本发明专利技术公开了一株具有低温降解石油功能的红球菌Rhodococcus sp.QY‑2，其保藏号为CGMCC No.11634。该菌株筛选自我国北方受石油污染的海域，可在低温条件下高效地降解石油，特别是可在0℃的极端环境下高效地降解石油。本发明专利技术的红球菌QY‑2可应用于海洋石油污染的生物修复中，尤其可应用于我国北方海域冬季(包括冰期)等低温环境下的溢油生物修复工作中。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物
，涉及一株海洋低温菌及其在海洋石油污染生物修复中的应用。所述菌株具有能在0℃的极端条件下高效降解石油烃的特点。
技术介绍
随着海洋运输业的高速发展和海洋开采业的快速崛起，海洋溢油事故日益频发，使得海洋环境的平衡遭到了严重的破坏。在冬季，特别是冰期，一但发生海上溢油事故，由于短链石油烃蒸发缓慢，长链烃凝为固体，使有机污染物持久存在，会对当地生态系统造成相当大的危害，而且也加大了溢油应急和生态修复工作的难度。在我国北方地区，尤其北黄海和渤海海域，一年中有近5个月处于低温期，冬季海水温度平均在2℃左右，也会有结冰期。虽然目前已经发现了一些能在0℃左右降解石油的海洋低温降解菌，但菌源主要来自极地环境。外源菌的大量引入易对生态环境产生威胁，因此在我国低温海域筛选出高效的低温降解石油烃的细菌本地种，进一步商业化，对我国北方海域的石油污染清除将有很高的应用价值，也会产生出可观的经济效益。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对上述现有技术的不足提供一株在低温条件下可降解石油的海洋石油降解菌。该菌株筛选自我国北方受石油污染的海域，可在0℃的极端环境下高效地降解石油。本专利技术所提供的具有在低温条件下降解石油性能的红球菌(Rhodococcus sp.)QY-2是从胶州湾筛选获得的。2013年11月22，中石化输油储运公司潍坊分公司输油管线破裂。事故发生后，部分原油沿着雨水管线进入胶州湾，污染附近海域。溢油发生一周后，取表层被原油污染的海水，经过筛选得到Rhodococcus sp.QY-2。该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称：CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101)保藏，保藏号为CGMCC No.11634，保藏日期为2015年
11月09日。本专利技术的Rhodococcus sp.QY-2的特征如下：(1)菌落特征：乳酪色、圆形、凸起、光滑、边缘完整。(2)遗传学特征：16S rDNA分析，表明其属于红球菌属(Rhodococcus)。菌株Rhodococcus sp.QY-2的16S rDNA序列具体可见序列表。(3)石油降解性能特征：在0℃条件下，经过60天的降解实验后，原油降解率可达53％。本专利技术还提供红球菌(Rhodococcus sp.)QY-2在低温条件下降解石油中的应用，优选地，该菌降解石油中的石油烃。所述低温条件是指0℃～15℃，尤其是指0℃～4℃，最好为0℃。本专利技术的红球菌QY-2可应用于海洋石油污染的生物修复中，尤其可应用于低温环境中。本专利技术的有益效果：本专利技术的Rhodococcus sp.QY-2是一株高效海洋低温石油降解菌，即使是在0℃的条件下还能保持较高的石油烃降解活力。本专利技术的菌株培养方法简单，培养基原料易得，菌株对石油烃降解能力强，适用于我国北方海域溢油(包括冰期溢油)的生物修复工作。具体实施方式下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。另外，下述实施例中，如无特殊说明，所使用的实验方法均为常规方法，所用材料、试剂等均可从生物或化学试剂公司购买。下述实施例采用的培养基及其组成为如下：MMC培养基为：NaCl 24g，NH4NO3 1.0g，KCl 0.7g，KH2PO4 2.0g，Na2HPO43.0g，MgSO4·7H2O 7.0g，微量元素CaCl2 0.02mg/L，FeCl3·6H2O 0.5mg/L，CuSO40.005mg/L，MnCl2·4H2O 0.005mg/L，ZnSO4·7H2O 0.1mg/L，加去离子水至1L，pH 7.4；2216E液体培养基为：蛋白胨5g，酵母膏1g，磷酸高铁0.1g，加去离子水至1000mL，pH值7.4～7.8；2216E琼脂培养基为：蛋白胨5g，酵母膏1g，磷酸高铁0.1g，琼脂15g，加去离子水至1000mL，pH值7.4～7.8。实施例1菌株Rhodococcus sp.QY-2的分离与鉴定1.菌株Rhodococcus sp.QY-2的分离(1)样品采集：2013年11月22，中石化输油储运公司潍坊分公司输油管线破裂，部分原油污染了胶州湾附近海域。溢油发生一周后，取表层被原油污染的海水；(2)富集驯化：于250mL三角瓶中加入100mLMMC培养基，120℃下灭菌15min，加入采集回来的海水样品5mL和灭菌后的原油0.5mL。将混合液置入生化培养箱，于150r/min、10℃下振荡培养30d；培养结束后取培养液5mL进行下一轮转接培养：将5mL培养液加入到已灭菌的含有0.5mL原油的100mL MMC培养液中，于150r/min条件下培养30d。重复上述步骤，每轮的培养温度比上一轮低1℃，直至0℃，并在0℃条件下长期驯化。(3)分离纯化：将经过富集驯化的微生物培养液进行梯度稀释，并在2216E固体培养基上进行平板划线，0℃培养直至长出清晰菌落。挑选生长良好的菌落，在已灭菌的2216E固体培养基上分3个区域进行划线，置入生化培养箱，于0℃下培养。挑取3区具有生长优势的单菌落，进行二次划线分离。如此反复多次划线，直到分离出菌落单一的菌株，命名为菌株QY-2。2.菌株Rhodococcus sp.QY-2的鉴定(1)菌落特征：乳酪色、圆形、凸起、光滑、边缘完整。(2)遗传学特征：16S rDNA分析，表明其属于红球菌属(Rhodococcus)，被分类为红球菌(Rhodococcus sp.)。该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏号为CGMCC No.11634，保藏日期为2015年11月09日。16S rDNA序列如SEQ ID No.1。实施例2菌株Rhodococcus sp.QY-2的发酵用无菌接种环挑取纯化后的菌苔至装有100mL已灭菌的2216E液体培养基的三角瓶锥形中，低温振荡培养7d(0℃，120r/min)，成为种子液；将种子液按10％体积比加入2216E液体培养基中，0℃下培养7天，获得发酵液。实施例3在0℃条件下菌株Rhodococcus sp.QY-2石油烃降解率的测定(1)降解菌种子液用无菌接种环挑取纯化后的菌苔至装有100mL已灭菌的2216E液体培养基的三角瓶锥形中，低温振荡培养7d(0℃，120r/min)。(2)降解培养称取0.5g原油溶于20mL已过滤灭菌的正己烷中，移至装有100mL已灭菌的MMC液体培养基的三角瓶锥形中，放置到振荡器上振荡直至正己烷挥发完全，按照10％的接种量接种菌株Rhodococcus sp.QY-2种子液，低温振荡培养60d(0℃，120r/min)。以不接种降解菌的培养液作为空白组。(3)萃取降解培养结束后，在培养液中加入3mL 50％的硫酸溶液进行酸化。将酸化后的培养液移入250mL的分液漏斗中。用20mL的正己烷清洗空三角瓶后把正己烷倒入分液漏斗，充分振荡后静置。液体明显分层后把下层液体转至三角瓶中，上层液离心后通过铺满无水硫酸钠的砂芯漏斗过滤除水后收集，进行下一步分析。萃取2～3次，然后合并上层液。(4)原油标准曲线绘制称取0.1g油样品溶于正己烷中，移至本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株具有低温降解石油功能的红球菌Rhodococcus sp.QY‑2，其保藏号为CGMCC No.11634。
【技术特征摘要】
1.一株具有低温降解石油功能的红球菌Rhodococcus sp.QY-2，其保藏号为CGMCC No.11634。2.如权利要求1所述的红球菌QY-2在低温条件下降解石油中的应用。3.根据权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭平，林建国，曹宾霞，
申请(专利权)人：大连海事大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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