本发明专利技术公开一种叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料，通过蛋白质与叶酸分子的交联，合成叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料。叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料在保留牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料高催化活性的基础上还能够特异性识别细胞表面叶酸受体，利用3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐显色反应，可快速灵敏地检测表面叶酸受体高表达的肿瘤细胞。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及叶酸-牛血清白蛋白-纳米铀祕纳米复合材料及其制备方法，并提供一种基于叶酸-牛血清白蛋白-纳米铂铋纳米复合材料快速灵敏地检测叶酸受体高表达的肿瘤细胞的方法和检测试剂盒。属于纳米技术和生命分析
技术介绍
叶酸是一种小分子维生素，广泛分布在人体中，起重要的生理作用。自1986年科学家发现叶酸是由受体介导的内吞途径进入细胞以来，人们开始对叶酸作为靶向载体进行深入研究。专家已经证实在卵巢癌、肾癌、头颈部肿瘤、肺癌、乳腺癌、结直肠癌等恶性上皮组织来源肿瘤、关节炎部位有过表达的叶酸受体。因此，叶酸作为其靶向标记物，能够和叶酸受体进行特异性结合就能与叶酸受体特异性结合并选择性浓集于叶酸受体表达丰富的组织(肿瘤)中，如果对结合的叶酸做颜色等标记，我们便可以从各种医学显影手段上定位观察出病灶浓集的区域，并针对该区域进行治疗，其集中性、准确性对于癌症治疗的疗效提供了巨大的帮助。与其他靶向分子如单克隆抗体相比，叶酸相对分子质量小、无免疫原性、价廉易得、稳定性好、与药物或载体之间的化学键合简单易行。生物分子复合纳米材料是在对生物矿化分子进行充分研究的基础上，利用矿化分子中的小肽和蛋白质设计和制备的无机纳米材料。利用蛋白质为模板制备的复合纳米材料在三维空间中至少有一维处于纳米尺度范围或者由该尺度范围的物质为基本结构单元所构成，其尺度已经接近光的波长并且具有大表面的特殊效应，因此该类材料是一种典型的介观系统，具有表面效应、小尺寸效应、宏观量子隧道效应和量子限域效应。本专利技术以牛血清白蛋白为模板，制备一种牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料，通过蛋白质羧基和叶酸分子的氨基进行交联反应，合成叶酸-牛血清白蛋白-纳米铀祕纳米复合材料。该纳米复合材料具有模拟过氧化物酶活性并能与叶酸受体特异性结合，可用于快速灵敏地检测叶酸受体高表达的肿瘤细胞检测。
技术实现思路
本专利技术的目的是以牛血清白蛋白为模板，制备一种牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料，以及通过蛋白质羧基和叶酸分子的氨基进行交联反应，提供一种合成叶酸-牛血清白蛋白-纳米铂铋纳米复合材料的方法。该纳米复合材料具有模拟过氧化物酶活性并能与叶酸受体特异性结合，可用于快速灵敏地检测叶酸受体高表达的肿瘤细胞检测。为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案: 本专利技术所述的一种叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料，其特征是由以下方法制备而成的:在叶酸水溶液中，加入1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)_碳化二亚胺，反应后，加入牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料水溶液，反应后溶液装入截止分子量为3k的超滤管，6000r/min离心超滤，并水洗3次，得到叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料水溶液，将叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料水溶液冷冻干燥得到叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料粉末;所述叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料具有模拟过氧化物酶活性，能催化过氧化氢氧化3，3’，5，5’ -四甲基联苯胺盐酸盐显色，并能识别细胞膜表面叶酸受体。所述的一种叶酸-牛血清白蛋白-铀祕纳米复合材料，其特征是在2.79mL浓度为100 mmol/L,pH =5的磷酸盐缓冲液中依次加入I mL浓度为2 mol/L的过氧化氢、0.2 mL浓度为16 mmol/L的3，3’，5，5’_四甲基联苯胺盐酸盐、10 yL浓度为4.76 mg/mL的叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料水溶液，37 °C温浴10分钟，溶液由无色变为蓝色，在652 nm处有吸收峰。所述的一种叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料，其特征是能与人乳腺癌细胞MCF-7细胞膜上高表达的叶酸受体特异性识别并结合，而不与低表达叶酸受体的正常细胞人脐带静脉融合细胞EAhy926结合，通过催化过氧化氢氧化3，3 ’，5，5 ’ -四甲基联苯胺盐酸盐生成蓝色产物，该蓝色产物在652 nm处有最大吸收峰。本专利技术所述的一种叶酸-牛血清白蛋白-铀祕纳米复合材料的制备方法，其特征是在叶酸水溶液中，加入1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺，反应后，加入牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料水溶液，反应后溶液装入截止分子量为3k的超滤管，6000 r/min离心超滤，并水洗3次，得到叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料水溶液，将叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料水溶液冷冻干燥得到叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料粉末。所述的一种叶酸-牛血清白蛋白-铀祕纳米复合材料制备方法，其特征是在I度为6.8 mmol/L的叶酸水溶液中，加入I mL浓度为40 mmol/L的1_乙基-3-(3-二甲基氨丙基)_碳化二亚胺，反应15 min后，加入5 mL浓度为4.76 mg/mL的牛血清白蛋白-铀祕纳米复合材料水溶液，室温磁力搅拌反应2小时，反应后溶液装入截止分子量为3k的超滤管，6000r/min离心超滤，并水洗3次，得到叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料水溶液，将叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料水溶液冷冻干燥得到叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料粉末。本专利技术所述的一种叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料制备方法，其特征是所使用的牛血清白蛋白-铀祕纳米复合材料由以下方法制备的:在5 mL浓度为50 mg/mL的牛血清白蛋白水溶液中加入5 mL浓度为16 mmol/L氯铂酸溶液和0.5 1^浓度为1.5 mol/L氢氧化钠溶液，混匀后水浴80 °C反应2 h，反应后溶液装入截止分子量为3k的超滤管，6000r/min离心超滤，并水洗3次，得到牛血清白蛋白_纳米铂水溶液，将牛血清白蛋白-纳米铂水溶液冷冻干燥得到牛血清白蛋白-纳米铂粉末;在0.6 mL浓度为23.8 mg/mL的牛血清白蛋白-铂水溶液中加入0.6 mL浓度为0.5 mmol/L的硝酸铋溶液和1.8 mL浓度为10 mmol/L,pH=7的磷酸盐缓冲液，混匀后水浴80 1反应2.5 h，反应后溶液装入截止分子量为3k的超滤管，6000 r/min离心超滤，并水洗3次，得到牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料的水溶液，将牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料水溶液冷冻干燥得到牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料粉末。本专利技术所述的一种基于叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料的肿瘤细胞检测试剂盒，其特征是试剂盒中有叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料溶液、3，3’，5，5’_四甲基联苯胺盐酸盐溶液、过氧化氢溶液和硫酸溶液，所述叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料溶液作为a液，3，3’，5，5’_四甲基联苯胺盐酸盐溶液作为b液，过氧化氢溶液作为c液，硫酸溶液作为终止液。所述a液中含有浓度为0.238mg/mL的叶酸-牛血清白蛋白-铀祕纳米复合材料的RPM1-1640培养液;b液中含有浓度为16 mmol/L的3，3’，5，5四甲基联苯胺盐酸盐水溶液;c液中含有用浓度为100 mmol/L，pH =5的磷酸缓冲液配制的浓度为1.05 mol/L的过氧化氢溶液;终止液中含有浓度为0.5 mo 1/L的硫酸溶液。本专利技术所述的一种基于叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料的肿瘤细胞检测试剂盒，其特征是能用于测定叶酸受体高表达的MCF-7细胞，能区别肿瘤细胞和正常细胞。本专利技术所述的基于叶酸-牛血清白蛋白-铂铋纳米复合材料的肿瘤细本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种叶酸‑牛血清白蛋白‑铂铋纳米复合材料，其特征是由以下方法制备而成的：在叶酸水溶液中，加入1‑乙基‑3‑（3‑二甲基氨丙基）‑碳化二亚胺，反应后，加入牛血清白蛋白‑铂铋纳米复合材料水溶液，反应后溶液装入截止分子量为3k的超滤管，6000 r/min离心超滤，并水洗3次，得到叶酸‑牛血清白蛋白‑铂铋纳米复合材料水溶液，将叶酸‑牛血清白蛋白‑铂铋纳米复合材料水溶液冷冻干燥得到叶酸‑牛血清白蛋白‑铂铋纳米复合材料粉末；所述叶酸‑牛血清白蛋白‑铂铋纳米复合材料具有模拟过氧化物酶活性，能催化过氧化氢氧化3,3’,5,5’‑四甲基联苯胺盐酸盐显色，并能识别细胞膜表面叶酸受体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈伟，沈奕珉，邓豪华，李光文，李柯林，
申请(专利权)人：福建医科大学，
类型：发明
国别省市：福建;35
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