本发明专利技术提供了一种杀菌化合物，所述杀菌化合物的结构式如下式所示：本发明专利技术对解淀粉芽孢杆菌HAB-2的发酵液的具体活性成分进行研究，分离得到改杀菌化合物，具有广谱的抑制热带病原真菌的活性，并且对部分植物具有促进生长，对鲜果具有保鲜的作用，值得进一步的研究。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于化合物领域，具体涉及。
技术介绍
芽孢杆菌是一类产生芽孢的革兰氏阳性菌株，它的分布广泛，生理特征丰富，易于 分离和培养，是自然界中重要的微生物菌群，芽孢杆菌可以产生多种抗菌活性物质，包括由 非核糖体途径合成的非核糖体肽类抗生素以及由核糖体途径合成的细菌素、酶类及其他活 性蛋白类抗菌物质等。 168菌株是芽孢杆菌的模式菌株，也是目前研究的最为透彻的菌株，他的全基因组 已于1997年测序完成。与野生芽孢杆菌不同的是模式菌株168由于在实验室的长期继代培 养，发生了很多的自发突变因而丧失了很多野生型的特点，比如sfp基因的自发突变，使得 168菌株丧失了产生脂肽类化合物的能力，因而缺失了抑菌的能力。sfp基因编码的4'-磷酸 泛酰巯基乙胺基转移酶，是芽孢杆菌非核糖体途径合成脂肽类化合物的关键基因。 本研究的目标菌株解淀粉芽孢杆菌HAB-2( 2015年1月27日在中国典型培养物保藏 中心进行了菌种保藏，并证明存活，其保藏登记号为：CCTCC M 2015070,地址为武汉大学 内）经过一系列的前期实验表明：生防菌HAB-2具有广谱的抑制热带病原真菌的活性，并且 对部分植物具有促进生长，对鲜果具有保鲜的作用，但是该菌株没有sfp基因，但是通过现 代的仪器分析手段我们又在HAB-2发酵液中检测得到了由于sfp缺失而不可能得到的脂肽 类物质一一表面活性素类物质，因此研究该菌株的具体活性成分很有必要，值得进一步的 研究。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决现有技术中的不足，对解淀粉芽孢杆菌HAB-2的发酵液的 具体活性成分进行研究，提供一种杀菌化合物，本专利技术还提供了含有改杀菌化合物的杀菌 剂，以及该杀菌化合物的制备方法。 本专利技术的第一个方面是提供一种杀菌化合物，所述杀菌化合物(下文中称为化合 物H2)的结构式如下式所示： 优选地，所述杀菌化合物分离自解淀粉芽孢杆菌HAB-2的发酵液中，所述菌株HAB-2的保藏编号为:CCTCC M 2015070。 进一步优选地，所述解淀粉芽孢杆菌HAB-2的发酵液的采用下述步骤制备而成;将 解淀粉芽孢杆菌HAB-2接种于液体的溶菌肉汤培养基中，在26~30°C的条件下，50~500转/ 分钟摇菌1~3天，即得到发酵液。 本专利技术第二个方面是提供一种杀菌剂，所述杀菌剂的活性成分包括本专利技术第一个 方面所述的任意一种杀菌化合物。 本专利技术的第三个方面是提供本专利技术第一个方面所述的杀菌化合物的制备方法:所 述杀菌化合物从解淀粉芽孢杆菌HAB-2的发酵液中分离得到。 优选地，所述制备方法包括以下步骤： 步骤1，取解淀粉芽孢杆菌HAB-2的发酵液，正丁醇萃取，取萃取液，浓缩； 步骤2,对浓缩物采用柱层析分离得到所述杀菌化合物。 进一步优选地，柱层析分离包括以下步骤： (1)对浓缩物使用减压柱层析（抽柱Vacuum Liquid Chromatography)，采用氯仿 和甲醇进行梯度洗脱； (2)取具有抑菌活性的馏分，采用常压柱分离，洗脱所用溶剂为步骤（1)中洗脱出 具有抑菌活性的馏分的溶剂； (3)取步骤(2)得到的馏分中具有抑菌活性的馏分，采用凝胶柱分离，洗脱所用溶 剂为步骤(1)中洗脱出具有抑菌活性的馏分的溶剂； (4)取步骤(3)得到的馏分中具有抑菌活性的馏分，采用凝胶柱分离洗脱所用溶剂 为甲醇； (5)取取步骤(4)得到的馏分中具有抑菌活性的馏分，过C18反向柱，采用甲醇和水 梯度洗脱，合并具有抑菌活性的部分，浓缩干燥，既得。 更进一步优选地，若步骤（1)得到的具有抑菌活性的馏分由不同比例的氯仿和甲 醇的混合溶剂洗脱出来的，则步骤(2)洗脱所用溶剂的极性小于或等于步骤(3)洗脱所用溶 液的极性。 优选地，所述解淀粉芽孢杆菌HAB-2的发酵液的采用下述步骤制备而成;将解淀粉 芽孢杆菌HAB-2接种于液体的溶菌肉汤培养基中，在26~30°C的条件下，50~500转/分钟摇 菌1~3天，即得到发酵液。 本专利技术对解淀粉芽孢杆菌HAB-2的发酵液的具体活性成分进行研究，分离得到化 合物H2，具有广谱的抑制热带病原真菌的活性，并且对部分植物具有促进生长，对鲜果具有 保鲜的作用，值得进一步的研究。【附图说明】 图1为化合物H2的1H-1H C0SY、HMBC和NOSEY的关联图； 图2为减压柱层析分离得到的各馏分的薄层层析色谱和抑菌效果图，其中，图a为 抑菌试验结果，图b为薄层层析色谱，1为脂肽，2为甲醇冲柱馏分，3为C:M=1:1冲柱馏分(C 为氯仿，M为甲醇），4为C:M=2:1冲柱馏分，5为C:M=3:1冲柱馏分，6.为C:M = 5:1冲柱馏分7 为正丁醇提取物； 图3为过常压柱得到的各馏分的薄层层析色谱和抑菌效果图，其中，图a抑菌试验 结果，图b为薄层层析色谱； 图4为过C:M=1:1凝胶柱得到的各馏分的薄层层析色谱和抑菌效果图，其中，图a 和图b为抑菌试验结果，图c为薄层层析色谱； 图5为过甲醇凝胶柱得到的各馏分的抑菌效果图； 图6过C18反向柱得到的各馏分的抑菌效果图； 图7为提纯的化合物H2的抑菌效果图，其中，图a为抑菌试验结果，1为正丁醇提取 物，2为过C18反向柱得到活性成分，3为提纯的化合物H2;图b为化合物H2的薄层层析色谱； 图8为化合物H2的氨基酸分析图； 图9为化合物H2与咪鲜胺抑菌能力比较结果图，其中，图a为抑菌试验结果，1为咪 酰胺，2为脂肽提取物，3为正丁醇提取物，4为纯品化合物H2,图b为咪鲜胺与抑菌圈大小线 性回归方程图。【具体实施方式】 下面参照附图，结合具体的实施例对本专利技术做进一步的说明，以更好地理解本发 明。 1、化合物分离 1.1解淀粉芽孢杆菌HAB-2的发酵液将保存的生防菌菌株HAB-2接种于溶菌肉汤培养基上28°C活化培养，培养3天，挑 去黄豆粒大小的生防菌HAB-2加入到液体的溶菌肉汤培养基中，28°C，200转每分钟摇菌2 天，即得到发酵液，利用高速离心机，10000转每分钟离心10分钟去除菌体，得到无菌体发酵 液， I. 2正丁醇萃取法按照体积比1:1的比例将发酵液与正丁醇充分混合，静止12个小时，分液漏斗萃取 得到上层正丁醇，利用旋转蒸发仪，蒸出有机溶剂正丁醇即得到浓缩物。 1.3减压柱层析 对浓缩物使用减压柱层析，采用氯仿(C)和甲醇(M)进行梯度洗脱:C:M = 5:1(V/V) 4C:M=3:1(V/V)-C:M = 2:1(V/V)4C:M=1:1(V/V)-M。通过硅胶 TLC 薄层层析来检测馏 分和更换洗脱溶剂。 将芒果炭疽病病原真菌接种于马铃薯葡糖糖琼脂培养基上，将各馏分滴加灭菌滤 纸片上彻底干燥以后，均匀的贴在培养基上，检测各馏分的抑菌活性。结果如图2所当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种杀菌化合物，其特征在于，所述杀菌化合物的结构式如下式所示：
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：缪卫国，靳鹏飞，王皓楠，刘文波，郑服丛，谢清标，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：海南;66
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。