本发明专利技术涉及一株枯草芽孢杆菌BY7及其降解残饵和氨氮的应用；一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BY7，已于2015年9月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2015585；其16s rDNA如SEQ.ID.NO 1所示。枯草芽孢杆菌BY7或BY7菌悬液可降解污染水体或水产养殖水体中氨氮和降解饲料中的残饵。本发明专利技术提供的枯草芽孢杆菌可应用于如下方面：(1)由于其具有很强的氨氮降解能力，可用于改善水体的氨氮污染问题；可用于降低水产养殖池塘中的氨氮含量；(2)由于其可分解饲料残饵中的蛋白质，可用于降解水产养殖池塘中的残饵和池底的有机质。本发明专利技术在夏季高温季节的养殖池塘中应用前景广阔。
【技术实现步骤摘要】
一、
本专利技术涉及枯草芽孢杆菌BY7及其降解残饵和氨氮的应用，属于微生物
二、
技术介绍
在水产养殖池塘中，大量投饵所致池底残饵、粪便等含氮有机物难以完全被天然的微生物氧化分解，剩余的有机物日积月累在池底堆积，污染了池塘的底质和水质。因此，人为地施加能大量降解残饵等的微生物菌种来加速池底有机质的分解是非常重要的。此外，由于残饵、粪便等含氮有机物被分解后多以氨氮(NH4+-N)的形式被释放到水体中，导致水体氨氮含量过高，影响养殖水产动物的生长，甚至危及养殖动物的生命，因此，筛选能降低水体氨氮的微生物菌种应用于水产养殖生产意义重大。枯草芽孢杆菌是我国农业部允许使用的益生菌之一，由于其作用效果较为明显，现已被广泛应用于水产养殖过程中的底质和水质改良。目前使用的枯草芽孢杆菌菌种多是从自然养殖水体分离的。在温泉养殖水体中，由于养殖用水直接取自地下温泉，其微生物菌种与自然养殖水体中的差异较大。三、
技术实现思路
本专利技术涉及一株枯草芽孢杆菌BY7及其降解残饵和氨氮的应用。是从温泉养殖水体中分离筛选出一株高温下高产蛋白酶、高效降解饲料和氨氮的枯草芽孢杆菌，该菌株在夏季高温季节的养殖池塘中应用前景广阔。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BY7，已于2015年9月29日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学)，保藏号为CCTCC M 2015585；其16s rDNA如SEQ.ID.NO 1所示。本专利技术还涉及适宜枯草芽孢杆菌BY7生长的发酵培养基配方。本专利技术还涉及枯草芽孢杆菌BY7的菌悬液。所述菌悬液可用无菌生理盐水或PBS重悬菌体得到。所述菌悬液OD600值可达到2.0。本专利技术还涉及枯草芽孢杆菌BY7或BY7菌悬液在降解污染水体或水产养殖水体中氨氮的应用，包括如下步骤：根据水体氨氮污染程度将适量的枯草芽孢杆菌BY7或BY7菌悬液施加于水产养殖水体或氨氮污染水体中，利用枯草芽孢杆菌BY7具有的降解氨氮的能力来降低水体中的氨氮。水产养殖水体或污染水体的pH值最好在5.0-8.0之间；水产养殖水体或污染水体中要有一定的碳源和氮源，C/N在3-7之间均可，最好为6。本专利技术还保护枯草芽孢杆菌BY7或BY7菌悬液在降解饲料残饵中的应用，包括如下步骤：将适量的枯草芽孢杆菌BY7或BY7菌悬液施加于水产养殖水体中，利用枯草芽孢杆菌BY7具
有的降解蛋白的能力来降解饲料残饵。水产养殖水体的pH值最好在5.0-8.0之间均可；水产养殖水体中要有一定的碳源和氮源，C/N在3-7之间均可，最好为6。本专利技术提供的枯草芽孢杆菌，培养方法简单、生长速度快、能耐受高浓度的氨氮、环境适应性强、安全性高。本专利技术提供的枯草芽孢杆菌可应用于如下方面：(1)由于其具有很强的氨氮降解能力，可用于改善水体的氨氮污染问题；可用于降低水产养殖池塘中的氨氮含量；(2)由于其可分解饲料残饵中的蛋白质，可用于降解水产养殖池塘中的残饵和池底的有机质。本专利技术具有较好的应用前景。四、附图说明图1为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BY7与同批分离所得菌株分解酪素透明圈直径比较。图1说明：将BY7及其他菌株涂布于酪素培养基上，37℃培养24h后用游标卡尺分别测量透明圈直径及菌落直径，计算透明圈直径与菌落直径的比值，根据比值大小可判断各菌种分解蛋白的能力。图2A为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BY7菌落照片，B为显微镜下菌体形态照片。图2中A图和B图从形态学上对BY7进行了分类鉴定。图3A为枯草芽孢杆菌BY7 16S rDNA电泳图，B为基于分离菌株和Genbank中收录的其他相关菌株的16S rDNA序列构建的系统进化树。图3说明：基于各菌株16S rDNA序列构建的系统进化树可初步鉴定其分类学地位。图4为培养基C/N(A)、pH值(B)和温度(C)对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BY7生长的影响。图4的目的是确定枯草芽孢杆菌BY7的适宜培养条件。图5为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BY7与本实验室保藏菌株BS2的产蛋白酶活性比较。图5的目的是精确比较枯草芽孢杆菌BY7与本实验室保藏的枯草芽孢杆菌BS2的产蛋白酶活性差异。图6为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BY7对饲料蛋白的降解效果。图6的目的是检测枯草芽孢杆菌BY7降解饲料蛋白的能力。图7为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BY7对水体中氨氮的降解效果。图7的目的是检测枯草芽孢杆菌BY7对水体中氨氮的降解能力。五、具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规化试剂商店购买得到的。下述实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。以下实施例中，用于制备各个培养基的水均为去离子水。以下实例中，培养基配制完成后均在121℃温度下湿热灭菌20min。以下实施例中用OD600值表征菌体生长量。C/N即碳氮质量比，又称碳氮比。基础培养基：蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化钠10g，固体另加15g的琼脂，水1000mL，调pH 6.0。发酵培养基：葡萄糖15g，酵母粉5g，蛋白胨10g，磷酸二氢钾4.5g，碳酸钠2g，氯化钠5g，硫酸镁0.2g，微量元素溶液(硫酸锌0.22g/L，硫酸铜0.08g/L，硫酸锰2.03g/L，硫酸亚铁0.2g/L，硼酸2.86g/L，钼酸铵0.02g/L)0.5mL，水1000mL，调节pH至6.0。酪素培养基：分别配制A液和B液。A液：称取磷酸氢二钠1.07g，干酪素5g，加约100mL水，加热溶解。B液：称取磷酸二氢钾0.36g，加约100mL水溶解。A、B液混合后，加琼脂20g，最后用水定容至1000mL，调节pH至6.0。无色培养基：柠檬酸钠作为唯一碳源，氯化铵作为唯一氮源，氯化钠5g，磷酸二氢钾0.7g，硫酸镁1g，微量元素溶液(硫酸锌0.22g/L，硫酸铜0.08g/L，硫酸锰2.03g/L，硫酸亚铁0.2g/L，硼酸2.86g/L，钼酸铵0.02g/L)0.5mL，水1000mL，调节pH至6.0。微量元素溶液：硫酸锌0.22g，硫酸铜0.08g，硫酸锰2.03g，硫酸亚铁0.2g，硼酸2.86g，钼酸铵0.02g，水1000mL，调节pH至6.0。100μg/mL酪氨酸溶液：精确称取在105℃烘至恒重的酪氨酸100μg，逐步加入6mL的1mol/L的盐酸使溶解，用0.2mol/L盐酸定容至100mL，其浓度为1000μg/mL，再吸取此液10mL，以0.2mol/L盐酸定容至100mL，即配成100μg/mL酪氨酸溶液，冰箱内保存。2％酪蛋白溶液：准确称取干酪素2g，加入0.1mol/L NaOH溶液10mL，水浴加热溶解，然后用pH 7.2的磷酸盐缓冲液定容至100mL即可，冰箱内保存。氨氮(NH4+-N)含量通过ET99732多参数水质快速测定仪测定。实例1枯草芽孢杆菌BY7的分离纯化及鉴定一、菌种的分离纯化1、降本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株保藏号为CCTCC M 2015585的枯草芽孢杆菌BY7；其16s rDNA如SEQ.ID.NO 1所示。
【技术特征摘要】
1.一株保藏号为CCTCC M 2015585的枯草芽孢杆菌BY7；其16s rDNA如SEQ.ID.NO 1所示。2.如权利要求1所...
【专利技术属性】
技术研发人员：季相山，王慧，王晓云，赵燕，陈红菊，刘洪军，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：山东;37
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