本发明专利技术涉及组织工程技术领域，具体涉及一种源于骨髓神经嵴细胞的施旺氏祖细胞及其在促进神经再生中的应用。本发明专利技术提供了一种大鼠骨髓源神经嵴祖细胞N1，保藏号为CCTCC NO：C201647，即BM‑NCC克隆N1，具备施旺氏祖细胞(SCP)的性能。本发明专利技术还提供了BM‑NCC克隆N1的传代培养方法，以及向施旺氏细胞(SC)定向诱导分化的方法。本发明专利技术的BM‑NCC克隆N1有望应用于细胞为基础的促神经再生治疗。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及组织工程
，具体涉及一种源于骨髓神经嵴细胞的施旺氏祖细胞及其在促进神经再生中的应用。
技术介绍
在神经系统中，施旺氏细胞(Schwann cell，SC)是周围神经系统的胶质细胞，在轴突成髓鞘、周围神经元的组织化、神经元正常功能的维持、突触的形成以及对神经损伤和神经痛的反应等方面起着关键的作用。在周围神经损伤后的Wallerian变性阶段，SC去分化为未成熟SC或前体样SC，参与髓磷脂和轴突碎片的清除，产生多种生长因子和细胞因子，增殖并迁移形成利于轴突再生长的Bungner带，最后又重新分化为成熟的成髓鞘SC支持轴突重新形成髓鞘。目前，基于SC的神经组织工程具有很多应用目标，包括周围神经疾病或损伤的治疗，中枢神经系统(CNS)疾病的治疗潜能，以及SC相关疾病体外模型阶段的治疗。然而SC的来源和纯度仍然限制着其在细胞治疗方面的应用。施旺氏祖细胞(Schwann cell precursor，SCP)代表着施旺氏细胞的早期阶段。在脊椎动物的发育过程中，SCP和未成熟的SC起源于迁移的神经嵴细胞(neural crest cell，NCC)，到成体阶段神经嵴组织就消失了。将从胚胎周围神经富集的SCP和成熟的SC移植到CNS后，前者比后者具有更好的生存和迁移能力。SCP也可以分化为成髓鞘的中枢胶质细胞修复大脑损伤。此外，在肠神经系统的出生后神经发生中还发现有SCP向神经元的分化。目前，已经有多种不同的外源性干细胞类型被用来衍生SC，包括胚胎干细胞和诱导多能干细胞[Ma MS,Boddeke E,Copray S.Pluripotent stem cells for Schwann cell engineering.Stem Cell Rev.2015；11:205-18.][Li W,Huang L,Lin W,Ke Q,Chen R,Lai X,et al.Engraftable neural crest stem cells derived from cynomolgus monkey embryonic stem cells.Biomaterials.2015；39:75-84.][Liu Q,Spusta SC,Mi R,Lassiter RN,Stark MR,Hoke A,et al.Human neural crest stem cells derived from human ESCs and induced pluripotent stem cells:induction,maintenance,and differentiation into functional schwann cells.Stem Cells Transl Med.2012；1:266-78.][Ren YJ,Zhang S,Mi R,Liu Q,Zeng X,Rao M,et al.Enhanced differentiation of human neural crest stem cells towards the Schwann cell
lineage by aligned electrospun fiber matrix.Acta Biomater.2013；9:7727-36.][Wang A,Tang Z,Park IH,Zhu Y,Patel S,Daley GQ,et al.Induced pluripotent stem cells for neural tissue engineering.Biomaterials.2011；32:5023-32.]，均显示出它们对受损神经元的修复作用。事实上，成体干细胞在体外具有多系分化潜能，而且它们能从自体获得，可避免免疫排斥作用和伦理问题的困扰，因此成体干细胞看来是更具前景的可替代SC来源的细胞类型，包括间充质干细胞(mesenchymal stem cell，MSC)和迁移后NCC[Neirinckx V,Coste C,Rogister B,Wislet-Gendebien S.Concise review:adult mesenchymal stem cells,adult neural crest stem cells,and therapy of neurological pathologies:a state of play.Stem Cells Transl Med.2013；2:284-96.]。已有报道，迁移后NCC和衍生的SC可从背根神经节(DRG)获得[Nagoshi N,Shibata S,Kubota Y,Nakamura M,Nagai Y,Satoh E,et al.Ontogeny and multipotency of neural crest-derived stem cells in mouse bone marrow,dorsal root ganglia,and whisker pad.Cell Stem Cell.2008；2:392-403][Li HY,Say EH,Zhou XF.Isolation and characterization of neural crest progenitors from adult dorsal root ganglia.Stem Cells.2007；25:2053-65.][Vidal M,Maniglier M,Deboux C,Bachelin C,Zujovic V,Baron-Van Evercooren A.Adult DRG Stem/Progenitor Cells Generate Pericytes in the Presence of Central Nervous System(CNS)Developmental Cues,and Schwann Cells in Response to CNS Demyelination.Stem Cells.2015；33:2011-24.][Zujovic V,Thibaud J,Bachelin C,Vidal M,Coulpier F,Charnay P,et al.Boundary cap cells are highly competitive for CNS remyelination:fast migration and efficient differentiation in PNS and CNS myelin-forming cells.Stem Cells.2010；28:470-9.]，还可从受损的或完好的周围神经富集培养出多潜能的Schwann细胞球[Takagi T,Ishii K,Shibata S,Yasuda A,Sato M,Nagoshi N,et al.Schwann-spheres derived from injured peripheral nerves in adult mice--their in vitro characterization and therapeutic potential.PLoS One本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种大鼠骨髓源神经嵴祖细胞N1，保藏号为CCTCC NO：C201647。
【技术特征摘要】
1.一种大鼠骨髓源神经嵴祖细胞N1，保藏号为CCTCC NO：C201647。2.根据权利要求1所述的大鼠骨髓源神经嵴祖细胞N1，其特征在于，其具备施旺氏祖细胞的性能。3.如权利要求1所述的大鼠骨髓源神经嵴祖细胞N1的传代培养方法，其特征在于，所述的传代培养方法如下：将保藏号为CCTCC NO：C201647的细胞复苏后，培养至大多数细胞球增大而球中心细胞开始发暗时，用accutase酶将细胞球消化为单细胞悬液，然后细胞按≤104个/ml的密度接种到细胞培养板，进行成球传代培养，每周半量换液2次；根据需要传代。4.如权利要求1所述的大鼠骨髓源神经嵴祖细胞N1向施旺氏细胞定向诱导分化的方法，其特征在于，所述的定向诱导分化方法如下：将保藏号为CCTCC NO：C201647的细胞复苏后，培养至对数生长期，分离为单个细胞，并接种到层黏连蛋白/多聚赖氨酸包被的培养板上，用施旺氏细胞定向诱导分化液孵育培养，每2～3d换液1次；所述的施旺氏细胞定向诱导分化液为...
【专利技术属性】
技术研发人员：施海燕，丁斐，强亮，余英奇，孙晓婷，胡静静，孙晓欢，何欢，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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