一种诊治肺鳞癌转移的分子标志物制造技术

本发明专利技术公开了一种用于肺鳞癌转移诊断的分子标志物‑KLHDC8B基因及其表达产物。本发明专利技术利用QPCR和Western blot方法证明KLHDC8B基因在已发生转移的肺鳞癌组织和未发生转移的肺鳞癌组织中存在差异表达，可以作为诊断肺鳞癌转移的指标。另外，本发明专利技术还公开了KLHDC8B基因及其表达产物可以作为肺鳞癌转移治疗的靶标，用于指导新药的研发。

【技术实现步骤摘要】
一种诊治肺鳞癌转移的分子标志物
本专利技术涉及生物
，具体地涉及KLHDC8B基因在肺鳞癌转移的诊断、治疗中的用途。
技术介绍
本申请目的是寻找一种能够诊断肺鳞癌转移的特异性的标志物。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种可用于肺鳞癌转移早期诊断的分子标志物。使用基因标志物来诊断肺鳞癌转移具有及时性、特异性和灵敏性，从而使患者在疾病早期就能知晓疾病风险，针对风险高低，采取相应的预防和治疗措施。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了检测KLHDC8B基因表达的产品在制备诊断肺鳞癌转移的工具中的应用。进一步，所述检测KLHDC8B基因表达的产品包括检测KLHDC8B基因mRNA水平的产品、和/或检测KLHDC8B蛋白水平的产品。进一步，所述检测KLHDC8B基因表达的产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片检测KLHDC8B基因及其表达产物的表达水平以诊断肺鳞癌转移的产品。进一步，所述用RT-PCR诊断肺鳞癌转移的产品至少包括一对特异扩增KLHDC8B基因的引物；所述用实时定量PCR诊断肺鳞癌转移的产品至少包括一对特异扩增KLHDC8B基因的引物；所述用免疫检测诊断肺鳞癌转移的产品包括：与KLHDC8B蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交诊断肺鳞癌转移的产品包括：与KLHDC8B基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片诊断肺鳞癌转移的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与KLHDC8B蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与KLHDC8B基因的核酸序列杂交的探针。所述用实时定量PCR诊断肺鳞癌转移的产品至少包括的一对特异扩增KLHDC8B基因的引物如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。所述检测KLHDC8B基因表达的产品可以是检测KLHDC8B基因表达的试剂、也可以是包含所述试剂的试剂盒、芯片、试纸等，也可以是使用所述试剂的高通量测序平台。所述诊断肺鳞癌转移的工具包括但不限于芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台；高通量测序平台是一种特殊的诊断肺鳞癌转移的工具，随着高通量测序技术的发展，对一个人的基因表达谱的构建将成为十分便捷的工作。通过对比疾病患者和正常人群的基因表达谱，容易分析出哪个基因的异常与疾病相关。因此，在高通量测序中获知KLHDC8B基因的异常与肺鳞癌转移相关也属于KLHDC8B基因的用途，同样在本专利技术的保护范围之内。本专利技术还提供了一种诊断肺鳞癌转移的工具，所述工具包括检测KLHDC8B基因表达的试剂；所述试剂包括检测KLHDC8B基因mRNA的引物和/或探针、检测KLHDC8B蛋白的抗体。所述工具包括但不限于芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台。其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片；所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测KLHDC8B基因转录水平的针对KLHDC8B基因的寡核苷酸探针；所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体的KLHDC8B蛋白的特异性抗体；所述基因芯片可用于检测包括KLHDC8B基因在内的多个基因(例如，与肺鳞癌转移相关的多个基因)的表达水平。所述蛋白质芯片可用于检测包括KLHDC8B蛋白在内的多个蛋白质(例如与肺鳞癌转移相关的多个蛋白质)的表达水平。通过将多个与肺鳞癌转移的标志物同时检测，可大大提高肺鳞癌转移诊断的准确率。其中，所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒；所述基因检测试剂盒包括用于检测KLHDC8B基因转录水平的试剂；所述蛋白免疫检测试剂盒包括KLHDC8B蛋白的特异性抗体。进一步，所述试剂包括使用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片方法检测KLHDC8B基因表达水平过程中所需的试剂。优选度，所述试剂包括针对KLHDC8B基因的引物和/或探针。根据KLHDC8B基因的核苷酸序列信息容易设计出可以用于检测KLHDC8B基因表达水平的引物和探针。所述试纸包括检测KLHDC8B基因表达的试剂。所述高通量测序平台包括检测KLHDC8B基因表达的试剂。与KLHDC8B基因的核酸序列杂交的探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其它衍生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结合，任何长度都可以。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探针的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度对杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般不超过30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所述探针自身互补序列最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。进一步，所述KLHDC8B蛋白的特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。所述KLHDC8B蛋白的特异性抗体包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰(例如，嵌合抗体、scFv、Fab、F(ab’)2、Fv等。只要所述片段能够保留与KLHDC8B蛋白的结合能力即可。用于蛋白质水平的抗体的制备时本领域技术人员公知的，并且本专利技术可以使用任何方法来制备所述抗体。在本专利技术的具体实施方案中，所述检测KLHDC8B基因mRNA的引物包括SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示的引物对。本专利技术还提供了KLHDC8B基因和/或其表达产物的促进剂在制备治疗肺鳞癌转移的药物中的应用。所述促进剂包括促进KLHDC8B基因表达的试剂和促进KLHDC8B基因表达产物的试剂；所述促进KLHDC8B基因表达的试剂包括促进基因转录的试剂、促进基因翻译的试剂、促进KLHDC8B蛋白含量的试剂；所述促进KLHDC8B基因表达产物的试剂包括促进KLHDC8B基因表达产物稳定性的试剂、促进KLHDC8B基因表达产物活性的试剂、促进KLHDC8B基因表达产物功能的试剂。具体地，所述促进KLHDC8B基因表达的试剂包括：含有KLHDC8B基因的试剂、携带KLHDC8B基因的载体或宿主细胞所形成的试剂、含有KLHDC8B蛋白质的试剂。本专利技术的促进剂一方面可以用于补充内源性的KLHDC8B蛋白的缺失或不足，通过提高KLHDC8B蛋白的表达，从而治疗因KLHDC8B蛋白缺乏导致的肺鳞癌转移。另一方面可以用于促进KLHDC8B蛋白的活性或者功能，从而治疗肺鳞癌转移。本专利技术所述携带基因的载体是本领域已知的各种载体，如市售的载体、包括质粒、粘粒、噬菌体、病毒等。在本专利技术中，术语“宿主细胞”包括原核细胞和真核细胞。常用的原核宿主细胞的例子包括大肠杆菌、枯草杆菌等。常用的真核宿主细胞包括酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞。较佳地，该宿主细胞是真核细胞，如CHO细胞、COS细胞等。本专利技术还提供了一种用于治疗肺鳞癌转移的药物组合物，所述药物组合物包括上面所述的KLHDC8B基因和/或其表达产物的促进剂。进一步，本专利技术的药物还包括药学上可接受的载体，载体，这类载体包括(但并不限于)：稀释剂、赋形剂如水等、填充剂如淀粉、蔗糖等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂季铵化合物；表面活性剂如十六烷本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测KLHDC8B基因表达的产品在制备诊断肺鳞癌转移的工具中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测KLHDC8B基因表达的产品在制备诊断肺鳞癌转移的工具中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测KLHDC8B基因表达以诊断肺鳞癌转移的产品。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述用RT-PCR诊断肺鳞癌转移的产品至少包括一对特异扩增KLHDC8B基因的引物；所述用实时定量PCR诊断肺鳞癌转移的产品至少包括一对特异扩增KLHDC8B基因的引物；所述用免疫检测诊断肺鳞癌转移的产品包括：与KLHDC8B蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交诊断肺鳞癌转移的产品包括：与KLHDC8B基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片诊断肺鳞癌转移的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与KLHDC8B蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与KLHDC8B基因的核...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨承刚，孙耀兰，宋宏涛，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11