本发明专利技术公开了一种黄曲霉毒素M1荧光增敏剂，由甲基-β-环糊精和含Hg2+的溶液组成，甲基-β-环糊精：AFM1摩尔比为5.8×105:1，Hg2+：AFM1的摩尔比为6.6×104:1。本发明专利技术所述Hg2+-M-β-CD荧光增敏剂对黄曲霉毒素M1荧光增强的效果显著，且反应快速。AFM1待测溶液体系在0.01～2μg/L浓度范围内相关系数R可达到0.999以上，检出限为0.0026μg/L。本发明专利技术所述一种快速、灵敏、经济的荧光增强剂有望直接用于检测奶制品中的AFM1，为AFM1的快速检测提供了新思路和新途径。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于化学分析领域，具体涉及一种用于黄曲霉毒素Mi荧光分析的荧光增敏剂。
技术介绍
黄曲霉毒素MjAflatoxin MbAFM!)是哺乳动物摄入黄曲霉毒素BjAflatoxin Βι,AFBi)污染的食物后，经肝脏细胞色素P450等相关酶代谢，发生II相反应形成的羟基化代谢产物，毒性仅次于AFBi。1993年，六?11被世界卫生组织(WT0)国际癌症研究机构(IARC)列为2B类致癌物质，2002年被提至I类致癌物，其严重威胁到人体的健康。AFMi主要存在于哺乳动物的乳汁、尿液等排泄物中，通常动物在摄入AFBd2?24小时后即可检测出AFMi AFMr污染主要存在于乳及乳制品中，而人类尤其是婴幼儿对乳制品的接触率极高，危害极大，因此世界各国对AFMi的限量标准一直非常严格。CAC国际标准规定牛奶中的AFMi限量为0.5yg/kg，我国、美国和日本等很多国家也规定乳及乳制品中AFMi限量标准为0.5yg/kg，欧盟制定的标准更为严格，乳及乳制品中限量为0.05yg/kg，婴幼儿配方奶以及改进配方奶中限量为0.025yg/kg，具有特殊医疗目的的婴幼儿食品中限量为0.025yg/kg。为保障乳品安全，AFMi检测技术的灵敏度和准确性一直要求极高。目前对于黄曲霉毒素的荧光增敏主要是对AFB^AFGi等黄曲霉毒素借助光化学等衍生设备或三氟乙酸等强酸、卤族元素等强氧化剂、环糊精(CDs)等增强AFB^AFGd^荧光强度或降低基质屏蔽、干扰作用达到提高灵敏度的目的，同时兼顾准确定量和快速检测，在常规实验室或者现场实地可以进行应用推广。其中，三氟乙酸通常作为高效液相色谱法柱前衍生试剂，具有毒性、强腐蚀性和极易挥发性，需要较严格的衍生条件和操作技术(如避光、高温等)；卤族元素等强氧化剂(饱和碘溶液、溴水、过溴化吡啶溴等)和光化学在线衍生的设备，通过衍生设备和一定的衍生条件将AFB^AFGi这两种黄曲霉毒素的不饱和双键结构转化成饱和结构(AFBi转化成AFB2a，AFG1转化成AFG2a)，衍生物富含大量羟基，且电子云与芳环上的η轨道平行，扩大了共轭双键体系，增强了 AFs的天然荧光值，提高了检测的灵敏度，用于高效液相色谱在线检测或柱后衍生技术。AFMi本身性质和结构与AFB^AFGi存在较大差异，缺少双键不饱和结构，这些技术无法对AFMi实现衍生和荧光增敏效应。环糊精具有巨大的空穴尺寸和内腔的疏水性，可对AFs客体分子进行分子识别，形成超分子复合物，避免荧光分子与水性溶剂接触发生淬灭的特性，具有荧光增强作用，检测灵敏度被大大提高。近几年有一些此类报道对AFMi进行荧光增强和基质屏蔽继而增强分析的灵敏度的应用研究报道。刘雪芬等(Liu X.F..ffu'han,Chinese Academy ofAgricultural Sciences(武汉:中国农业科学院),2011.)得出2，6-二甲基-β-环糊精使AFMi的焚光强度增加0.5倍，C.Cucci等(Cucci C.,Mignani A.G.，Dal 1 ’ Asta C , etal.Chem.,2007,126(2) ,467-472)将丁二酰化-β-环糊精(β-CD-SU)应用于测定微量的AFMi，结果显示荧光强度可增强1.5倍，但应用过程和测定速度受到温度和待测介质的影响，不能稳定应用，且测定时间常随温度的变化而变化。因此，有必要对AFMi的荧光分析方法进行改进完善。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种黄曲霉毒素见的荧光增敏剂，所述荧光增敏剂能够显著提高AFMi荧光检测的强度。本专利技术采取的技术方案如下:1、黄曲霉毒素施荧光增敏剂，由甲基-β_环糊精和含Hg2+的溶液组成，甲基-β-环糊精^?]?1摩尔比为5.8\105:1，取2+:六?]\11的摩尔比为6.6\104:1。优选的，所述荧光增敏剂的加入顺序为先加入Hg2+，混匀后再加入甲基-β_环糊精。 2、含有黄曲霉毒素施的荧光增敏剂的黄曲霉素施待测溶液。优选的，所述黄曲霉毒素Μι待测溶液为含有黄曲霉毒素施的荧光增敏剂的甲醇/水溶液，所述甲醇/水溶液中甲醇的体积百分数为20 %。3、检测黄曲霉素见待测溶液体系荧光强度的方法，将所述黄曲霉毒素施待测溶液在激发波长为365nm，发射波长为410nm的条件下测量荧光强度，并计算黄曲霉毒素见的含量。本专利技术的有益效果在于:本专利技术的AFMi荧光增敏剂是β-环糊精及其衍生物与金属离子共同作用于AFMiB成三元络合物，不受AFB^AFGj^双键不饱和结构制约和限制，且不受温度等影响，可以快速灵敏、准确稳定的增强AFMi的荧光强度。本专利技术所述Hg2+-M-13_CD荧光增敏剂对黄曲霉毒素施荧光增强的效果显著，且反应快速。AFM^测溶液体系在0.01?2yg/L浓度范围内相关系数R可达至1」0.999以上，检出限为0.0026yg/L，这低于一般衍生方法的检出限。本专利技术所述一种快速、灵敏、经济的荧光增强剂有望直接用于检测奶制品中的AFMi，为AFMi的快速检测提供了新思路和新途径。本试验建立了一种针对AFMi检测的新型衍生方法，与以前的衍生方法相比，该衍生试剂具有寿命长、腐蚀性低、不挥发、反应迅速、荧光增强效果好等优点。【附图说明】为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图:图1不同β-CD对黄曲霉毒素施待测溶液荧光体系的影响；图2Μ-β-⑶、HgCl2与AFM^质的量比对体系荧光强度的影响；图3不同甲醇/水比例对体系荧光强度的影响；图4衍生顺序对AFMi体系荧光强度的影响；图5AFMi标准曲线与荧光增强后的标准曲线。【具体实施方式】下面对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。 1、仪器与试剂F-2500荧光分光光度仪(日本日立公司)；分析天平(精度0.0OOlg，上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂)；超纯水发生器(Mill1-QAlOSystem Millipore公司，法国)。AFMi标准品(sigma);甲醇(色谱纯，天津四友精细化学品有限公司)；乙腈(色谱纯，天津四友精细化学品有限公司);β-环糊精(β-⑶)、甲基-β-环糊精(Μ-β-⑶)、羟丙基-β-环糊精(ΗΡ-β-CD)、羟乙基-β-环糊精(ΗΕ-β-CD)、磺丁基-β-环糊精(SBE-13-CD)、羧甲基-β-环糊精(CM-13-CD)、聚合-β-环糊精(β-CDP)(分析纯，山东智源生物科技有限公司)。氯化汞(HgCl2，分析纯，贵州铜仁汞试剂公司)；氯化钠(NaCl)、氯化钾(KC1)、氯化镁(MgCl2)、氯化钙(CaCl2)、氯化铁(FeCl3)(分析纯，成都市科龙化工有限公司)。2、溶液的配置AFMiS液配制:将lmg AFM^lmL乙腈溶解，配制成质量浓度为lOtg/L的AFM^液，再取10yL 106yg/L AFMi溶液，加甲醇到lmL，配成lOtg/l的标准储备液，密封后于4°C下避光保存。使用时，准确移取lOOyL标准储备液于25mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成质量浓度为40yg/L的标准工作液。3、荧光光谱扫描方法取lmL混合均匀的AFMi样液，用本文档来自技高网...
【技术保护点】
黄曲霉毒素M1荧光增敏剂，其特征在于，由甲基‑β‑环糊精和含Hg2+的溶液组成，甲基‑β‑环糊精：AFM1摩尔比为5.8×105:1，Hg2+：AFM1的摩尔比为6.6×104:1。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：马良，张宇昊，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：重庆;85
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