方面提供了一种宿主细胞，其被前述表达载体所转化。宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有：大肠杆菌，链霉菌属；鼠伤寒沙门菌的细菌细胞；真菌细胞如酵母；植物细胞；果蝇S2或Sf9的昆虫细胞；CHO,COs.293细胞、或Bowes黑素瘤细胞的动物细胞等。本专利技术的实施例中，采用的宿主细胞为HEK293T和RAW264.7细胞。本专利技术第五方面提供了所述蛋白的制备方法，包括下列步骤：1)在适合表达所述蛋白的条件下，培养上述被转化的宿主细胞；2)从培养物中分离出所述蛋白。从培养物中分离出具有抗炎作用的蛋白的方法可采用镍柱纯化法提取。本专利技术第六方面，提供了与上述蛋白特异结合的抗体。本专利技术第七方面，提供了检测样品中是否存在所述蛋白的方法，所述方法包括：将样品与所述蛋白的特异性抗体接触，观察是否形成抗体复合物，形成了抗体复合物就表示样品中存在所述蛋白。本专利技术第八方面，提供了本专利技术前述分离的蛋白、前述分离的多核苷酸、前述表达载体、或前述宿主细胞在制备抗炎药物中的用途。较佳的，所述用途中抗炎药物具体是指干扰TLR信号通路并抑制炎性细胞因子分泌的药物。本专利技术第九方面，提供了一种抗炎药物组合物，所述组合物包含本专利技术前述分离的蛋白、前述分离的多核苷酸、前述表达载体、或前述宿主细胞。进一步的，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体或赋形剂。本领域枝术人员已知本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的蛋白，其特征在于，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

【技术特征摘要】
1.一种分离的蛋白，其特征在于，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码如权利要求1所述的蛋白。3.根据权利要求2所述的分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。4.一种表达载体，其含有如权利要求2或3所述多核苷酸。5.一种宿主细胞，其被权利要求4所述的表达载体转化。6.一种制备如权利要求1所述的蛋白的方法，包括如下步骤：1)在适合权利要求1所述的蛋白表达的条件下，培养权利要求5所述的宿主细胞；2)从培养物中分离出...

【专利技术属性】
技术研发人员：焦新安，潘志明，熊丹，宋丽，焦扬，孙林，陈祥，耿士忠，黄金林，殷月兰，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32