重组人胰岛素基因工程菌高表达株筛选培养基及制备方法技术

一种微生物筛选培养基，所述培养基为液体培养基，各组分分别是蛋白胨、酵母粉、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、氯化铵和抗生素，其余是水；本发明专利技术所述培养基营养全面、配制简单、成本低廉，且具备筛选稳定、高表达量工程菌株的优点；本发明专利技术提供的筛选培养基优化了重组人胰岛素基因工程菌高表达株的筛选流程，在菌种培养期间不需中途添加诱导剂，简化了筛选流程，减少了污染风险。因此，本发明专利技术培养基及制备方法适用于重组人胰岛素工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物菌种筛选领域，具体涉及一种重组人胰岛素基因工程菌高表达株筛选培养基及其制备方法。
技术介绍
近年来，随着人们生活水平的改善，糖尿病的发病率呈现出逐年上升的趋势，糖尿病是仅次于心血管和肿瘤的第三大致死疾病，根据国际糖尿病联盟(IDF)公布的数据，2014年全球糖尿病患者数量(20岁至79岁)达到3.87亿人，较去年增加了500万人，预计在2035年将达到5.92亿人。大量的临床实践证实，用重组人胰岛素注射液治疗糖尿病可取得理想的效果。大肠杆菌E.coli是基因工程重组人胰岛素表达常用的原核表达体系，筛选得到高表达菌种是提高最终产率的先决条件。同领域中现有技术所用的菌种筛选培养基大多为2×YT培养基。而现有技术中的菌种筛选方法为：将菌种接种至含30mg/L卡那霉素的液体LB培养基中，37℃，摇床转速170r/min的条件，培养12h；转接至2×YT培养基继续培养2h，加诱导剂IPTG至终浓度0.5mmol/L，诱导4h。但是2×YT培养基营养成分较单一，重本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组人胰岛素基因工程菌高表达株筛选培养基，其特征在于，所述培养基，以1升为计量单位，各组分及其质量分别为：蛋白胨1‑3g、酵母粉2‑8g、磷酸二氢钾1‑5g、磷酸氢二钠3‑8g、氯化钠0.1‑0.8g、氯化铵0.1‑0.5g，抗生素20‑80mg,调pH至6.50‑7.50，余量为纯化水。

【技术特征摘要】
1.一种重组人胰岛素基因工程菌高表达株筛选培养基，其特征在于，所述培养
基，以1升为计量单位，各组分及其质量分别为：蛋白胨1-3g、酵母粉2-8g、磷酸二
氢钾1-5g、磷酸氢二钠3-8g、氯化钠0.1-0.8g、氯化铵0.1-0.5g，抗生素20-80mg,调
pH至6.50-7.50，余量为纯化水。
2.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基，以1升为计量单位，
各组分及其质量分别为：蛋白胨1.5-3g、酵母粉3-6g、磷酸二氢钾1.5-3.5g、磷酸氢
二钠4.5-6.5g、氯化钠0.3-0.6g、氯化铵0.1-0.3g，抗生素30-60mg，调pH至6.80-
7.20，余量为纯化水。
3.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基，以1升为计量单位，
各组分及其质量分别为：蛋白胨2g、酵母粉5g、磷酸二氢钾2.5g、磷酸氢二钠5g、
氯化钠0.5g、氯化铵0.2g，抗生素35-50mg，调pH至7，余量为纯化水。
4.如权利要求1-3所述的任一培养基，其特征在于，所述抗生素为卡那霉素。
5.如权利要求4所述的培养基，其特征在于，所述卡那霉素为40mg。
6.一种权利要求1所述的培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)配制1升培养基，精...

【专利技术属性】
技术研发人员：冷春生，李一奎，王明焱，周芳，常晓慧，
申请(专利权)人：通化东宝药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林;22