一种当归分子身份证及鉴定方法技术

本发明专利技术涉及一种当归分子身份证，所述分子身份证中含有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。利用本发明专利技术所提供的分子身份证和方法可以准确的将当归与形态特征相似的伪品区分开，本发明专利技术所提供的方法适用性更广，能检测所有能提取出DNA的任何样品。因此，能够实现当归原植物、药材、种子、种苗、粉末、含当归中成药和混淆品的快速、准确鉴定。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于中药材来源品种鉴定
，具体涉及一种当归分子身份证及鉴定 方法。
技术介绍
当归为伞形科当归属植物当归Angelica sinensis(01 iv. )Diels的干燥根，具有 补血活血，调经止痛，润肠通便的功效。现代研究表明，当归含有挥发油、阿魏酸、藁本内酯 等多种化学成分，具有调节血液循环系统、平滑肌抑制、抗炎、镇痛、增强免疫力等多种药理 作用。由于其广阔的应用前景，近年来价格不断上涨，掺伪现象频出，主要有欧当归 (Levisticum officinale Koch)、大叶当归（A.magaphylla Diels)、金山当归（A. valida Diels)、疏叶当归（A.laxifoliata Diels)、青海当归（A.nitida Wolff)和东当归 (A.acutiloba Kitag)等，文献中多采用性状、显微和理化鉴别等方法对上述混伪品进行鉴 另IJ。且由于当归用药历史悠久且广泛，素有"十方九归"之说，药典中含有当归的中成药近 100种，中成药原材料中，掺假情况也时有发生。当归其近缘种、混伪品外形类似，传统的性 状鉴别有较大困难，且利用传统方法无法鉴定成药中的当归。本研究拟以DNA条形码为手段 鉴定各种当归产品，但实验过程中发现市售药材及中成药存在蒸煮、加工工艺繁杂及保存 时间较长等问题导致DNA降解，使PCR扩增困难且扩增序列较长易影响测序质量。本研究在 大样本量数据分析的基础上，开发了一个37bp的当归特异的分子身份证序列，BLAST结果表 明，此段序列为当归所特有，如图3A中所示，以此37bp序列进行BLAST，得到序列覆盖度及相 似度为100%的结果有且仅有当归，即若ITS2序列中存在该37bp短序列，可判断为当归，反 之，则不是当归。开发短的分子身份证序列的优势在于：1)短序列易扩增，适合DNA已降解 的中成药或中药材及粉末的鉴定；2)准确性高，当归ITS2全长为229bp，在GenBank中当归 ITS2正确序列共有86条，且均含有该37bp的分子身份证序列，即该分子身份证与当归的相 似度为100%，应用不同长度含此分子身份证的序列进行BLAST分析，图3A为37bp的鉴定结 果，图3B为276bp序列的鉴定结果，图3C为129bp序列的BLAST结果(对应A，B，C序列相对位置 如图4所示），图3B，C显示与当归相似度为100%的序列分别仅有5条和8条，通过相似度的阈 值来判断序列，结果存在很大的不确定性，且与近缘种之间没有明显的区分。因此，该分子 身份证序列可以用来鉴定当归原植物、药材、种子、种苗、粉末、含当归中成药和混淆品。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服传统鉴别技术中存在的上述缺陷，提供一种结果准确灵 敏，鉴定过程简便快速的当归鉴定方法。 为达到以上目的，本专利技术的专利技术人在对大量的样品的筛选过程中，寻找出能够将 正品当归与混伪品进行精确区分的正品当归的特异分子身份证序列，并提供了对当归鉴别 较为快速，简便，廉价的方法。 具体的，本专利技术首先提供了一种当归分子身份证，所述分子身份证中含有如SEQ ID No. 1所示的核苷酸序列。 优选的，所述分子身份证为SEQ ID No. 1所示的核苷酸序列。 本专利技术还提供了一种当归的鉴定方法，其中，所述方法包括检测样品基因组DNA中 是否存在本专利技术所述的分子身份证。当存在所述分子身份证时，鉴定待测样品中含有当归 或为当归。 可选的，所述方法包括如下步骤： 1)以待测样品的基因组DNA为模板，对所述分子身份证进行PCR扩增，获得扩增产 物； 2)对扩增产物进行测序，拼接后去除引物区获得扩增片段，检测扩增片段中是否 存在所述分子身份证。本专利技术对于PCR所使用的引物无特别的限制，只要能够对所述分子身份证进行扩 增即可，为了获得最佳的鉴定效果，所述PCR扩增使用的引物为： DGOSFj'-CCACAACCACTCACTCCT-S'(SEQ ID 吣.2所示的核苷酸序列）， DGOSRj'-TTCGCTCGCCGTTACTAA-S'(SEQ ID 吣.3.5所示的核苷酸序列）。 可选的，所述PCR扩增的反应程序为：可选的，所述PCR扩增的反应体系为： PCR Buffer( 10 X )2 ·5yL，Mg2+2yL(25mmol/L)，dNTPs混合物2yL(2· 5mmol/L)，引物 各1.0yL(2.5ymol/L)，模板DNA lyL(-约30ng)，Taq DNA聚合酶1.0U，加灭菌双蒸水至25yL， 进行PCR扩增。 其中，所述待测样品包括当归及含当归中成药。 所述待测样品的形式可以为植株、药材、种子、种苗及中成药，利用本专利技术所提供 的方法可以对因加工而难以通过形态学鉴定进行区分的检测对象进行准确的鉴别，例如可 以对粉末形式的样品及中成药样品进行鉴定。 本专利技术还提供了所述方法或所述的分子身份证在鉴定当归中的应用。本专利技术的有益效果在于： 利用本专利技术所提供的分子身份证和方法可以准确的将当归与形态特征相似的伪 品区分开，本专利技术所提供的方法适用性更广，能检测所有能够提取出DNA的当归任何样品。 因此，能够实现当归原植物、药材、种子、种苗、粉末、混伪品和含当归中成药的快速、准确鉴 定。【附图说明】 图1当归种内align图。 图2为当归(A. sinensis)特异分子身份证序列和同属其它物种不同单倍型的比对 图；包含5 '-AATCCGCGTCATCTTAGTGAGCTCAAGGACCCTTAGG-3' 的比对图。 图3为应用当归(A. s inens is)不同长度含特异分子身份证的序列BLAST结果图。 图4为当归(A. sinensis)不同长度含特异分子身份证的序列相对位置示意图。【具体实施方式】 下面将结合实施例对本专利技术的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实 施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本专利技术的范围进行限制。本领域的技 术人员在不背离本专利技术的宗旨和精神的情况下，可以对本专利技术进行各种修改和替换。 实施例1实施例1用于说明当归药材(当归根切片)的鉴定方法 1)从重庆市、甘肃定西市、安徽亳州药材市场共收集到当归A. sinensis共计12份， 分别取40mg药材，在MM 4当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
当归分子身份证，其特征在于，所述分子身份证中含有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：韩建萍，宋经元，王晓玥，陈士林，
申请(专利权)人：中国医学科学院药用植物研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11