藏木香中四种倍半萜类活性成分的提取分离制备方法技术

本发明专利技术涉及藏木香中四种倍半萜类活性成分的提取分离制备方法，包括以下步骤：将藏木香根粉碎并亚临界水提得萃取液并浓缩；将所得浓缩液用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取液；将乙酸乙酯萃取液经减压蒸干至恒重得萃取物；将所得萃取物用甲醇溶解，然后用制备型高效液相色谱等度洗脱，分别得到igalan、异土木香内酯、土木香内酯和Dugesialactone洗脱液，将洗脱液减压蒸干至恒重，即分别得到淡黄色粉末的igalan、异土木香内酯、土木香内酯和Dugesialactone。本发明专利技术简便、快捷，所得单体纯度均达98％以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于天然产物活性成分的提取分离
，尤其是涉及藏木香中四种倍半萜类活性成分的提取分离制备方法。技术背景藏木香(InularacemosaHook.f)为菊科(Compositae)旋覆花属(Inulae)植物。我国主要分布在四川、青海、甘肃、西藏等省，以根入药，是藏医、蒙医常用药材，具有行气镇痛、健脾消食、温中和胃、胸腔胀痛、食积不消等功效。在西藏、青海等卫生局编著的《藏药标准》中共记载290种成方制剂，其中使用藏木香的制剂有75种，约占藏药方剂的26％，是藏药材中使用率非常高的药材之一。现代药理学研究表明，藏木香中含有丰富的土木香内酯和异土木香内酯等倍半萜活性成分，具有止痉挛、健胃、抗炎、驱虫、降血糖、抗增殖、抑菌、保肝等作用，具有较好的开发利用前景。目前，藏木香提取分离纯化主要采用传统的有机溶剂萃取，传统柱色谱分离手段。工艺复杂、纯度不高，而且易残留有害物质，因此利用新型提取分离纯化技术显得尤为必要。尤其是，同时获得高纯度的igalan、异土木香内酯、土木香内酯和Dugesialactone四种倍半萜类活性成分的提取分离制备方法，未见相关报道。igalan、异土木香内酯、土木香内酯和Dugesialactone四种倍半萜类活性成分的结构式如下：亚临界水萃取技术是在上世纪90年代中期发展起来的新型萃取技术。亚临界水，是指在一定压力下(一般在5～20MPa)，温度处于100℃以上，临界温度374℃以下的高温水，且一直保持液体状态。通常条件下，水是极性化合物，在5MPa压力下，随温度升高(50～300℃)，其介电常数由70减小至1，也就是说其性质由强极性渐变为非极性，可将溶质按极性由高到低萃取出来。由于是不使用酸、碱和催化剂的水在高热高压下的处理技术，具有无毒害，安全性强，高效环保，操作简便的优势，因此亚临界水的提取方法被称之为“绿色的处理法”。目前，尚未有亚临界水提取藏木香中活性成分的研究报道。制备色谱是指采用色谱技术制备纯物质，即分离、收集一种或多种色谱纯物质。制备色谱可以获得足够量的单一化合物，以满足研究和其它用途。制备色谱具有分离速度快、重现性好、分离效能高、灵敏度高等优点，目前，己广泛用于医药、精细化工、食品等行业，在工业现代化进程中具有广阔的发展与应用前景。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种简便、快捷的藏木香中四种倍半萜类活性成分的提取分离制备方法。为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：藏木香中四种倍半萜类活性成分的提取分离制备方法，包括以下步骤：(1)将藏木香根粉碎至20～60目，得到藏木香粉末；(2)将步骤(1)所得的藏木香粉末放入亚临界水提取装置萃取釜中，以水为提取剂连续流动提取，水的流速控制在1～20mL/min，压力控制在0.5～3.0MPa之间，温度控制在120～250℃之间，提取时间为30-90min，最终的到萃取液；(3)将步骤(2)中得到的萃取液放入离心机的离心管中，在转速2000～6000r/min下离心5～15min后，取下离心管，得到上清液；(4)将步骤(3)中所得到的上清液于温度为55～80℃、压力为0.06～0.08MPa的条件下的旋转蒸发仪上浓缩回收，浓缩相当于原体积的5％～10％，得到浓缩液；(5)将步骤(4)所得浓缩液用乙酸乙酯萃取3～5次，得到乙酸乙酯萃取液和残余水液二部分；乙酸乙酯萃取液在温度为50～70℃、压力为0.06～0.08MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得萃取物；(6)将步骤(5)所得萃取物用甲醇溶解，甲醇与萃取物的液固比为2～10mL/g，得到藏木香倍半萜待分离样品；所得待分离样品，注入到制备型高效液相色谱仪中等度洗脱，分别得到igalan、异土木香内酯、土木香内酯和Dugesialactone洗脱液；该igalan、异土木香内酯、土木香内酯和Dugesialactone洗脱液分别在温度为50～70℃、压力为0.06～0.08MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即分别得到淡黄色粉末的igalan、异土木香内酯、土木香内酯和Dugesialactone。进一步，步骤(2)所述的提取溶剂水为去离子水、蒸馏水或者高纯水，使用的设备为连续流动式的亚临界提取的反应釜。进一步，步骤(6)所述的制备型高效液相色谱仪中的液相柱填料为C8或C18键合相填料，填料粒径为4～10μm；制备型高效液相色谱流动相为乙腈-水按48:52(v/v)的比例混合而成的混合溶剂，流速为60mL/min。纯度检测：为了确证本专利技术所制备的藏木香中igalan、异土木香内酯、土木香内酯和Dugesialactone四种倍半萜类活性成分的纯度，将分离得到的单体分别利用高效液相色谱检测纯度；在纯度检测中高效液相色谱(HPLC)检测条件是指采用长度为250mm、直径为4.6mm且填料粒径为5μm的C18色谱柱，柱温25℃；流动相为乙腈：水＝48:52(v/v)的混合溶剂，流速为1mL/min；检测波长为210nm；结果表明本专利技术制备的藏木香中igalan、异土木香内酯、土木香内酯和Dugesialactone四种倍半萜类活性成分的纯度均高于98％。(参见图2-5)结构鉴定：将本专利技术制备的四种倍半萜类活性成分经1H-NMR、13C-NMR鉴定为igalan、异土木香内酯、土木香内酯和Dugesialactone。Igalan：核磁共振氢谱数据1H-NMR(CD3OD,400MHz)δppm:6.23(1H,d,J＝2.4Hz,H-13a),5.60(1H,d,J＝2.4Hz,H-13b),4.49(1H,m,H-8),3.03(1H,m,H-7),1.62(3H,s,15-CH3),1.04(3H,s,14-CH3)；核磁共振碳谱数据13CNMR(CD3OD,400MHz)δppm:42.4(C-1),18.6(C-2),31.8(C-3),127.1(C-4),131.1(C-5),27.5(C-6),40.9(C-7),76.4(C-8),36.9(C-9),33.4(C-10),140.3(C-11)，170.7(C-12),121.3(C-13),19.1(C-14),26.7(C-15)。异土木香内酯：核磁共振氢谱数据1H-NMR(CD3OD,400MHz)δppm:6.05(1H,br.S,H-13a),5.69(1H,br.S,H-13b),4.76(1H,d,J＝1.4Hz,H-15a),4.45(1H,d,J＝1.4Hz,H-15b),4.53(1H,br.S,H-8),3.06(1H,m,H-7),2.34(1H,d,J＝12.0Hz,H-3b),2.14(1H,d,J＝16.0Hz,H-9a),2.02(1H,m,H-3a),1.80(1H,d,J＝12.5Hz,H-5),1.75(1H,o.m,H-6a),1.73(1H,o.m,H-9b),1.61(1H,o.m,H-2),1.54(1H,o.m,H-la),1.35(1H,m,H-6b),1.27本文档来自技高网...

【技术保护点】
藏木香中四种倍半萜类活性成分的提取分离制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将藏木香根粉碎至20～60目，得到藏木香粉末；(2)将步骤(1)所得的藏木香粉末放入亚临界水提取装置萃取釜中，以水为提取剂连续流动提取，水的流速控制在1～20mL/min，压力控制在0.5～3.0MPa之间，温度控制在120～250℃之间，提取时间为30‑90min，最终的到萃取液；(3)将步骤(2)中得到的萃取液放入离心机的离心管中，在转速2000～6000r/min下离心5～15min后，取下离心管，得到上清液；(4)将步骤(3)中所得到的上清液于温度为55～80℃、压力为0.06～0.08MPa的条件下的旋转蒸发仪上浓缩回收，浓缩相当于原体积的5％～10％，得到浓缩液；(5)将步骤(4)所得浓缩液用乙酸乙酯萃取3～5次，得到乙酸乙酯萃取液和残余水液二部分；乙酸乙酯萃取液在温度为50～70℃、压力为0.06～0.08MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即得萃取物；(6)将步骤(5)所得萃取物用甲醇溶解，甲醇与萃取物的液固比为2～10mL/g，得到藏木香倍半萜待分离样品；所得待分离样品，注入到制备型高效液相色谱仪中等度洗脱，分别得到igalan、异土木香内酯、土木香内酯和Dugesialactone洗脱液；该igalan、异土木香内酯、土木香内酯和Dugesialactone洗脱液分别在温度为50～70℃、压力为0.06～0.08MPa的条件下经减压蒸干至恒重，即分别得到淡黄色粉末的igalan、异土木香内酯、土木香内酯和Dugesialactone。...

【技术特征摘要】
1.藏木香中四种倍半萜类活性成分的提取分离制备方法，其特征在于，包括
以下步骤：
(1)将藏木香根粉碎至20～60目，得到藏木香粉末；
(2)将步骤(1)所得的藏木香粉末放入亚临界水提取装置萃取釜中，以水
为提取剂连续流动提取，水的流速控制在1～20mL/min，压力控制在0.5～
3.0MPa之间，温度控制在120～250℃之间，提取时间为30-90min，最终的
到萃取液；
(3)将步骤(2)中得到的萃取液放入离心机的离心管中，在转速2000～6000
r/min下离心5～15min后，取下离心管，得到上清液；
(4)将步骤(3)中所得到的上清液于温度为55～80℃、压力为0.06～0.08MPa
的条件下的旋转蒸发仪上浓缩回收，浓缩相当于原体积的5％～10％，得到浓
缩液；
(5)将步骤(4)所得浓缩液用乙酸乙酯萃取3～5次，得到乙酸乙酯萃取液
和残余水液二部分；乙酸乙酯萃取液在温度为50～70℃、压力为0.06～0.08MPa
的条件下经减压蒸干至恒重，即得萃取物；
(6)将步骤(5)所得萃取物用甲醇溶解，甲醇与萃取...

【专利技术属性】
技术研发人员：迟晓峰，胡风祖，董琦，肖远灿，陈世龙，
申请(专利权)人：中国科学院西北高原生物研究所，
类型：发明
国别省市：青海;63