一种柴胡多糖的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种柴胡多糖的提取方法，它包括如下步骤：a、预处理：取柴胡，粉碎，脱脂；b、水提：向脱脂柴胡粗粉中加入30～50倍体积量的水提取，提取温度为80～100℃，提取时间3～5h，提取两次，合并提取液；c、醇沉：浓缩提取液，加入乙醇，静置，收集沉淀，即得柴胡多糖提取物。实验结果表明，采用该方法可显著提高柴胡多糖的提取率及提取物中多糖含量，并且可以减少提取过程中杂质的溶出、减少了提取物中的结合蛋白，有利于提高后续纯化过程的效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种柴胡多糖的提取方法，属于医药领域。
技术介绍
柴胡为伞形科植物北柴胡(Bupleurum chinese DC.)或狭叶柴胡(Bupleurum scorzonerifolium Willd.)的干燥根，系常用中药。目前已有大量关于柴胡药理作用和化学成分的文献报道，现代研究表明，柴胡多糖是其重要的生物活性成分之一，具有抗辐射、降血脂、增强免疫功能和抗病毒等作用，还有较强的抗溃疡作用，对肝炎和系统性红斑狼疮、肾炎、类风湿关节炎等自身免疫性疾病具有重要的临床价值。然而，已有研究证实，柴胡多糖的相对分子量在1×104～1.2×105之间，分子量大且黏度较高，导致其难以穿透细胞生物膜、难以扩散出细胞外，成为限制其提取转移率的主要原因(周泽琴等.中药水提取有效成分转移率低的问题分析[J].中草药，2014，45(23)：3478～3485)。因此，如何有效提高柴胡多糖的提取率和提取物中多糖含量，成为了柴胡多糖资源开发利用中面临的一大难题。目前已有不少研究者进行了提高柴胡多糖提取率和多糖纯度的努力，然而并未取得令人满意的结果。李岱等采用超声波辅助提取柴胡多糖，在充分优化各个条件参数(比如超声波功率、超声波作用时间、料液比等等)的情况下，也仅仅将柴胡多糖的提取率由传统水提工艺的2.09％提高至2.58％，将多糖纯度由38.14％提高至44.14％(李岱等.超声波处理对柴胡多糖提取率、微观形貌特征及生物活性的影响[J].生物加工过程，2009，7(2)：29～34)。可见，由于柴胡多糖特殊的理化性质，充分提高其提取率及纯度非常困难。因此，提供一种工艺简单的提取方法，最大限度从柴胡中提取出多糖成分并提高多糖纯度，成为了一个亟待解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种柴胡多糖的提取方法，以解决现有方法提取率低、多糖纯度不高的问题。本专利技术提供了一种柴胡多糖的提取方法，它包括如下步骤：a、预处理：取柴胡，粉碎，脱脂；b、水提：向脱脂柴胡粗粉中加入30～50倍体积量的水提取，提取温度为80～100℃，提取时间3～5h，提取两次，合并提取液；c、
醇沉：浓缩提取液，加入乙醇，静置，收集沉淀，即得柴胡多糖提取物。其中，所述的脱脂条件为：向柴胡粗粉中加入5倍体积量的95％v/v乙醇水溶液，于80℃回流，每次2小时，直至溶剂无色，弃去溶剂，得脱脂柴胡粗粉。其中，所述的醇沉条件为：醇沉时乙醇体积百分数为75％，醇沉时间为22h。进一步的，所述的水提条件为：向脱脂柴胡粗粉中加入30～50倍体积量的水提取，提取温度为84～100℃，提取时间4～5h。更进一步的，所述的水提条件为：向脱脂柴胡粗粉中加入34～46倍体积量的水提取，提取温度为95～100℃，提取时间4～5h。更进一步的，所述的水提条件为：向脱脂柴胡粗粉中加入38～40倍体积量的水提取，提取温度为98～100℃，提取时间4～5h。优选的，所述的水提条件为：向脱脂柴胡粗粉中加入38倍体积量的水提取，提取温度为98℃，提取时间4h。进一步优选的，所述的提取方法还包括Sevage除蛋白步骤。其中，所述的Sevage除蛋白条件为：加入柴胡多糖提取物1/5体积量的sevag试剂，震荡20min，4000r/min离心15min，分离得到上清液；采用相同方法处理4次，收集最终得到的上清液，加入95％v/v乙醇至乙醇浓度达80％v/v，于4℃静置22h后取出，4000r/min离心10min，收集沉淀，用无水乙醇、丙酮和乙醚依次各洗涤2次，得精制柴胡多糖提取物。本专利技术提供了一种根据所述提取方法制备得到的柴胡多糖提取物。本专利技术提供了一种柴胡多糖的提取方法。实验结果表明，采用该方法可显著提高柴胡多糖的提取率及提取物中多糖含量，并且可以减少提取过程中杂质的溶出、减少了提取物中的结合蛋白，有利于提高后续纯化过程的效率。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1为醇沉时间对柴胡多糖得率(左)和多糖含量(右)的影响图；图2为醇沉浓度对柴胡多糖得率(左)和多糖含量(右)的影响图；图3为料液比对柴胡多糖得率(左)和粗多糖含量(右)的影响图；图4为提取温度对柴胡多糖得率(左)和粗多糖含量(右)的影响图；图5为提取时间对柴胡多糖得率(左)和粗多糖含量(右)的影响图；图6为提取次数对柴胡多糖得率(左)和粗多糖含量(右)的影响图。具体实施方式本专利技术具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。柴胡多糖测定方法以D(+)-无水葡萄糖为对照品，采用苯酚-浓硫酸法测定多糖含量1、对照品溶液制备精密称取105℃下干燥恒重的D(+)-无水葡萄糖对照品20mg，置100mL容量瓶中加水溶解定容摇匀,得0.2mg·mL-1对照品溶液备用。2、供试品溶液制备精密称取干燥置恒重的柴胡粗多糖20mg，置100mL容量瓶中加水溶解定容，摇匀即得0.2mg·mL-1供试品溶液，备用。3、线性关系考察分别精密量取对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL置10mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀即得不同浓度葡萄糖对照品溶液。再分别吸取上述配制的各浓度葡萄糖对照品溶液2.0mL置10mL干燥具塞刻度试管中，分别加入新配置的5％苯酚溶液1.0mL，再迅速加入浓硫酸5.0mL，摇匀，沸水浴中加热15min，再置冰水浴中冷却，室温放置10min，于490.5nm处测定吸光度(A)，以葡萄糖质量浓度(C)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标，进行线性回归，建立回归方程A＝0.06167C+0.05393，r＝0.9996，结果表明葡萄糖在2.49μg·mL-1～12.34μg·mL-1范围内线性关系良好。4、柴胡多糖得率及含量的计算柴胡多糖得率(％)＝[(样品液浓度*稀释倍数*样品液体积)/柴胡试样质量]*100％柴胡多糖含量(％)＝[(样品液浓度*稀释倍数*样品液体积)/粗多糖质量]*100％实施例1 本专利技术柴胡多糖提取方法预处理：将柴胡饮片进行粉碎，过40目筛，向柴胡粗粉中加入5倍体积
量的95％v/v乙醇水溶液，于80℃回流，每次2小时，直至溶剂无色，弃去溶剂，得脱脂柴胡粗粉，过5号筛。水提：取脱脂柴胡粗粉2g，加入38倍体积量的水提取，提取温度为98℃，提取时间4h，提取两次，合并提取液。醇沉：浓缩提取液至原液体积1/5，加入95％v/v乙醇使醇沉浓度达75％v/v，静置22h，收集沉淀，即得柴胡多糖提取物0.2352g，多糖提取率为6.29％，多糖含量为53.57％。脱蛋白：sevag试剂[氯仿：正丁醇＝4：1(V/V)]:柴胡多糖提取物＝1：5(V/V)，剧烈震荡20min，高速离心机离心15min(4000r/min)，分离得到上清液，对上清液反复脱蛋白4次，再次分离得到上清液，加入95％乙醇至乙醇浓度达80％，置4℃冰箱内静置22小时后取出离本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种柴胡多糖的提取方法，其特征是：它包括如下步骤：a、预处理：取柴胡，粉碎，脱脂；b、水提：向脱脂柴胡粗粉中加入30～50倍体积量的水提取，提取温度为80～100℃，提取时间3～5h，提取两次，合并提取液；c、醇沉：浓缩提取液，加入乙醇，静置，收集沉淀，即得柴胡多糖提取物。

【技术特征摘要】
1.一种柴胡多糖的提取方法，其特征是：它包括如下步骤：a、预处理：取柴胡，粉碎，脱脂；b、水提：向脱脂柴胡粗粉中加入30～50倍体积量的水提取，提取温度为80～100℃，提取时间3～5h，提取两次，合并提取液；c、醇沉：浓缩提取液，加入乙醇，静置，收集沉淀，即得柴胡多糖提取物。2.如权利要求1所述的提取方法，其特征是：所述的脱脂条件为：向柴胡粗粉中加入5倍体积量的95％v/v乙醇水溶液，于80℃回流，每次2小时，直至溶剂无色，弃去溶剂，得脱脂柴胡粗粉。3.如权利要求1所述的提取方法，其特征是：所述的醇沉条件为：醇沉时乙醇体积百分数为75％，醇沉时间为22h。4.如权利要求1所述的提取方法，其特征是：所述的水提条件为：向脱脂柴胡粗粉中加入30～50倍体积量的水提取，提取温度为84～100℃，提取时间4～5h。5.如权利要求4所述的提取方法，其特征是：所述的水提条件为：向脱脂柴胡粗粉中加入34～46倍体积量的水提取，提取温度为95～100℃，提取时间4～...

【专利技术属性】
技术研发人员：李小芳，林浩，
申请(专利权)人：成都中医药大学，
类型：发明
国别省市：四川;51