本发明专利技术公开从红枣叶中制备槲皮素‑3‑O‑α‑L‑阿拉伯糖‑(1→2)‑α‑L‑鼠李糖苷及其应用，采收红枣叶片用清水洗涤干净，烘燥，粉碎，75%乙醇溶液提取，低温减压浓缩，获得总黄酮浸膏用适量水溶解后上大孔树脂柱，分别用20%、50%、95%乙醇溶液洗脱，收集50%洗脱液，回收溶剂得黄酮苷粗品，用3倍体积50%甲醇溶解，用制备型高效液相精制纯化，洗脱液使用分析型高效液相检测，合并其中相同并且纯度大于98%流份，回收溶剂获得黄酮苷槲皮素‑3‑O‑α‑L‑阿拉伯糖‑(1→2)‑α‑L‑鼠李糖苷单体，产品纯度高、收率高，可作为分析检测的标准品，对治疗利什曼原虫具有明显的应用效果，具有广泛的实用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物有效成分提取制备的
具体的说，本专利技术涉及一种具有治疗利什曼原虫的槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-(1→2)-α-L-鼠李糖苷提取的
技术介绍
枣树为鼠李科(Rhamnaceae)枣属(Ziziphus)植物，其果实称为红枣或大枣，既是一种可口的水果和干果，又是一种疗效显著的中药。现在国内外加工及技术研究局限于枣果，对于枣树的其它资源如根、茎、叶、花、皮的研究很少。截止到2015年，全国枣树的种植面积达到1700万亩，枣叶做为枣树产量最大的副产物，每亩枣田年产鲜枣叶约200公斤，全国每年栆叶的产量约340万吨。同时枣叶中含有大量有生物活性的物质，如黄酮、酚类、生物碱、皂苷、三萜酸类、环磷酸腺苷、鸟苷等。黄酮苷类化合物多具有较好的抗氧化活性、免疫活性、抗炎活性和抗病毒活性，是一类极具开发价值的天然活性物质。槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-(1→2)-α-L-鼠李糖苷是一种非常少见的黄酮苷，至今为止市面上还没有从红枣叶中提取槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-(1→2)-α-L-鼠李糖苷的标准品出售。现有技术中，大部分只是粗提取阶段，如公开号CN101926452A，申请号CN200910260210.3 “酸枣叶总黄酮浸膏及其制备方法”，是一种从酸枣叶中制备总黄酮浸膏的方法；公开号 CN103169788A，申请号 CN201310132996.7 “大枣叶提取物及其在制备防治肝损伤药物及保健食品中的应用”，介绍了一种枣叶提取物在防治肝损伤药物及保健食品中的应用。有关于栆叶中黄酮苷类化合物的检测与鉴定的研究，其中涉及提取与纯化过程，但主要是测定所需要的步骤，不是研究黄酮苷的制备工艺，且提取与纯化过程复杂，产率不高。
技术实现思路
针对目前未见枣叶提取黄酮苷的研究现状，本专利技术旨在于提供红枣叶中制备槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-(1→2)-α-L-鼠李糖苷及应用,目的在于充分利用枣叶资源，以及充分发挥枣叶的营养价值，制备的黄酮苷杂质种类极少、纯度高、收率高；产品可作为分析检测的标准品，也可作为医药和保健品添加剂使用，制备工艺简单、制备周期短且过程中的填料可以重复利用，能够实现工业化连续生产，且制备的槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-(1→2)-α-L-鼠李糖苷对治疗利什曼原虫具有广泛的实用价值。本专利技术通过以下技术方案实现的:本专利技术通过采收红枣叶片，用清水洗涤干净，烘燥，粉碎，75%乙醇溶液提取，低温减压浓缩，即得总黄酮浸膏。总黄酮浸膏用适量水溶解后上大孔树脂柱，分别用20%、50%、95%乙醇溶液洗脱，收集50%洗脱液，回收溶剂得黄酮苷粗品。黄酮苷粗品用3倍体积50%甲醇溶解，用制备型高效液相精制纯化，洗脱液使用分析型高效液相检测，合并其中相同并且纯度大于98%流份，回收溶剂，得到一种稀有黄酮苷槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-(1→2)-α-L-鼠李糖苷单体。本专利技术提供的红枣叶中制备槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-(1→2)-α-L-鼠李糖苷的黄酮苷杂质种类极少、纯度高、收率高，对治疗利什曼原虫具有明显的应用效果；产品可作为分析检测的标准品，制备工艺简单、制备周期短且过程中的填料可以重复利用，能够实现工业化连续生产，具有广泛的实用价值。本专利技术具体提供一种通过红枣叶中制备的槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-(1→2)-α-L-鼠李糖苷，具体通过如下提取方法获得：（1）原材料的预处理：采收无虫蚀、新鲜的红枣叶片，用清水洗涤干净，在45℃的条件下烘干，粉碎，粉碎并过40-60目筛。（2）提取和浓缩：经步骤（1）制备的粉碎后红枣叶片用75%乙醇溶液提取，其中料液比为1:10（g/ml），于60℃回流提取4次，每次提取2 h，过滤，合并4次滤液，提取液进行低温减压浓缩，即得总黄酮浸膏，产率为13.0%。（3）洗脱：将步骤（2）制得的总黄酮浸膏用4倍体积的蒸馏水溶解后上大孔树脂柱，上样流速为1 ml/min，待水溶液全部流入柱内，静置吸附2 h后，用4倍柱体积的蒸馏水冲洗，流速为1.0-3.0 ml/min，弃去流出液；用3 L的20%乙醇溶液洗脱，流速为1.0-3.0 ml/min，弃去洗脱液；用5 L的50%乙醇溶液洗脱，流速为1.0-3.0 ml/min，收集洗脱液，回收溶剂得黄酮苷粗品，产率为3.5%。所述的大孔树脂柱为将 X-5型号大孔树脂装入6 cm×50 cm的玻璃柱内，依次用50%，95%的乙醇水溶液清洗柱子，95%乙醇冲洗到流出液蒸干后无残留，再用5 L蒸馏水清洗柱子。（4）总黄酮苷的制备：将步骤（3）中制得的黄酮苷粗品用3倍体积的50%甲醇溶解，用制备型高效液相精制纯化，洗脱液按照组分出峰位置进行收集，收集相同组分。所述的制备型高效液相精制纯化时的制备液相条件为：COSMOSIL 5C18-MS-II色谱柱，19mm×200mm；流动相包含A和B两种溶液，A液为含有0.1%甲酸的乙腈溶液，B液为含有0.1%甲酸的水溶液，A与B的比例为15：85（v/v）；流速为9 ml/min；检测波长为254 nm。（5）分析型高效液相检测：利用分析型高效液相检测检测步骤（4）收集的成分，分析条件为COSMOSIL 5C18-MS-II色谱柱，4.7mm×200mm；流动相包含A和B两种溶液，A液为含有0.1%甲酸的乙腈溶液，B液为含有0.1%甲酸的水溶液，A与B的比例为20：80（v/v），流速为1.0 ml/min，检测波长为254 nm。（6）经上述步骤制备获得黄酮苷槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-(1→2)-α-L-鼠李糖苷单体，产率为1.5 mg/g，纯度为98.7%。同时，本专利技术提供了一种通过红枣叶中制备的槲皮素-3-O-洋槐糖苷单体，通过上述提供的提取方法制备获得，制备的槲皮素-3-O-洋槐糖苷单体的产率为0.8 mg/g，纯度达到99.9%，达到了槲皮素-3-O-洋槐糖苷标准品要求。进一步，本专利技术提供了一种通过红枣叶中制备的槲皮素-3-O-芸香糖苷单体，通过上述提供的提取方法制备获得，制备的槲皮素-3-O-芸香糖苷产率为1.3 mg/g，纯度为99.5%，达到了槲皮素-3-O-芸香糖苷单体标品要求。关于新专利技术新创造采用现有公知常识作为现有技术基础的问题。事实上，除了开创性的专利技术外，任何一项专利技术创造都是离不开现有技术手段和技术要素为基础，都是在现有技术手段基础上经过进一步创新的结果。对于挑选、粉碎、提取、浓缩、高效液相检测等技术都是现有技术基础，但是如何使得黄酮苷槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-(1→2)-α-L-鼠李糖苷单体的产率高，如何使得黄酮苷槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-(1→2)-α-L-鼠李糖苷单体在经过一系列的工艺后保留其活性以及如何使得黄酮苷槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-(1→2)-α-L-鼠李糖苷单体的纯度高都需要通过系列不可预见的科学试验反复验证得出。正是由于这些原因，本申请虽然利用了常规技术手段为基础，并在此基础上经过科学实验提供了从红枣叶片中制备3种黄酮苷单体。因此本专利技术黄酮苷槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-(1→2)-α-L-鼠李糖苷单体的产率为1.5 mg/g，纯度达到98.7%，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种通过红枣叶中制备的槲皮素‑3‑O‑α‑L‑阿拉伯糖‑(1→2)‑α‑L‑鼠李糖苷，其特征在于，具体通过如下提取方法获得：（1）原材料的预处理：采收无虫蚀、新鲜的红枣叶片，用清水洗涤干净，在45℃的条件下烘干，粉碎，粉碎并过40‑60目筛；（2）提取和浓缩：经步骤（1）制备的粉碎后红枣叶片用75%乙醇溶液提取，其中料液比为1:10（g/ml），于60℃回流提取4次，每次提取2 h，过滤，合并4次滤液，提取液进行低温减压浓缩，即得总黄酮浸膏，产率为13.0%；（3）洗脱：将步骤（2）制得的总黄酮浸膏用4倍体积的蒸馏水溶解后上大孔树脂柱，上样流速为1 ml/min，待水溶液全部流入柱内，静置吸附2 h后，用4倍柱体积的蒸馏水冲洗，流速为1.0‑3.0 ml/min，弃去流出液；用3 L的20%乙醇溶液洗脱，流速为1.0‑3.0 ml/min，弃去洗脱液；用5 L的50%乙醇溶液洗脱，流速为1.0‑3.0 ml/min，收集洗脱液，回收溶剂得黄酮苷粗品，产率为3.5%；（4）总黄酮苷的制备：将步骤（3）中制得的黄酮苷粗品用3倍体积的50%甲醇溶解，用制备型高效液相精制纯化，洗脱液按照组分出峰位置进行收集，收集相同组分；（5）分析型高效液相检测：利用分析型高效液相检测检测步骤（4）收集的成分，分析条件为COSMOSIL 5C18‑MS‑II色谱柱，4.7mm×200mm；流动相包含A和B两种溶液，A液为含有0.1%甲酸的乙腈溶液，B液为含有0.1%甲酸的水溶液，A与B的比例为20：80（v/v），流速为1.0 ml/min，检测波长为254 nm；（6）经上述步骤制备获得黄酮苷槲皮素‑3‑O‑α‑L‑阿拉伯糖‑(1→2)‑α‑L‑鼠李糖苷单体，产率为1.5 mg/g，纯度为98.7%。...
【技术特征摘要】
1.一种通过红枣叶中制备的槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-(1→2)-α-L-鼠李糖苷，其特征在于，具体通过如下提取方法获得：（1）原材料的预处理：采收无虫蚀、新鲜的红枣叶片，用清水洗涤干净，在45℃的条件下烘干，粉碎，粉碎并过40-60目筛；（2）提取和浓缩：经步骤（1）制备的粉碎后红枣叶片用75%乙醇溶液提取，其中料液比为1:10（g/ml），于60℃回流提取4次，每次提取2 h，过滤，合并4次滤液，提取液进行低温减压浓缩，即得总黄酮浸膏，产率为13.0%；（3）洗脱：将步骤（2）制得的总黄酮浸膏用4倍体积的蒸馏水溶解后上大孔树脂柱，上样流速为1 ml/min，待水溶液全部流入柱内，静置吸附2 h后，用4倍柱体积的蒸馏水冲洗，流速为1.0-3.0 ml/min，弃去流出液；用3 L的20%乙醇溶液洗脱，流速为1.0-3.0 ml/min，弃去洗脱液；用5 L的50%乙醇溶液洗脱，流速为1.0-3.0 ml/min，收集洗脱液，回收溶剂得黄酮苷粗品，产率为3.5%；（4）总黄酮苷的制备：将步骤（3）中制得的黄酮苷粗品用3倍体积的50%甲醇溶解，用制备型高效液相精制纯化，洗脱液按照组分出峰位置进行收集，收集相同组分；（5）分析型高效液相检测：利用分析型高效液相检测检测步骤（4）收集的成分，分析条件为COSMOSIL 5C18-MS-II色谱柱，4.7mm×200mm；流动相包含A和B两种溶液，A液为含有0.1%甲酸的乙腈溶液，B液为含有0.1%甲酸的水溶液，A与B...
【专利技术属性】
技术研发人员：白红进，陈朋，邹玲，周忠波，吴翠云，
申请(专利权)人：塔里木大学，
类型：发明
国别省市：新疆;65
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