本发明专利技术公开了一种鸭肫蛋白源抗氧化肽及其应用，该抗氧化肽的氨基酸序列为Asn‑Lys‑Phe‑Ile‑Leu‑Lys(组分DKFILK),其序列的母离子的单同位素峰为m/z 382.2376 Da；其制备工艺流程如下：鸭肫脱脂、酶解、酶解物超滤、凝胶过滤层析、反高效液相色谱纯化、质谱结合氨基酸分析制备抗氧化肽。本发明专利技术原料来源广、价廉，工艺科学合理，通过酶解技术，同时采用超滤分级和色谱层析等纯化，制得的抗氧化肽具有较高的活性；与化学合成的抗氧化剂相比较，本发明专利技术制得的抗氧化肽具有安全无毒副作用、抗氧化活性强和易于消化吸收等优点，可以作为药品、功能性食品等应用。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了，该抗氧化肽的氨基酸序列为Asn?Lys?Phe?Ile?Leu?Lys(组分DKFILK),其序列的母离子的单同位素峰为m/z 382.2376 Da；其制备工艺流程如下：鸭肫脱脂、酶解、酶解物超滤、凝胶过滤层析、反高效液相色谱纯化、质谱结合氨基酸分析制备抗氧化肽。本专利技术原料来源广、价廉，工艺科学合理，通过酶解技术，同时采用超滤分级和色谱层析等纯化，制得的抗氧化肽具有较高的活性；与化学合成的抗氧化剂相比较，本专利技术制得的抗氧化肽具有安全无毒副作用、抗氧化活性强和易于消化吸收等优点，可以作为药品、功能性食品等应用。【专利说明】
本专利技术属于多肽
，具体涉及一种鸭肫蛋白源抗氧化肽及制备方法，还涉及该鸭肫蛋白源抗氧化肽的用途。
技术介绍
越来越多的研究表明，体内活性氧自由基具有一定的功能，如免疫和信号传导过程。但过多的活性氧自由基也会有破坏作用，导致人体正常细胞和组织的损坏，从而引起多种疾病，如心脏病、老年痴呆症、帕金森病和肿瘤等疾病。因此，对能够除体内过剩的活性氧自由基，保护细胞和线粒体的正常结构和功能，防止脂质过氧化的发生，具有抗癌、抗诱导及抗衰老等其他生物活性的天然抗氧化剂的研究逐渐成为了热点。目前，由于化学合成抗氧化剂如BHA(叔丁基烃基茴香醚)、BHT(2，6-二叔丁基对甲酚)、PG(没食子酸丙脂)、TBHQ(特丁基对苯二酚)等由于价格低廉、活性好在世界上其他国家食品行业中得到广泛应用，但是许多研究已表明，这类化学合成抗氧化剂(除TBHQ外)由于存在着许多副作用，如对人体的肝、脾、肺均有不利影响，会诱发恶性肿瘤等。因此，欧洲、美国、日本等相关国家已经对这类化学合成抗氧化剂采取禁止使用的措施。许多国家的学者开始将研究热点转向天然抗氧化剂的研究，如从动物内脏及植物中通过某些技术来开发天然抗氧化肽、降血压肽、抗肿瘤肽等。不同来源的抗氧化肽成为研究热点，如牡蛎、大豆蛋白、大枣、鸭皮、蛋清蛋白等的水解物都具有一定的抗氧化活性，并且对这些具有抗氧化活性的物质进行进一步的分离纯化，可得到具有高抗氧化活性的抗氧化肽。如从动物及内脏中利用酶解技术得到抗氧化肽，中国专利CN103275180B，公开了一种以磷酸盐缓冲液调节pH值，利用蛋白酶酶解马面飩鱼头，通过一系列分离纯化技术获得了一种氨基酸序列Leu-Ser-His-Gly-Pro-Tyr的抗氧化肽； 中国专利CN103073621B公开了一种金枪鱼碎肉蛋白抗氧化肽及其制备方法和用途，以脱脂金枪鱼碎肉作为原料，加入磷酸盐缓冲液，调节pH到5.0?7.0，得混合液;将混合液搅拌预热，加入木瓜蛋白酶，得酶解产物;将酶解产物先灭酶再依次经脱盐、超滤和层析，得到氨基酸序列为Tyr-Glu-Asn-Gly-Gly的抗氧化肽； 中国专利0附034675688公开了一种利用在料液比为1:3的脱脂金乌贼肉固形物中添加0.02 mol/ml磷酸盐缓冲液来调节pH值，最后利用木瓜蛋白酶酶解来得到一种氨基酸序列SAla-Pro-Pro-Glu-Asn-Gly-Met-Ala-Gln-Met，分子量为 1045.2 IDa 的金乌贼蛋白抗氧化肽； 中国专利CN103739693B公开了一种利用微波辅助酶法来酶解合浦珠母贝肉获得了一种肽的序列为Gly-Ala-Gly-Leu-Pro-Gly-Lys-Arg-Glu-Arg的合浦珠母贝肉抗氧化肽；中国专利CN103524596B同样公开一种在固液比为1:15?20ml中添加磷酸盐缓冲液调节pH值，然后利用木瓜蛋白酶来酶解蛋白来获得了氨基酸序列为Leu-Asp-Lys的抗氧化肽，这些抗氧化肽可以应用于食品工业、医药和化妆品等领域中。鸭肫味甘、性平、咸，有健胃之效。胃痛为胃病临床常见的一种病证，中医学常常以此命为病名，相当于现代医学之急、慢性胃炎，胃溃疡，胃神经官能症等。鸭肫为鸭肉加工过程中的副产物，对鸭肉副产物的利用大多数还处于粗加工阶段，原料来源丰富，但由于我国大多数企业对鸭肫的深加工技术匮乏，所以导致一些资源浪费，因此，利用廉价的原料，采用某种技术将鸭肫开发成附加值较高的产品成为了畜产品企业亟待解决的问题。ORACCOxgen Radical Absorbance Capacity)指氧自由基吸收能力，即测试食品药品中抗氧化物的含量的国际通用标准单位。ORAC值越高，抑制自由基的抗氧化能力就越强。该方法现已经成为美国农业部、美国卫生院、FDA评价食品抗氧化能力的重要标准。欧洲、日本等国家的食品、功能食品行业也普遍采用ORAC值作为抗氧化能力的重要评价标准，是目前评价体外抗氧化能力最权威性的方法。本专利技术人在实验中发现，以鸭肫为原料，利用酶解技术制备抗氧化肽的工艺研究处于空白阶段，而以ORAC值为自由基抗氧化分离纯化指标来对鸭肫酶解产物制备高活性抗氧化肽及其应用也未见报道。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的在于提供一种原料来源广、价廉，安全无毒副作用，工艺科学合理，抗氧化活性强和易于消化吸收，可清除自由基和抑制脂质过氧化作用的一种鸭肫蛋白源抗氧化肽及制备方法;第二个目的在于该抗氧化肽提供一种可作为功能性食品、药品和食品添加剂的用途。本专利技术的目的及解决其主要技术问题是采用以下技术方案来实现的:一种鸭肫蛋白源抗氧化肽，其特征在于:该抗氧化肽的氨基酸序列为Asn-Lys-Phe-1Ie-Leu-Lys (组分DKFILK)，该序列的母离子的单同位素峰为(m/z 382.2376 Da, + )，其具体制备过程包括以下步骤: I)原料预处理:取鸭肫解冻，去筋，剁碎，用粉碎机将其粉碎； 2 )石油醚脱脂:将粉碎后的鸭肫加入石油醚浸泡1?12h，倒出石油醚，在通风橱中将残留石油醚彻底挥发，装袋保藏于冰箱中备用； 3)匀浆、调节PH值:将脱脂后的鸭肫肉糜与水按料液比1:2?4的比例匀浆，调节pH值至6.5~7； 4)加蛋白酶酶解:调节温度至50?55°C，蛋白酶添加量为:0.4?0.6%，匀浆液恒温水浴3?5h； 5)灭酶、离心及冷冻干燥:将水浴后的鸭肫匀浆液在95?110°C灭酶10?15min，冷却后，在4000?6000r /min离心10?20min，取上清液即得酶解液，冻干得酶解物干粉； 6)分离纯化:将上述所得酶解液分别进行超滤、层析(包括凝胶色谱、反高效液相色谱)等分离纯化精制过程，最后冷冻干燥得鸭肫蛋白源抗氧化肽。 进一步地，所述步骤4)中蛋白酶为木瓜蛋白酶，酶活力为13000 IU/g。进一步地，所述步骤6)超滤和层析具体过程为: 超滤分级:将上述步骤5)得到的酶解物制成浓度为10?15 11^/1^溶液，于0.05~0.1 MPa的工作压力、60?65r/min的栗转速和20?25 °C的工作温度下采用超滤膜(截留分子量3kDa)进行超滤处理，收集分子量小于3 kDa部分，冻干，得超滤酶解物； 层析过程:将上述超滤酶解物(ZTl)干粉用去离子水配成6-15mg/ml的溶液，经过凝胶G15层析柱(2.6cmX60cm)分离，收集在214nm下各洗脱峰，冻干，选择ORAC值较高的组分作为反高效液相纯化物;将上述凝胶层析后的酶解物用去离子水配成10-20mg/ml的溶液，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种鸭肫蛋白源抗氧化肽,其特征在于：该抗氧化肽的氨基酸序列为Asn‑Lys‑Phe‑Ile‑Leu‑Lys，组分为DKFILK,其序列的母离子的单同位素峰为m/z 382.2376 Da, [M+H]+；其制备方法包括以下步骤：（1）原料预处理：取鸭肫解冻，去筋，剁碎，用粉碎机将其粉碎；（2）石油醚脱脂：将粉碎后的鸭肫加入石油醚浸泡10~12h，倒出石油醚，在通风橱中将残留石油醚彻底挥发，装袋保藏于冰箱中备用；（3）匀浆、调节PH值：将脱脂后的鸭肫肉糜与水按料液比1:2~4的比例匀浆，调节pH值至6.5~7；（4）加蛋白酶酶解：调节温度50~55℃，蛋白酶添加量为：0.4~0.6%，匀浆液恒温水浴3~5h；（5）灭酶、离心及冷冻干燥：将水浴后的鸭肫匀浆液在95~110℃灭酶10~15min，冷却后，在4000~6000r /min离心10~20min，取上清液即得酶解液，冻干得酶解物干粉；（6）分离纯化：将上述所得酶解物分别进行超滤纯化和凝胶色谱层析、反高效液相色谱层析分离纯化精制过程，最后冷冻干燥得鸭肫蛋白源抗氧化肽。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：苏伟，文飞，母应春，杨旭会，齐琦，邱树毅，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：贵州;52
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。