从五指毛桃果中提取乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法及其用途技术

本发明专利技术公开了一种从五指毛桃果中提取、分离一种黄酮类化合物—乔松素‑7‑O‑β‑D‑葡萄糖苷的方法及其用途，属于植物源农药技术领域。具体是通过将五指毛桃果粗提物经过大孔树脂柱层析，Sephadex LH‑20凝胶柱层析和重结晶的方法分离得到化合物，该化合物对柑橘采后病原菌—意大利青霉具有较好的抑菌活性，对柑橘青霉病有较好的抗病性，可用于开发成一种新型的植物源柑橘防腐保鲜剂。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物源农药
，具体涉及到一种从五指毛桃果中提取、分离一种黄酮类化合物—乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法及其在柑橘采后保鲜中的用途。
技术介绍
五指毛桃果(FicussimplicissimaLour.)为桑科无花果属植物裂掌榕的果实，收载于历年《中国药典》和多种中药学古书籍中。五指毛桃是广东地区的道地中药材，具有很好的益气健脾功效，有“广东人参”之美誉。五指毛桃性平，味甘、辛，有健脾补肺、利湿舒筋之功，可用于脾虚浮肿、食少无力、肺痨咳嗽、盗汗、风湿痹痛、产后无乳等症，在广东民间使用历史悠久。现代药理学研究表明五指毛桃可以保护胃黏膜、减轻肝损伤、提高机体免疫力、减轻脑缺血缺氧的损害。动物急性毒性实验研究表明小鼠灌服五指毛桃水提物后14d内，动物均无死亡，各脏器均无异常。表明五指毛桃毒性极低，生物安全性好。关于五指毛桃的抗菌活性研究，仅见五指毛桃水煎煮提取液对大肠杆菌、枯草芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌有抑制作用。由意大利青霉(Penicilliumitalicum)引起的青霉病和指状青霉(Penicilliumdigitatum)引起的绿霉病，是造成柑橘采后腐烂发生的最主要的两种病害，腐烂率一般为10％～30％，严重时可高达40％～50％以上，造成巨大的经济损失。长期以来，主要采用化学合成药剂作为保鲜剂对柑橘进行保鲜，这些化学杀菌剂能杀死或抑制病原微生物的生长，有较好的防腐保鲜效果，但同样会造成药剂残留、污染环境，抗药性等弊端。另外，一些化学防腐剂有潜在的致癌、致突变、致畸的可能性。近年来，人们开始转向从天然植物中寻找安全环保的柑橘植物源保鲜剂。天然植物源保鲜剂具有高效、低毒、低残留、无污染、使用安全等优点，在应用上易受消费者欢迎。另外，植物源药剂不易产生抗药性和不会造成环境污染问题。因此，有必要从天然植物中寻找、开发天然植物源防腐剂对柑橘进行保鲜以减少对化学药剂的依赖。乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷是一种黄酮类化合物，目前从植物中分离到此化合物的报道较少，主要存在于羽叶金合欢、扯根菜、扁枝槲寄生、南酸枣、老鹰茶、玫瑰花、青皮木、荔枝核、光果甘草和青钱柳等植物中。尚未见五指毛桃果中乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的报道，本专利技术为首次从五指毛桃果中分离得到乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种从五指毛桃果中分离得到一种黄酮类化合物—乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法。本专利技术的另一个目的是提供乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷在柑橘采后保鲜剂中的应用。本专利技术提供的黄酮化合物的结构如下：本专利技术的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：(1)五指毛桃果于鼓风干燥箱中40-50℃烘干2h，粉碎机粉碎后过40目筛，取筛下药材粉末，以体积分数为90％的乙醇溶液为提取溶剂，按照料液比(kg∶L)＝1：(10-40)超声波辅助提取30-90min，超声波辅助提取的温度为50-80℃，重复提取3次，合并提取液并过滤，回收乙醇，滤液浓缩至无醇味，即得五指毛桃果提取物浸膏；(2)将步骤(1)中的五指毛桃果提取物浸膏悬浮于10-20倍浸膏重量的蒸馏水中，经D101大孔树脂柱层析，先用纯水洗脱至流出液无颜色、再分别依次用5倍柱体积30％乙醇、5倍柱体积50％乙醇和5倍柱体积95％乙醇梯度洗脱，收集95％乙醇洗脱液，浓缩至无醇味，即得95％乙醇洗脱浓缩物；(3)将步骤(2)中95％乙醇洗脱浓缩物溶解于甲醇中，95％乙醇洗脱浓缩物与甲醇的质量体积比(g：mL)为(1.0-5.0)：10，将该溶液于离心机上5000-8000r/min离心3-10min，取上清液用SephadexLH-20凝胶柱层析分离，用甲醇洗脱，收集8-10个柱体积洗脱液，薄层层析合并目标化合物流分，减压浓缩，向得到的浓缩物中加入甲醇并加热至浓缩物刚好能全部溶解为止，放入4℃冰箱中，析出淡黄色沉淀物即为目标化合物。其中步骤(2)采用的大孔树脂还可为除D101型之外的其他弱极性和低极性大孔树脂。本专利技术制得的目标化合物乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷可添加常规辅料制成防治柑橘采后病原菌的药物组合物，用于柑橘采后防腐保鲜，防治由意大利青霉(Penicilliumitalicum)引起的青霉病和指状青霉(Penicilliumdigitatum)引起的绿霉病。王静等通过系统溶剂萃取老鹰茶提取物，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、水饱和正丁醇溶剂萃取，再通过大孔树脂柱分离正丁醇萃取部位，用乙醇-水系统梯度洗脱，分为10％、30％、50％、95％4个部分，对95％部分用硅胶柱进行反复分离，并结合ODS、SephadexLH-20和制备型HPLC分离纯化出乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷(王静,陆维丽,张义龙,唐敏芳，汤文建，李俊.老鹰茶的化学成分研究[J].安徽医科大学学报,2014,49(4):479-483.)。付明等通过系统溶剂萃取扯根菜提取物，依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取，醋酸乙酯部位反复经硅胶柱色谱、SephadexLH-20柱色谱和薄层色谱等，最终从醋酸乙酯部分分离得到乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷(付明,魏麟,余娟,胡朝暾.扯根菜的化学成分研究[J].中国药学杂志,2013,48(22):1911-1914)。刘红燕通过系统溶剂萃取玫瑰花提取物，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，乙酸乙酯部位反复经硅胶柱色谱、SephadexLH-20柱色谱，最终从醋酸乙酯部分分离得到乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷(刘红燕.玫瑰花的化学成分研究[J].天然产物研究与开发,2013,25(1):47-49.)。上述方法都使用了大量的有机溶剂，硅胶柱层析，甚至是制备高效液相色谱技术，需要的成本高，不利于大样品量的制备。本专利技术的优点在于有机溶剂使用量少，操作步骤简单，适合规模化生产制备乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷。附图说明图1为实施例1制得的乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的结构式；图2为实施例1制得的乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的核磁共振氢谱；图3为实施例1制得的乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的核磁共振碳谱；图4为乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷对意大利青霉菌的抑制效果图；图5为乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷对意大利青霉菌丝显微形态的影响图；图6为乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷对意大利青霉菌丝生长量的影响图；图7本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从五指毛桃果中提取乔松素‑7‑O‑β‑D‑葡萄糖苷的方法，其特征在于：所述乔松素‑7‑O‑β‑D‑葡萄糖苷的结构如下：

【技术特征摘要】
1.一种从五指毛桃果中提取乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法，其特征在于：所
述乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的结构如下：
2.如权利要求1所述的一种从五指毛桃果中提取乔松素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方
法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)五指毛桃果于鼓风干燥箱中40-50℃烘干2h，粉碎机粉碎后过40目筛，取
筛下药材粉末，以体积分数为90％的乙醇溶液为提取溶剂，按照料液比(kg∶L)
＝1：(10-40)超声波辅助提取30-90min，超声波辅助提取的温度为50-80℃，
重复提取3次，合并提取液并过滤，回收乙醇，滤液浓缩至无醇味，即得五指毛
桃果提取物浸膏；
(2)将步骤(1)中的五指毛桃果提取物浸膏悬浮于10-20倍浸膏重量的蒸馏水中，
经D101大孔树脂柱层析，先用纯水洗脱至流出液无颜色、再分别依次用5倍柱
体积30％乙醇、5倍柱体积50％乙醇和5倍柱体积95％乙醇梯度洗脱，收集95％
乙醇洗脱液，浓缩至无醇味，即得95％乙醇洗脱浓缩物；
(3)将步骤(2)中95％乙醇洗脱浓缩物溶解于甲醇中，95％乙醇洗脱浓缩物与甲醇
的质量体积比(g：mL)为(1.0-5.0)：10，将该溶液于离心机上5000-8000r/min
离心3-10min，取上清液用SephadexLH-20凝胶柱层析分离，用甲醇洗脱，收
集8-10个柱体积洗脱液，薄层层析合并目标化合物流分，减压浓缩，向得到的
浓缩物中加入甲醇并加热至浓缩物刚好能全部溶解为止，放入4℃冰箱中，析出
淡黄色...

【专利技术属性】
技术研发人员：万春鹏，陈楚英，陈明，陈金印，
申请(专利权)人：江西农业大学，
类型：发明
国别省市：江西;36