本发明专利技术公开了一种关于外生菌根快速合成技术，包括以下步骤：采用组织分离法，在无菌的条件下取外生菌根真菌的菌盖组织接种于MMN培养基上避光培养，在菌根合成袋内，用分离获得的菌丝体纯培养对二至三个月苗龄的树苗进行接种，置于光照培养箱内培养半个月至三个月即可得到菌根。本方法便于筛选最适的树种与外生菌根真菌共生组合，缩短周期，提高效率，降低成本，指导菌根型食用菌的人工栽培。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，具体涉及一种外生菌根合成技术，尤其涉及一种快速高效的外生菌根合成技术。
技术介绍
外生菌根真菌与树木形成外生菌根后，使外生菌根具有诸多功能，比如促进林木生长、增强营养吸收、增强抗病性、抗旱性并且改良土壤结构，对于保护生物多样性以及维护生态平衡具有积极的意义。近年来的研究中有一些关于红汁乳菇和松乳菇菌根合成的方法，但是周期普遍较长且过程复杂，本专利技术公开了一种外生菌根快速、高效的合成方法，为外生菌根真菌的人工栽培打下良好的基础。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种外生菌根快速合成方法，以便于筛选最适的树种与外生菌根真菌共生组合，缩短周期，提高效率、降低成本，指导人工栽培。为了实现本专利技术的上述目的，本专利技术提供了如下的技术方案：一种外生菌根的合成方法，包括以下步骤：(1)采用组织分离法，无菌的条件下，取外生菌根真菌的菌盖菌肉接种于MMN培养基上避光培养；(2)将步骤(1)分离得到的菌丝体纯培养与三个月苗龄的共生树种幼苗于菌根接种袋中接种，加入MMN营养液，置于光照培养箱中培养半个月-三个月，得到菌根。根据所述的外生菌根的合成方法，其中所述步骤(1)中MMN培养基配方为MgSO4.7H2O 1.5g，KH2PO4 3g，酵母浸膏5g，葡萄糖10g，麦芽糖10g，VB1 0.01g，NaCl 0.058g，CaCl2 1.11g，柠檬酸铁1.5×10-2g，PDA 24g，琼脂7g(1L)；所述的MMN营养液配方为：MgSO4.7H2O 1.5g，KH2PO4 3g，酵母浸膏5g，葡萄糖10g，麦芽糖10g，VB1 0.01g，NaCl 0.058g，CaCl2 1.11g，柠檬酸铁1.5×10-2g，PDA24g。根据所述的外生菌根的合成方法，其中所述步骤(2)中树幼苗的获得是采用：共生树种用自来水清洗三遍后，用75％酒精浸泡30分钟进行表面消毒，无菌水冲洗三遍后播于装有1:1的蛭石和珍珠岩的塑料筐内，在精控温室条件空气温度20-25℃、基质湿度60-70％下培养，无菌水浇灌；育苗基质蛭石和珍珠岩需先在121℃、0.1MPa中灭菌1h，
灭菌结束后放置3天后，在同样条件中再次灭菌1次。根据所述的外生菌根的合成方法，其中所述步骤(2)中树幼苗接种前将幼苗主根根尖剪去1-2cm，以便于侧根的生长以及侵染。根据所述的外生菌根的合成方法，其中所述步骤(2)中接种袋为长25cm、宽15cm的聚丙烯培养袋，剪裁大小合适的滤纸于袋中，袋的底部左右两侧分别放置长3cm、宽3cm、厚3cm的海绵，便于后期吸水保湿。根据所述的外生菌根的合成方法，其中所述步骤(2)中接种时将树幼苗置于培养袋中间位置，选取已分割好的菌块附着于共生树种幼苗侧根，一棵苗需要3块菌块，加入50ml营养液，封口；所述菌块是指在无菌条件下，将长满菌丝体的培养基用接种刀划分成1cm×1cm大小的正方型菌块。根据所述的外生菌根的合成方法，其中所述步骤(2)中光照培养箱设定温度为23℃，湿度为55％，12h光照，12h黑暗。根据所述的外生菌根的合成方法，该方法包括下述步骤：(1)外生真菌菌种的分离和纯化：在无菌的条件下取外生真菌的菌盖接近菌褶处组织，接种于MMN培养基平板上28℃避光培养，MMN培养基配方为：MgSO4.7H2O：1.5g，KH2PO4：3g，酵母浸膏：5g，葡萄糖：10g，麦芽糖：10g，VB1：0.01g，NaCl：0.058g，CaCl2：1.11g，柠檬酸铁：1.5×10-2g，PDA24g，琼脂：7g(1L)；MMN营养液配方为：MgSO4.7H2O 1.5g，KH2PO4 3g，酵母浸膏5g，葡萄糖10g，麦芽糖10g，VB1 0.01g，NaCl 0.058g，CaCl2 1.11g，柠檬酸铁1.5×10-2g，PDA24g。(2)无菌苗培养：共生树种子用自来水清洗三遍后，用75％酒精浸泡30分钟进行表面消毒，无菌水冲洗三遍，育苗基质蛭石和珍珠岩按1:1配比，灭菌后置于塑料筐内，所育苗均于大棚温室10-30℃条件下培养，自来水浇灌；育苗基质蛭石和珍珠岩预先在121℃、0.1MPa下灭菌2h，灭菌结束后放置3天，之后同样条件再次灭菌；(3)接种：共生树种栽培3个半月后，准备接种，接种前将共生树种幼苗主根根尖剪去1-2cm，便于侧根的生长以及侵染；外生真菌菌丝体平板长满后，在无菌条件下，用接种刀将菌丝体划分成1cm×1cm大小的正方形备用；接种袋为长25cm、宽17cm的自封袋，剪裁大小合适的滤纸于袋中，袋的底部左右两侧分别放置长3cm、宽3cm、厚3cm的海绵，便于后期吸水保湿；将幼苗置于接种袋中间位置，选取已分割好的外生真菌菌块附着于幼苗侧根，一棵苗需要3块菌块，加入50ml MMN营养液，所述的MMN
营养液配方为：MgSO4.7H2O 1.5g，KH2PO4 3g，酵母浸膏5g，葡萄糖10g，麦芽糖10g，VB1 0.01g，NaCl 0.058g，CaCl2 1.11g，柠檬酸铁1.5×10-2g，PDA24g；封口；置于培养箱设定温度为23℃，湿度为55％，12h光照，12h黑暗，培育3个月，从无菌苗根系上得带外生真菌的菌根；(4)菌根鉴定：对得到的菌根进行DNA提取，并对其PCR产物进行测序，证明所得菌根为外生真菌。本方法便于筛选最适的树种与外生菌根真菌共生组合，缩短周期，提高效率、降低成本，指导人工栽培。附图说明：图1为本专利技术菌根合成袋示意图，图中：1为自封袋，2为松木苗，3为接种的菌丝体块，4为海绵块，5为层析纸。具体实施方式下面结合附图，用本专利技术的实施例来进一步说明本专利技术的实质性内容，但并不以此来限定本专利技术。实施例1乳牛肝(Suillus bovinus)与落叶松(Larix gmelinii)的快速菌根合成方法：乳牛肝的子实体鉴别：点柄乳牛肝菌子实体中等大。菌盖扁半球形或近扁平，直径5.2-10cm，淡黄色或黄褐色，湿时粘滑，干后有光泽。菌肉淡黄色，受伤后不变色。菌管淡黄色，直生或稍延生，管口三角形。菌柄近柱形、实心，淡黄褐色，长3-10cm，粗0.8-1.6cm，顶端偶有约1cm长的网纹，菌柄一半或全部有暗色腺体和腺点，伤时有乳汁流出。孢子无色到淡黄色，长椭圆形，(6.5-9.1)μm×(2.6-3.9)μm。乳牛肝菌种分离、纯化：在无菌的条件下取乳牛肝(Suillus bovinus)的菌盖接近菌褶处组织，接种于MMN培养基平板上28℃避光培养，MMN培养基配方为：MgSO4.7H2O：1.5g，KH2PO4：3g，酵母浸膏：5g，葡萄糖：10g，麦芽糖：10g，VB1：0.01g，NaCl：0.058g，CaCl2：1.11g，柠檬酸铁：1.5×10-2g，PDA 24g，琼脂：7g(1L)。MMN营养液配方为：MgSO4.7H2O 1.5g，KH2PO4 3g，酵母浸膏5g，葡萄糖10g，麦芽糖10g，VB1 0.01g，NaCl 0.058g，CaCl2 1.11g，柠檬酸铁1.5×10-2g，PDA 24g。无菌苗培养：落叶松种子用自来水清洗三遍后，用75％酒精浸泡30分钟进行表面消毒，无菌水冲洗三遍，育苗基质蛭石和珍珠岩按1:1配比，灭菌后置于塑本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种外生菌根的合成方法，包括以下步骤：(1)采用组织分离的方法，在无菌条件下，取外生菌根真菌的菌肉组织接种于MMN培养基上避光培养；(2)将步骤(1)在菌根接种袋内，用分离得到的菌丝体纯培养与三个月苗龄的共生树种幼苗进行接种，加入MMN营养液，置于光照培养箱中培养半个月至三个月，即可得到菌根。
【技术特征摘要】
1.一种外生菌根的合成方法，包括以下步骤：(1)采用组织分离的方法，在无菌条件下，取外生菌根真菌的菌肉组织接种于MMN培养基上避光培养；(2)将步骤(1)在菌根接种袋内，用分离得到的菌丝体纯培养与三个月苗龄的共生树种幼苗进行接种，加入MMN营养液，置于光照培养箱中培养半个月至三个月，即可得到菌根。2.根据权利要求1所述的外生菌根合成方法，其特征在于，所述步骤(1)中MMN培养基配方为MgSO4.7H2O 1.5g，KH2PO4 3g，酵母浸膏5g，葡萄糖10g，麦芽糖10g，VB1 0.01g，NaCl 0.058g，CaCl2 1.11g，柠檬酸铁1.5×10-2g，PDA 24g，琼脂20g(1L)；所述的MMN营养液配方为：MgSO4.7H2O 1.5g，KH2PO4 3g，酵母浸膏5g，葡萄糖10g，麦芽糖10g，VB1 0.01g，NaCl 0.058g，CaCl2 1.11g，柠檬酸铁1.5×10-2g，PDA 24g。3.根据权利要求1所述的外生菌根合成方法，其特征在于，所述步骤(2)中共生树种幼苗的获得是采用：树的种子用自来水清洗三遍后，用75％酒精浸泡30分钟进行表面消毒，无菌水冲洗三遍后播于装有1:1的蛭石和珍珠岩的塑料筐内，在精控温室条件为空气温度20-25℃、基质湿度60-70％下培养，无菌水浇灌；育苗基质蛭石和珍珠岩需先在121℃、0.1MPa中灭菌1h，灭菌结束后放置3天后，在同样条件中再次灭菌1次。4.根据权利要求1所述的外生菌根的合成方法，其特征在于，所述步骤(2)中共生树种幼苗接种前将幼苗主根根尖剪去1-2cm，以便于侧根的生长和侵染。5.根据权利要求1所述的外生菌根的合成方法，其特征在于，所述步骤(2)中接种袋为长25cm、宽15cm的聚丙烯培养袋，剪裁大小合适的滤纸于袋中，袋的底部左右两侧分别放置长3cm、宽3cm、厚3cm的海绵，便于后期吸水保湿。6.根据权利要求1所述的外生菌根合成方法，其特征在于，所述步骤(2)中接种时将共生树种幼苗置于培养袋中间位置，选取已分割好的菌块附着于树幼苗侧根，一棵苗需要3块菌块，加入50ml营养液，封口；所述菌块是指在无菌条件下，将长满菌丝体的培养基用接种刀划...
【专利技术属性】
技术研发人员：于富强，李晶，王冉，
申请(专利权)人：中国科学院昆明植物研究所，
类型：发明
国别省市：云南;53
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