双叠氮取代聚四乙二醇的制备方法及应用技术

本发明专利技术创造提供了一种双叠氮取代聚四乙二醇，其结构式如下：本发明专利技术合成的双叠氮取代聚四乙二醇可以促进成纤维细胞以及上皮细胞的增殖及迁移，促进细胞中Collagen I蛋白的表达，并且可以刺激细胞中与炎症反应有关的细胞因子，包括NF‑κB、STAT3、AP1、Myc，综合发挥促伤口愈合的作用，并且在极低剂量下即可发挥显著疗效。因此，本发明专利技术中的双叠氮取代聚四乙二醇将有可能改变已有促伤口愈合药物的市场格局，成为一种可长期使用，且有效促进伤口愈合，改善愈合效果的临床药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术创涉及药物化学领域，具体是一种双叠氮取代聚四乙二醇化合物及其制备方法，以及其在促进伤口愈合、消炎、杀菌方面的作用。
技术介绍
皮肤是人体最大的器官，对人体起到重要的屏障保护作用。皮肤组织在受到损伤后的愈合过程是一个复杂的过程，众多因子都参与其中。胶原蛋白(Collagen)作为细胞外基质的重要组成部分，构成了新生皮肤组织的主要部分。基质金属蛋白酶(MMPs)可以切割细胞外基质的成分以及其他的蛋白酶、生长因子等。转化生长因子(TGF-β)促进胶原发生沉积、表皮细胞移动，影响细胞外基质的塑形。而NF-κB、AP1、STAT3、Myc等作为与炎性反应有关的细胞通路因子在炎症反应中发挥着重要的作用。当皮肤受到损伤或者伤口较大难以很快愈合时，都会导致外界的病毒以及有害物质入侵到人体内部，造成伤口处出现感染、化脓等症状，这都会使愈合难度加大。所以促伤口愈合药物的研发一直以来都是科学家们研究的内容。传统应用于临床治疗的伤口药物大多是只能抑制伤口感染，促进伤口愈合的药物较少而且副作用较大。比如重组人表皮生长因子外用溶液可以造成瘢痕过度增生和愈合质量的下降，甚至可能导致胆脂瘤及细胞恶变；磺胺嘧啶银中的银离子会被机体大量吸收，肝肾功能会受到一定程度的损害；红霉素软膏等对真正体现伤口愈合速度的各种组织细胞的增殖作用较小。这些药物对于促进伤口愈合的整体效果并不理想。尤其一些大的伤口，由于创面愈合时间长，很容易造成感染，将严重影响患者的工作以及生活。因此开发既能抗感染，又能促进伤口愈合的药物具有重要意义。关于叠氮类物质具有促进伤口愈合的作用此前还从未有过报道。本项目组在研究工作中发现了一种有机叠氮类物质，其可以有效地促进伤口愈合，有望开发为促进伤口愈合的药物。
技术实现思路
针对现有药物在促进伤口愈合过程中所呈现出来的弊端，本专利技术的目的在于提供一种化学合成的双叠氮取代聚四乙二醇化合物并公开其在促伤口愈合药物中的应用。为达到上述目的，本专利技术创造的技术方案是这样实现的：一种双叠氮取代聚四乙二醇，其结构式如下：所述的双叠氮取代聚四乙二醇的制备方法，其反应式如下：制备方法包括如下步骤：(1)在N2保护下向盛有四氢呋喃的烧瓶中加入反应量的聚四乙二醇，随后搅拌状态下加入反应量的甲烷磺酰氯并搅拌均匀；(2)在冰浴条件下，将适量三乙胺和四氢呋喃混合后逐滴滴加到烧瓶中，随后生成黄白色沉淀，1～2小时后将冰浴装置移除，混合物继续搅拌3～4小时；(3)撤掉逐滴滴加以及N2保护装置，加入适量水溶解，形成两个液相；(4)将步骤(3)所得双液相混合物冰浴冷却后，加NaHCO3调节pH≥8，之后加入反应量的氮化钠，回流20-24小时；(5)最后通过萃取，除水，旋蒸，抽滤得到所需化合物。进一步的，所述反应物的物质的量之比为：聚四乙二醇：甲烷磺酰氯：三乙胺：叠氮化钠＝1：2.22：2.22：2.05。本专利技术还涉及双叠氮取代聚四乙二醇的用途，即所述双叠氮取代聚四乙二醇是在制备促进伤口愈合药物中的应用。所述双叠氮取代聚四乙二醇可以促进成纤维细胞以及上皮细胞的增殖及迁移，促进细胞中CollagenI蛋白的表达，并且可以刺激细胞中与炎症反应有关的细胞因子，包括NF-κB、STAT3、AP1、Myc，综合发挥促伤口愈合的作用。进一步的，其在在剂量为0.05-1.533mmol/l的浓度范围下即可发挥作用。进一步的，所述双叠氮取代聚四乙二醇在促进伤口愈合药物中针对的细菌为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、沙门氏菌、白色念珠菌或霉菌中的一种或多种。进一步的，所述促伤口愈合药物中包括双叠氮取代聚四乙二醇或其在药学上可接受的盐、酯，水合物或他们的组合以及辅料。更进一步的，所述促伤口愈合药物的药剂形式为粉剂、混悬剂、凝胶剂、乳浊剂、胶体溶液剂、胶浆剂、软膏剂、硬膏剂、贴剂等药学上可接受的外用药的制剂和剂型。相对于现有技术，本专利技术创造所述的双叠氮取代聚四乙二醇具有以下优势：本专利技术创造合成的双叠氮取代聚四乙二醇可以促进成纤维细胞以及上皮细胞的增殖及迁移，促进细胞中CollagenI蛋白的表达，并且可以刺激细胞中与炎症反应有关的细胞因子，包括NF-κB、STAT3、AP1、Myc，综合发挥促伤口愈合的作用。并且在极低剂量下即可发挥显著疗效，因此，本专利技术中的双叠氮取代聚四乙二醇改变已有促伤口愈合药物的市场价格，成为一种可长期使用，且有效促进伤口愈合，改善愈合效果的临床药物。附图说明构成本专利技术创造的一部分的附图用来提供对本专利技术创造的进一步理解，本专利技术创造的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术创造，并不构成对本专利技术创造的不当限定。在附图中：图1示出了双叠氮取代聚四乙二醇化合物的核磁检测结果图；图2示出了双叠氮取代聚四乙二醇给药组与对照组的昆明小鼠皮肤组织愈合的对比效果图；图3示出了双叠氮取代聚四乙二醇给药组与对照组的昆明小鼠创伤面积统计对比图；图4示出了造模后给药第9天昆明小鼠皮肤组织H.E染色和第19天皮肤组织的Masson染色结果；图5示出了给药9天和19天后，昆明小鼠皮肤组织的免疫组化染色评分结果；图6示出了双叠氮取代聚四乙二醇对NIH-3T3细胞、HaCaT细胞增殖的影响；图7示出了双叠氮取代聚四乙二醇对NIH-3T3、HaCaT细胞迁移的影响；图8示出了双叠氮取代聚四乙二醇对NIH-3T3、HaCaT细胞CollagenI的分泌的影响；图9示出了双叠氮取代聚四乙二醇对NIH-3T3、HaCaT细胞内转录因子的影响；图10示出了双叠氮取代聚四乙二醇的抑菌作用。具体实施方式除非另外说明，本文中所用的术语均具有本领域技术人员常规理解的含义，为了便于理解本专利技术，将本文中使用的一些术语进行了下述定义。在说明书和权利要求书中使用的，单数型“一个”和“这个”包括复数参考，除非上下文另有清楚的表述。例如，术语“(一个)细胞”包括复数的细胞，包括其混合物。所有的数字标识，例如pH、温度、时间、浓度，包括范围，都是近似值。要了解，虽然不总是明确的叙述所有的数字标识之前都加上术语“约”。同时也要了解，虽然不总是明确的叙述，本文中描述的试剂仅仅是示例，其等价物是本领域已知的。下面结合实施例及附图来详细说明本专利技术创造。所述实施例中，主要试验材料及药物配制方法如下：(1)小鼠昆明小鼠:由中国人民解放军军事医学科学院试验动物中心和北京维通利华实验动物技术有限公司提供。(2)细胞系：小鼠胚胎成纤维细胞系(NIH-3T3)、人永生化表皮细胞系(HaCaT)：购自南京凯基生物科技发展有限公司(3)主要药物及试剂的配制方法：a)1％明胶溶液：称取0.5g明胶粉末，溶于50mL的0.9％生理盐水中，置于42℃水浴锅中使其充分溶解即可。b)双叠氮取代聚四乙二醇明胶溶液：称取0.207g双叠氮取代聚四乙二醇溶于100μLD本文档来自技高网...

【技术保护点】
双叠氮取代聚四乙二醇，其特征在于，其结构式如下：

【技术特征摘要】
1.双叠氮取代聚四乙二醇，其特征在于，其结构式如下：
2.根据权利要求1所述的双叠氮取代聚四乙二醇的制备方法，其特征
在于，其反应式如下：
制备方法包括如下步骤：
(1)在N2保护下向盛有四氢呋喃的烧瓶中加入反应量的聚四乙二醇，
随后搅拌状态下加入反应量的甲烷磺酰氯并搅拌均匀；
(2)在冰浴条件下，将适量三乙胺和四氢呋喃混合后逐滴滴加到烧瓶
中，随后生成黄白色沉淀，1～2小时后将冰浴装置移除，混合物继续搅拌3～4
小时；
(3)撤掉逐滴滴加以及N2保护装置，加入适量水溶解，形成两个液相；
(4)将步骤(3)所得双液相混合物冰浴冷却后，加NaHCO3调节pH≥8，
之后加入反应量的氮化钠，回流20～24小时；
(5)最后通过萃取，除水，旋蒸，抽滤得到所需化合物。
3.权利要求2所述的双叠氮取代聚四乙二醇的制备方法，其特征在于：
所述反应物的物质的量之比为：聚四乙二醇：甲烷磺酰氯：三乙胺：氮化钠
＝1：2.22：2.22：2...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨诚，孙涛，周红刚，孙波，刘慧娟，刘艳荣，陈双，李阳，刘学强，周磊，于恒恒，秦源，孟晶，仲威龙，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：天津;12