一种ETEC卵黄抗体粉及其制备方法技术

本发明专利技术公开一种ETEC卵黄抗体粉及其制备方法，其包括步骤：将大肠杆菌菌株在固体培养基35‑40℃下培养18‑24h；培养完后从固体培养基中粗提菌毛蛋白，并对粗提的菌毛蛋白进行纯化；将纯化后的菌毛蛋白与等体积的弗氏佐剂混合成油乳疫苗，然后用油乳疫苗免疫初产母鸡，免疫后收集血清和卵黄抗体；利用喷粉机将卵黄抗体进行喷雾干燥，制成卵黄抗体粉。ELISA方法分析免疫后卵黄抗体效价，发现以纯化菌毛蛋白作为抗原进行免疫，能获得较高效价的卵黄抗体。利用喷粉机，将卵黄抗体液进行喷雾干燥，制备卵黄抗体粉剂后，抗体效价仅下降了一个倍比度，卵黄抗体具有很好的高温稳定性，喷雾干燥法制粉工艺适用于卵黄抗体粉的生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及食品加工领域，尤其涉及一种ETEC卵黄抗体粉及其制备方法。
技术介绍
仔猪腹泻是困扰养猪业的一种典型的多因素性疾病，给养猪业带来巨大经济损失，而由大肠杆菌引起的仔猪腹泻是其中危害较为严重的一种。仔猪大肠杆菌性腹泻的主要病原为肠毒素性大肠杆菌（EnterotoxigenicEscherichlacoli，ETEC），ETEC的致病作用主要由肠毒素和黏附素性菌毛等两类毒力因子共同构成，其主要的致病环节是ETEC通过黏附素性菌毛与小肠黏膜上皮细胞上的特异性的受体相结合，继而增殖并产生大量毒素引起小肠吸收分泌功能失常而导致腹泻。通过母乳获得抗体，可以较好的防治仔猪ETEC感染性腹泻。但仔猪获得母乳抗体受多方面因素的影响，抗体在断奶后将很快消失，高免血清价格昂贵，抗生素治疗常引发细菌耐药性等问题。因此，现有技术还有待于改进和发展。
技术实现思路
鉴于上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种ETEC卵黄抗体粉及其制备方法，旨在解决现有抗体在断奶后将很快消失，高免血清价格昂贵，抗生素治疗常引发细菌耐药性的问题。本专利技术的技术方案如下：一种ETEC卵黄抗体粉的制备方法，其中，包括步骤：A、将大肠杆菌菌株在固体培养基35-40℃下培养18-24h；B、培养完后从固体培养基中粗提菌毛蛋白，并对粗提的菌毛蛋白进行纯化；C、将纯化后的菌毛蛋白与等体积的弗氏佐剂混合成油乳疫苗，然后用油乳疫苗免疫初产母鸡，免疫后收集血清和卵黄抗体；D、利用喷粉机将卵黄抗体进行喷雾干燥，制成卵黄抗体粉。所述的ETEC卵黄抗体粉的制备方法，其中，步骤A中，所述大肠杆菌菌株包括987P菌株、K99菌株和K88菌株；所述987P菌株、K99菌株和K88菌株对应的固体培养基分别为Slanctz固体培养基、Minca固体培养基和Slanctz固体培养基。所述的ETEC卵黄抗体粉的制备方法，其中，步骤B中，从固体培养基中粗提菌毛蛋白的步骤具体包括：用生理盐水清洗由固体培养基培养的菌苔，然后离心，离心后的沉淀悬浮在生理盐水中，再离心2-4次；再将离心后的沉淀物悬浮于含尿素的PBS缓冲液中，水浴中震动25-35min脱去沉淀物上的细菌，再在16000-18000r/min的条件下离心10-15min，去细菌沉淀，得到的上清即为粗提的菌毛蛋白。所述的ETEC卵黄抗体粉的制备方法，其中，步骤B中，对粗提的菌毛蛋白进行纯化的步骤具体包括：将粗提的菌毛蛋白在磁力搅拌的情况下，缓慢加入固体硫酸铵使之达到质量占比为25-35％，2-4℃放置沉淀过夜；将沉淀好的菌毛蛋白离心并收集沉淀，然后将沉淀溶于含尿素的Tris-Hcl缓冲液中，并用相同的缓冲液搅拌透析46-50小时，更换透析液2-3次，除去硫酸铵，即为纯化后的菌毛蛋白。所述的ETEC卵黄抗体粉的制备方法，其中，用油乳疫苗免疫初产母鸡的方法为：对初产母鸡进行多点注射油乳疫苗共2-2.5mL。所述的ETEC卵黄抗体粉的制备方法，其中，注射的次数为三次，所述三次的间隔时间为一免间隔两周后进行二免，二免间隔两周后进行三免。所述的ETEC卵黄抗体粉的制备方法，其中，免疫后收集血清和卵黄抗体的步骤具体包括：血液样本采集后于37℃放置1小时后于4℃存放过夜，次日取出抽取上清液-20℃保存待测；鸡蛋打破后，除去卵白和卵黄膜，以1:9的质量比例加入单蒸水置于搅拌器中搅拌均匀，于4℃沉淀过夜，取上清液既为脱脂卵黄抗体，加入适量庆大霉素，-20℃保存卵黄抗体。所述的ETEC卵黄抗体粉的制备方法，其中，步骤C中还包括：采用ELISA方法测定卵黄抗体效价。所述的ETEC卵黄抗体粉的制备方法，其中，步骤D具体包括：利用喷粉机将卵黄抗体以入口温度为160-180℃，出口温度为70-75℃进行喷雾干燥，制成卵黄抗体粉。一种ETEC卵黄抗体粉，其中，采用如上任一所述的ETEC卵黄抗体粉的制备方法制备而成。有益效果：ELISA方法分析免疫后卵黄抗体效价，发现以纯化菌毛蛋白作为抗原进行免疫，能获得较高效价的卵黄抗体。利用喷粉机，将卵黄抗体液进行喷雾干燥，制备卵黄抗体粉剂后，抗体效价仅下降了一个倍比度，卵黄抗体具有很好的高温稳定性，喷雾干燥法制粉工艺适用于卵黄抗体粉的生产。附图说明图1为大肠杆菌K88菌株相应培养基的菌毛蛋白SDS电泳图。图2为大肠杆菌K99菌株相应培养基的菌毛蛋白SDS电泳图。图3为大肠杆菌987P菌株相应培养基的菌毛蛋白SDS电泳图。具体实施方式本专利技术提供一种ETEC卵黄抗体粉及其制备方法，为使本专利技术的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本专利技术进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术提供一种ETEC卵黄抗体粉的制备方法，其中，包括步骤：A、将大肠杆菌菌株在固体培养基35-40℃下培养18-24h；B、培养完后从固体培养基中粗提菌毛蛋白，并对粗提的菌毛蛋白进行纯化；C、将纯化后的菌毛蛋白与等体积的弗氏佐剂混合成油乳疫苗，然后用油乳疫苗免疫初产母鸡，免疫后收集血清和卵黄抗体；D、利用喷粉机将卵黄抗体进行喷雾干燥，制成卵黄抗体粉。进一步地，步骤A中，所述大肠杆菌菌株包括987P菌株、K99菌株和K88菌株；所述987P菌株、K99菌株和K88菌株对应的固体培养基分别为Slanctz固体培养基、Minca固体培养基和Slanctz固体培养基。本专利技术上述987P菌株、K99菌株和K88菌株三者均为市购产品。进一步地，步骤B中，从固体培养基中粗提菌毛蛋白的步骤具体包括：用生理盐水清洗由固体培养基培养的菌苔，然后离心，离心后的沉淀悬浮在生理盐水中，再离心2-4次；再将离心后的沉淀物悬浮于含尿素的PBS缓冲液中，水浴中震动25-35min脱去沉淀物上的细菌，再在16000-18000r/min的条件下离心10-15min，去细菌沉淀，得到的上清即为粗提的菌毛蛋白。进一步地，步骤B中，对粗提的菌毛蛋白进行纯化的步骤具体包括：将粗提的菌毛蛋白在磁力搅拌的情况下，缓慢加入固体硫酸铵使之达到质量占比为25-35％，2-4℃放置沉淀过夜；将沉淀好的菌毛蛋白离心并收集沉淀，然后将沉淀溶于含尿素的Tris-Hcl缓冲液中，并用相同的缓冲液搅拌透析46-50小时，更换透析液2-3次，除去硫酸铵，即为纯化后的菌毛蛋白。进一步地，用油乳疫苗免疫初产母鸡的方法为：对初产母鸡进行多点注射油乳疫苗共2-2.5mL。进一步地，注射的次数为三次，所述三次的间隔时间为一免间隔两周后进行二免，二免间隔两周后进行三免。进一步地，免疫后收集血清和卵黄抗体的步骤具体包括：血液样本采集后于37℃放置1小时后于4℃存放过夜，次日取出抽取上清液-20℃保存待测；鸡蛋打破后，除去卵白和卵黄膜，以1:9的质量比例加入单蒸水置于搅拌器中搅拌均匀，于4℃沉淀过夜，取上清液既为脱脂卵黄抗体，加入适量庆大霉素，-20℃保存卵黄抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ETEC卵黄抗体粉的制备方法，其特征在于，包括步骤：A、将大肠杆菌菌株在固体培养基35‑40℃下培养18‑24h；B、培养完后从固体培养基中粗提菌毛蛋白，并对粗提的菌毛蛋白进行纯化；C、将纯化后的菌毛蛋白与等体积的弗氏佐剂混合成油乳疫苗，然后用油乳疫苗免疫初产母鸡，免疫后收集血清和卵黄抗体；D、利用喷粉机将卵黄抗体进行喷雾干燥，制成卵黄抗体粉。

【技术特征摘要】
1.一种ETEC卵黄抗体粉的制备方法，其特征在于，包括步骤：
A、将大肠杆菌菌株在固体培养基35-40℃下培养18-24h；
B、培养完后从固体培养基中粗提菌毛蛋白，并对粗提的菌毛蛋白进行纯化；
C、将纯化后的菌毛蛋白与等体积的弗氏佐剂混合成油乳疫苗，然后用油乳疫苗免疫初产母鸡，免疫后收集血清和卵黄抗体；
D、利用喷粉机将卵黄抗体进行喷雾干燥，制成卵黄抗体粉。
2.根据权利要求1所述的ETEC卵黄抗体粉的制备方法，其特征在于，步骤A中，所述大肠杆菌菌株包括987P菌株、K99菌株和K88菌株；所述987P菌株、K99菌株和K88菌株对应的固体培养基分别为Slanctz固体培养基、Minca固体培养基和Slanctz固体培养基。
3.根据权利要求1所述的ETEC卵黄抗体粉的制备方法，其特征在于，步骤B中，从固体培养基中粗提菌毛蛋白的步骤具体包括：用生理盐水清洗由固体培养基培养的菌苔，然后离心，离心后的沉淀悬浮在生理盐水中，再离心2-4次；再将离心后的沉淀物悬浮于含尿素的PBS缓冲液中，水浴中震动25-35min脱去沉淀物上的细菌，再在16000-18000r/min的条件下离心10-15min，去细菌沉淀，得到的上清即为粗提的菌毛蛋白。
4.根据权利要求1所述的ETEC卵黄抗体粉的制备方法，其特征在于，步骤B中，对粗提的菌毛蛋白进行纯化的步骤具体包括：将粗提的菌毛蛋白在磁力搅拌的情况下，缓慢加入固体硫酸铵使之达到质量占比为25-35％，2-4℃放置沉...

【专利技术属性】
技术研发人员：马春全，付强，李冬虹，李桂珍，王爱富，尚秀国，
申请(专利权)人：佛山科学技术学院，
类型：发明
国别省市：广东;44