一种检测禽和猪组织中哌嗪残留的确证分析方法技术

本发明专利技术涉及兽药残留检测领域，具体涉及一种高效检测禽和猪组织(肌肉、肝脏、肾脏和皮脂)中哌嗪残留的确证分析方法。该方法是将组织样品经过加速溶剂萃取法提取、净化和衍生化处理后，用气相色谱‑串联质谱法(GC/MS‑MS)进行检测。本发明专利技术在回收率、精密度和灵敏度三个方面与其他检测方法进行比较，具有简单、快速、准确和灵敏的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及兽药残留检测领域，具体涉及一种检测禽和猪组织中哌嗪残留的确证分析方法。
技术介绍
目前国内外对哌嗪的残留检测方法虽有不少报道，主要有重量分析法、比色法、非水滴定法、气相色谱法、高效液相色谱法和(超)高效液相色谱-串联质谱法等，但重量分析法、比色法和非水滴定法不适合生物样品中哌嗪的检测，灵敏度较低。在液相色谱上，哌嗪无发光基团，不能直接被紫外检测器或荧光检测器检测，故常通过柱前衍生使哌嗪带上特定基团，从而使检测成为可能。而到目前为止，通过较为简单的乙酸酐柱前衍生法检测动物组织中哌嗪残留的气相色谱-串联质谱法(GC-MS/MS)的研究国内、外均尚未见报道。
技术实现思路
为了能检测并确证哌嗪在禽和猪组织中的残留，满足欧盟标准，本专利技术提供了一种气相色谱-串联质谱法(GC-MS/MS)，能快速、准确地检测禽和猪组织中哌嗪的残留。本专利技术所采用的技术方案是：一种检测禽和猪组织中哌嗪残留的确证分析方法，是将组织样品经过提取、净化和柱前衍生化后，进行气相色谱-串联质谱法(GC-MS/MS)检测。以高纯氦气(99.999％)为载气，流速为1.0mL/min，程序升温模式，不分流进样，进样体积：1.0μL。采用电子轰击(EI)离子源，全扫描(SCAN)和选择离子监测(SIM)方式定性，选择反应监测(Auto SRM)方式定量。所述的禽和猪组织样品提取、净化和衍生化具体内容是：将均质好的组织样品，在研钵中与3.0g无水硫酸钠研磨混匀吸收样品水分，再加入3.0g左右硅藻土研磨至粉状混匀，装填入加速溶剂萃取仪22mL不锈钢萃取池中，在80℃和1500psi压力条件下静态萃取5min，氮气吹扫60s，每个萃取池萃取两次，第一次使用正己烷，去脂用，收集液弃掉，第二次萃取液收集于60mL收集瓶，转移至50mL离心管，即得提取液。提取液过Strata-X-C固相萃取小柱，依次用3mL甲醇、3mL 2.0％甲酸水溶液将SPE小柱活化平衡，上样后待提取液匀速流干后，再依次用3mL 0.1mol/L的盐酸水溶液、3mL 0.1mol/L的盐酸甲醇淋洗，待小柱干燥后，最终用2mL 5.0％氨水甲醇分两次进行洗脱，收集洗脱液于2mL具塞离心管中。将上述装有净化收集液的具塞离心管，置于离心浓缩仪中，40℃真空负压浓缩至干，后加入1.0mL二氯甲烷溶解残渣，涡旋混匀后，转移至10mL玻璃小瓶，并加入50μL乙酸酐和100μL三乙胺，拧紧瓶盖，于50℃温度下衍生30min后取出，冷却至室温，衍生后液体并洗涤液转移至2mL具塞离心管，涡旋振荡使基质混匀，12000×g，常温离心10min，将上层清液过0.22μm滤膜，滤液供GC-MS/MS测定分析。本专利技术在回收率、精密度和灵敏度三个方面与其他检测方法进行比较，本方法具有简单、快速、准确和灵敏的优点。附图说明图1哌嗪衍生后产物(1,4-二乙酰基哌嗪)质谱图。图2哌嗪标准工作曲线(n＝7)。图3空白鸡组织(肌肉、肝脏、肾脏和皮肤+脂肪)样品的总离子流图(TIC)和定量离子的质量色谱图(MC)。图4空白鸡组织(肌肉、肝脏、肾脏和皮肤+脂肪)样品添加100.00μg/kg标准品的混合总离子流图(MIC)和定量离子总离子流图(TIC)。图5空白鸭组织(肌肉、肝脏、肾脏和皮肤+脂肪)样品的总离子流图(TIC)和定量离子的质量色谱图(MC)。图6空白鸭组织(肌肉、肝脏、肾脏和皮肤+脂肪)样品添加100.00μg/kg标准品的混合总离子流图(MIC)和定量离子总离子流图(TIC)。图7空白鹅组织(肌肉、肝脏、肾脏和皮肤+脂肪)样品的总离子流图(TIC)和定量离子的质量色谱图(MC)。图8空白鹅组织(肌肉、肝脏、肾脏和皮肤+脂肪)样品添加100.00μg/kg标准品的混合总离子流图(MIC)和定量离子总离子流图(TIC)。图9空白猪组织(肌肉、肝脏、肾脏和皮肤+脂肪)样品的总离子流图(TIC)和定量离子的质量色谱图(MC)。图10空白猪组织(肌肉、肝脏、肾脏和皮肤+脂肪)样品添加100.00μg/kg标准品的混合总离子流图(MIC)和定量离子总离子流图(TIC)。具体实施方式在本专利技术中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细地描述本专利技术。这些实施例只是为了举例说明本专利技术，而非以任何方式限制本专利技术的范围。在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其后所用相同试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。1.试验家禽和猪的饲养和样品采集分别选取上市日龄三元杂交猪和家禽，即16周龄京海黄鸡、10周龄扬州鹅、8周龄樱桃谷鸭各12羽以及6月龄杜×长×大三元杂交猪6头，公、母各半，单笼(栏)饲养，饲喂不含任何药物的全价饲料，自由饮水。饲养2周后屠宰时分别取供试动物的肌肉、肝脏、肾脏和皮肤和脂肪组织作为空白组织样品，-35℃保存，使用时将该样品绞碎使之均质。2.本专利技术提取、净化与衍生化步骤1)准确称取(2.0±0.02)g均质好的空白组织样品，在研钵中与3.0g无水硫酸钠研磨混匀吸收样品水分；2)再加入3.0g左右硅藻土研磨至粉状混匀后，装填入22mL不锈钢萃取池；3)在80℃和1500psi条件下，静态萃取5min。每个萃取池萃取两次(各5min)，第一次使用正己烷，去脂用，收集液弃掉，第二次使用纯乙腈，萃取用，萃取液收集于60mL收集瓶，转移至50mL离心管使用纯乙腈；4)依次分别用3.0mL甲醇和3.0mL 2.0％甲酸水溶液将混合阳离子固相萃取小柱(Strata-X-C)活化；5)向活化后的固相萃取小柱中加入提取液，匀速流干后，依次用3mL 0.1mol/L的盐酸水溶液和3mL 0.1mol/L的盐酸甲醇淋洗；6)待固相萃取小柱干燥后，用2mL 5.0％氨水甲醇分两次进行洗脱，将哌嗪洗脱至2mL离心管中；7)将离心管置于离心浓缩仪中，40℃真空负压浓缩至干；8)加入1.0mL二氯甲烷溶解残渣，涡旋混匀后，转移至10mL玻璃小瓶；9)加入50μL乙酸酐和100μL三乙胺，拧紧瓶盖，于50℃温度下衍生30min；10)衍生后液体并洗涤液转移至2mL具塞离心管，涡旋振荡使基质混匀，12000×g，常温离心10min，将上层清液过0.22μm滤膜，滤液供GC-MS/MS测定分析。3试验条件3.1气相色谱条件色谱柱：色谱柱：TG-5MSAmine(30m×0.25mm i.d.×0.25μm)；载气：高纯氦气(>99.999％，60psi)，载气柱流速：1.0mL/min；程序升温参数：80℃保持1min，20℃/min升至280℃，保持1min。进样口温度：280℃；分流模式：不分流进样，分流流量：50.0mL/min；2min后开阀(载气节省时间2min，载气节省流量20mL/min)；不分流时间：1.0min；进样体积：1.0μL。3.2质谱条件电离模式：电子轰击(EI)；电子束能量(电离能)：70eV；碰撞气：高纯氩气(>99.999％，40psi)；离子源温度：280℃；传输线温度：280℃；本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效检测禽和猪组织中哌嗪残留的新的确证分析方法，其特征在于，将禽和猪组织样品经过提取、净化和衍生化处理后，用气相色谱‑串联质谱法检测。

【技术特征摘要】
1.一种高效检测禽和猪组织中哌嗪残留的新的确证分析方法，其特征在于，将禽和猪组织样品经过提取、净化和衍生化处理后，用气相色谱-串联质谱法检测。2.根据权利要求1所述的方法，气相色谱-串联质谱的条件是：以>99.999％日高纯氦气为载气，流速为1.0mL/min，程序升温，进样量为1.0μL；采用电子轰击离子源，选择离子监测定性，选择反应监测结合外标法定量分析。3.根据权利要求1所述的方法，所述的组织样品的提取、净化和衍生化处理是：组织样品采用加速溶剂萃取仪经正己烷去脂、乙腈萃取的在线过程，提取液用固相萃取法净化、乙酸酐衍生法衍生。4.根据权利要求3所述的方法，所述的组织样品提取、净化和衍生化的具体步骤是：均质好的组织样品，在研钵中依...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢恺舟，刘亚楠，庞茂达，谢星，崔璐璐，王波，高强，张杨杨，张跟喜，戴国俊，卜仕金，王冉，王金玉，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32