一种源于黄柏炮制品的药根红碱及其分离制备方法和用途技术

一种源于黄柏炮制品的药根红碱及其分离制备方法和用途，该方法包括：（1）精密称取盐酸药根碱对照品，置蒸发皿中烘制，取出放凉，加入色谱级甲醇，微孔滤膜过滤，得烘制后的药根碱对照品溶液。（2）将烘制后的药根碱对照品溶液用制备液相进行分离，收集目标色谱峰的洗脱液并经葡聚糖凝胶柱纯化；将纯化过的洗脱液进行氮吹，冷冻干燥，待得到粉红色粉末，即为所分离制备的药根红碱结晶。本发明专利技术所制备的药根红碱为在黄柏炮制饮片中发现的新化合物，该制备分离方法具有效率高、工艺稳定、操作简便、成本低廉的特点，可实现大量药根红碱单体的高纯度分离制备，且该药根红碱化合物具有很好的巨噬细胞的吞噬作用，有较强的免疫作用。

【技术实现步骤摘要】
一种源于黄柏炮制品的药根红碱及其分离制备方法和用途
本专利技术涉及中医药
，尤其涉及一种源于黄柏炮制品的药根红碱及其分离制备方法和用途。
技术介绍
黄柏始载于《神农本草经》，为芸香科植物黄皮树PhellodendronchinenseSchneid.或黄檗PhellodendronamurenseRupr.的干燥树皮，已有两千多年的药用历史，为中医传统清热泻火药。历代医家在临床应用中十分重视对黄柏的炮制，其炮制品最早见于晋代，葛洪的《肘后备急方》。黄柏的传统的炮制方法有净制、切制、蜜制、酒制、盐制、炭制、乳汁制、童便制等16种炮制方法，而今多以酒制、盐制及制炭为主。黄柏中主要含有小檗碱、巴马汀、药根碱、黄柏碱等生物碱类成分。现代药理作用研究表明黄柏具有降血糖、降压、抗癌、抗氧化等作用。黄柏在炮制过程中由于温度的影响其化学成分会发生一定的变化，并因加入不同的辅料后，其药性也会有所变化，最终导致药理作用的差异。通过比较黄柏生品、酒炙品、盐炙品的高效液相色谱图发现，黄柏经炮制后有新的色谱峰生成。本实验室前期研究结果表明，黄柏在炮制过程中有两个化学成分发生了变化，其中一个是由小檗碱转化而来的小檗红碱，另一个是由巴马汀转化而来的巴马红汀，同时观察到药根碱的含量在炮制后有所降低，故对药根碱单体进行了加热处理，发现有一个新生成色谱峰且该峰与黄柏炮制后的高效液相色谱图上的一个新生成色谱峰具有相同的保留时间。由此，推测黄柏炮制品中该新生成的化学成分是黄柏中药根碱在炮制过程中转化而来。结合实验室前期研究结果，为整体观察黄柏炮制前后的生物碱变化以及原小檗碱型生物碱在炮制过程中的变化规律，故对药根碱（C20H20NO4）的炮制前后的化学转化的新成分进行制备分离。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术提供一种源于黄柏炮制品的药根红碱及其分离制备方法和用途，该方法从黄柏炮制品中分离制备药根红碱，具有分离效率高、工艺稳定、操作简便、成本低廉，可实现大量药根红碱单体的高含量高纯度（98%以上）分离制备。为实现本专利技术的上述目的，本专利技术提供一种源于黄柏炮制品的药根红碱，分子式为C19H17NO4，命名为药根红碱，化学结构式如下。本专利技术还提供一种源于黄柏炮制品的药根红碱的分离制备方法，包括以下步骤。步骤1、药根碱的模拟炮制：精密称取盐酸药根碱对照品，置蒸发皿中，在160～216℃下烘制15～25min，取出放凉，加入色谱级甲醇，然后微孔滤膜（0.45μm）过滤，得烘制后的药根碱对照品溶液。步骤2、药根碱单体烘制品新成分的分离和制备。制备液相色谱条件：流动相A为水（其中100ml水含0.4ml二乙胺），B为甲醇；流动相流速：A与B的流动相比例为（70～90:30～10，体积比）；以反相C18硅胶键合固定相为色谱柱填料；柱温25℃；紫外检测波长为220～345nm；进样量为100μL。将烘制后的药根碱对照品溶液用制备液相进行分离，收集目标色谱峰的洗脱液并经葡聚糖凝胶柱纯化；将纯化过的洗脱液进行氮吹15min，置-80℃下冷冻干燥，待得到粉红色粉末，即为所分离制备的药根红碱结晶。所述药根红碱用于制备免疫调节的药物。与现有技术相比本专利技术的有益效果。本专利技术提供的源于黄柏炮制品的药根红碱及其分离制备方法和用途，所制备的药根红碱为在黄柏炮制饮片中发现的新化合物，该制备分离方法具有效率高、工艺稳定、操作简便、成本低廉的特点，可实现大量药根红碱单体的高纯度（98%以上）分离制备，且该药根红碱化合物具有很好的巨噬细胞的吞噬作用，有较强的免疫作用，相对于黄柏中原有的生物碱具有更强的免疫效果。附图说明图1为药根红碱的制备液相色谱图，其中A为药根红碱。图2为药根红碱的1H-NMR谱。图3为药根红碱的13C-NMR谱。图4为不同浓度药根碱和药根红碱对细胞的相对吞噬率。具体实施方式下面结合具体实施例进一步详细说明本专利技术，但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于下述的实施例，凡基于本专利技术上述内容实现的技术均属于本专利技术的范围。实施例1。1、仪器和材料。1.1仪器：半制备液相色谱仪（岛津LC-10AT）；METTLERAE240型十万分之一分析天平（瑞士METTLER）；FA1004B型电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；YP5102型电子天平（上海光正医疗仪器有限公司）；KQ-250DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；氮吹仪（天津市恒奥科技发展有限公司）；101型电热鼓风干燥箱（北京市永光明医疗仪器厂）；CHRIST真空冷冻干燥机（德国）；CAMAGLinomat-5型半自动点样仪（瑞士）。1.2试药：黄柏药材购于四川省药材公司；盐酸药根碱对照品购自四川省维克奇生物科技有限公司(批号130218)；药根红碱为实验室自制，经高效液相色谱法测定，纯度＞98%；薄层色谱硅胶板（青岛海洋化工厂）；SephadexLH-20(Pharmacia)；甲醇分析纯（天津市大茂化学试剂厂）；乙腈、甲醇色谱纯；二乙胺分析纯（天津市大茂化学试剂厂）；水为纯净水。2、本实施例提供一种源于黄柏炮制品的药根红碱的分离制备方法，包括以下步骤。步骤1、将黄柏中的指标性成分药根碱对照品进行模拟炮制：精密称取盐酸药根碱对照品5mg，置蒸发皿中，在216℃下烘制20min，取出放凉，加入色谱级甲醇5mL，然后微孔滤膜（0.45μm）过滤，得烘制后的药根碱对照品溶液，进行新成分的制备。步骤2、药根碱单体烘制品新成分的分离和制备，请参阅图1。制备液相色谱条件：流动相A为水，其中100ml水含0.4ml二乙胺，B为甲醇；流动相流速：A与B的流动相比例为（80:20）；以反相C18硅胶键合固定相为色谱柱填料；柱温25℃；紫外检测波长为345nm；进样量为100μL。将烘制后的药根碱对照品溶液用制备液相进行分离，收集目标色谱峰的洗脱液并经葡聚糖凝胶柱纯化；将纯化过的洗脱液进行氮吹15min，置-80℃下冷冻干燥，待得到粉红色粉末，即为所分离制备的药根红碱结晶。3、所述分离制备的药根红碱化合物的鉴定，请参阅图2与图3。分离得到的成分，经1H-NMR、13C-NMR分析鉴定。1H-NMR(MeOD，300MHz)δ:δH:7.53(1H，s，H-1)，6.80(1H，s，H-4)，3.12(2H，t，H-5)，4.65(2H，t，H-6)，9.34(1H，s，H-8)，7.62(1H，d，H-11)，7.01(1H，d，H-12)，8.22(1H，s，H-13)，3.93(3H，s，2-OCH3)，3.99(3H，s，2-OCH3)；13C-NMR(MeOD，75MHz)δ:δC:109.5(C-1)，149.4(C-2)，150.6(C-3)，115.9(C-4)，28.4(C-5)，56.0(C-6)，147.3(C-8)，124.9(C-8a)，169.3(C-9)，57.0(10-OCH3)，129.9(C-11)，129.5(C-12)，134.3(C-12a)，120.6(C-13)，136.6(C-14)，119.3(C-14a)，根据以上数据和文献确定新成分的结构并由药根碱转化所得且外观呈粉红色，故将该新成分命名为药根红碱，分子式为C19H17NO4。所述药根碱转化途径如下。4、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种源于黄柏炮制品的药根红碱，其特征在于，分子式为C19H17NO4，命名为药根红碱，化学结构式如下。

【技术特征摘要】
1.一种源于黄柏炮制品的药根红碱，其特征在于，分子式为C19H17NO4，命名为药根红碱，化学结构式如下。2.如权利要求1所述的源于黄柏炮制品的药根红碱的分离制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、药根碱的模拟炮制：精密称取盐酸药根碱对照品，置蒸发皿中烘制，取出放凉，加入色谱级甲醇，微孔滤膜过滤，微孔滤膜过滤，所述滤膜的孔径为0.45μm，得烘制后的药根碱对照品溶液；步骤2、药根碱单体烘制品新成分的分离和制备：制备液相色谱条件：流动相A为水，其中100ml水含0.4ml二乙胺，B为甲醇；流动相流速：A与B的流动相体积比比例为（70-90:30-10）；以反相C18硅胶键合固...

【专利技术属性】
技术研发人员：张凡，刘蓬蓬，贾天柱，徐珊，高慧，史辑，鞠成国，林桂梅，单国顺，
申请(专利权)人：辽宁中医药大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21