人源化IL-7 啮齿动物制造技术

包含人或人源化白介素‑7(IL‑7)基因的基因修饰非人动物。包含人或人源化IL‑7基因的细胞、胚胎和非人动物。表达人或人源化IL‑7蛋白的啮齿动物。在其种系中包含编码人或人源化IL‑7的基因的基因修饰小鼠，其中所述编码人或人源化IL‑7的基因处于内源小鼠IL‑7调控序列的控制之下。

【技术实现步骤摘要】
本申请是申请日为2013年6月14日、申请号为201380031333.4、专利技术名称为“人源化IL-7啮齿动物”的专利技术专利申请的分案申请。专利
包含遗传修饰的非人动物(例如，哺乳动物，例如啮齿动物，诸如小鼠、大鼠和仓鼠)，所述遗传修饰包括在内源基因座处用人IL-7基因序列对非人IL-7基因序列进行置换。啮齿动物和其他非人动物，其从处于内源非人调控序列的控制之下的基因座中，或者从包含内源非人调控序列的内源非人IL-7基因座中，表达人IL-7或人源化IL-7。专利技术背景随机插入了包含人IL-7序列的转基因的转基因小鼠是本领域中已知的。然而，大多数(如果不是所有)的这些转基因小鼠在一个方面或另一个方面不是最佳的。例如，大多数的在人IL-7方面而言转基因的小鼠展现出异常水平和/或比例的某些细胞(包括T细胞)，这很可能归因于免疫细胞发育(例如T细胞发育)的失调。在本领域中仍然需要包含编码人IL-7的序列的非人动物，其中所述编码人IL-7的序列位于内源非人IL-7基因座处，和需要在内源非人调控元件的控制之下表达人IL-7的非人动物。在本领域中需要这样的非人动物，其以尽可能地在该非人动物中在生理学上适当的方式表达人IL-7。在本领域中需要表达人IL-7的非人动物，其中所述非人动物在外周T细胞方面和/或在T细胞亚型的比例方面没有显著异常。专利技术简述提供了基因修饰非人动物、细胞、组织和核酸，其在内源非人IL-7基因座处包含人IL-7基因组序列。所述非人动物从经修饰的基因座中表达人源化IL-7蛋白，所述经修饰的基因座由该经修饰的内源IL-7基因座的一个或多个内源非人调控序列进行调控。在各种不同的实施方案中，所述非人动物为啮齿动物，例如小鼠、大鼠、仓鼠等。在一个特别的实施方案中，所述啮齿动物为小鼠或大鼠。在各种不同的实施方案和方面中，所述非人动物在该非人动物的种系中在经修饰的内源IL-7基因座处包含经修饰的IL-7基因，其中所述经修饰的内源IL-7基因座包含该内源IL-7基因的至少一部分的人源化。在各种不同的实施方案中，所述小鼠在经修饰的IL-7基因座方面而言是杂合的或纯合的。在一个实施方案中，提供了非人动物，其包含第一个内源IL-7等位基因的缺乏和第二个内源IL-7等位基因的人源化。在各种不同的实施方案和方面中，所述人源化涉及一个或多个外显子和/或内含子。在各种不同的实施方案和方面中，提供了具有经修饰的IL-7基因座的非人动物，其中在该经修饰的动物中保留了内源非人5’-非翻译区和内源非人3’-非翻译区之一或两者。在一些方面，本专利技术的非人动物包含有包含在SEQIDNO:1之内的5’-非翻译区。在一些方面，本专利技术的非人动物包含有包含在SEQIDNO:2之内的3’-非翻译区。在一些实施方案中，本专利技术的非人动物包含有包含在SEQIDNO:1之内的5’-非翻译区和包含在SEQIDNO:2之内的3’-非翻译区。在一些方面，本专利技术的非人动物包含是SEQIDNO:1的5’-非翻译区。在一些方面，本专利技术的非人动物包含是SEQIDNO:2的3’-非翻译区。在一些方面，本专利技术的非人动物包含是SEQIDNO:1的5’-非翻译区和是SEQIDNO:2的3’-非翻译区。在一些方面，本专利技术的人源化IL-7基因具有与包含人IL-7基因的外显子2-6的连续序列至少50％(例如，50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多)同一的序列。在一些确定的方面，本专利技术的人IL-7基因包含SEQIDNO:3。在一些方面，本专利技术的人源化IL-7基因具有反映出图1中所示的人源化的序列。在一个方面，提供了基因修饰啮齿动物，其在内源啮齿动物IL-7基因座处包含用人IL-7基因组序列对内源啮齿动物IL-7基因组序列进行的置换。在一个实施方案中，所述基因修饰啮齿动物包含位于人IL-7基因组序列上游(相关于IL-7基因的转录方向而言)的第一啮齿动物调控序列和位于人IL-7基因组序列下游的第二啮齿动物调控序列。在一个实施方案中，所述第一啮齿动物调控序列包含啮齿动物启动子和/或增强子，和所述第二啮齿动物调控序列包含3’-UTR。在一个实施方案中，所述啮齿动物为小鼠并且包含具有小鼠外显子1和人外显子2、3、4、5和6的内源小鼠IL-7基因座位。在一个实施方案中，所述内源小鼠IL-7基因座位从上游至下游(相关于转录方向而言)包含：小鼠外显子1，至少一部分的第一小鼠内含子，和邻接的包含人外显子2至人外显子6的人基因组片段。在一个实施方案中，所述小鼠进一步包含邻接的内源小鼠DNA序列，其包含完整的内源小鼠IL-7上游(相关于IL-7基因的转录方向而言)启动子和调控区，其中所述邻接的小鼠DNA位于所述人基因组片段的上游；和进一步包含邻接的位于所述人基因组片段的下游的内源小鼠DNA3’-UTR序列。在一个实施方案中，所述小鼠包含与选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2及其组合的序列至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一的小鼠序列。在一个特别的实施方案中，所述小鼠包含选自SEQIDNO:1和SEQIDNO:2的小鼠序列。在一个方面，提供了基因修饰小鼠，其在内源小鼠IL-7基因座处包含用人IL-7基因组序列对内源小鼠IL-7基因组序列进行的置换，从而形成经修饰的基因座，其中所述人IL-7基因组序列包含至少一个人外显子，并且所述经修饰的基因座包含选自SEQIDNO:1的序列、SEQIDNO:2的序列及其组合的小鼠序列。在一个实施方案中，所述置换包括含有外显子2至6的人基因组片段，并且所述人基因组片段与小鼠外显子1相连接从而形成经修饰的内源小鼠IL-7基因座，其中所述经修饰的小鼠IL-7基因座包含选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2及其组合的小鼠序列。在一个方面，提供了基因修饰啮齿动物，其包含IL-7基因，该IL-7基因包含啮齿动物外显子1和至少一部分的啮齿动物内含子1，以及人IL-7外显子2、3、4、5和6的人IL-7基因序列，其中所述啮齿动物包含选自啮齿动物上游IL-7调控序列、啮齿动物IL-73’-UTR及其组合的序列。在一个方面，提供了基因修饰小鼠，其包含选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2及其组合本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于制备基因修饰啮齿动物的方法，所述方法包括修饰所述啮齿动物的种系以包含人源化IL‑7基因，其中所述人源化IL‑7基因至少包含人IL‑7外显子2、3、4、5和6并且可操作地连接至内源啮齿动物IL‑7 5’调控元件。

【技术特征摘要】
2012.06.18 US 61/660,976;2012.12.20 US 61/740,074;1.用于制备基因修饰啮齿动物的方法，所述方法包括修饰所述啮
齿动物的种系以包含人源化IL-7基因，其中所述人源化IL-7基因至
少包含人IL-7外显子2、3、4、5和6并且可操作地连接至内源啮齿
动物IL-75’调控元件。
2.权利要求1的方法，其中所述啮齿动物为大鼠。
3.权利要求1的方法，其中所述啮齿动物为小鼠。
4.权利要求3的方法，其中所述人源化IL-7基因包含小鼠IL-7
外显子1以及人IL-7外显子2、3、4、5和6。
5.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述人源化IL-7基因包含
编码人IL-7蛋白的cDNA。
6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述修饰是对于啮齿动物
胚胎干(ES)细胞来实施的，并且将所得的基因修饰ES细胞用于产
生所述基因修饰啮齿动物。
7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述啮齿动物不表达内源
啮齿动物IL-7蛋白。
8.基因修饰啮齿动物在制备动物模型中的用途，所述动物模型可
用于鉴定是人IL-7的拮抗剂的试剂，其中所述啮齿动物在其种系中包
含人源化IL-7基因，并且其中所述人源化IL-7基因至少包含人IL-7
外显子2、3、4、5和6并且可操作地连接至内源啮齿动物IL-75’调
控元件。
9.基因修饰啮齿动物在制备动物模型中的用途，所述动物模型可
用于确定试剂是否减少由IL-7介导的外周T细胞群，其中所述啮齿动
物在其...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·J·莫菲，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：美国;US