BMX剪切体及其在肺癌耐药性中的应用制造技术

本发明专利技术提供一种BMX剪切体，所述的BMX剪切体核苷酸序列在对应于SEQ ID NO:3所示。本发明专利技术还提供包含编码所述BMX剪切体的基因的宿主细胞以及利用所述宿主细胞检测所述的BMX剪切体功能的方法。本发明专利技术的BMX剪切体或包含本发明专利技术BMX剪切体的宿主细胞还用于测试肺癌细胞的耐药性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体地，涉及BMX剪切体及其在肺癌耐药性中的应用。
技术介绍
肺癌是当今全球范围内危害性最大的疾病之一。临床上，第三代基于铂的联合疗法治疗非小细胞肺癌虽具有一些优势，但是结合几种细胞毒类药物的治疗方式并没有取得比铂双试剂治疗更好的效果，表明这种治疗方法已经达到了瓶颈。随着对肺癌生物学的深入研究以及对肺癌发病分子机制的进一步了解，根据不同患者个体肿瘤中存在的关键致病基因进行针对性的分子靶向治疗。比较成功的例子即针对表皮生长因子受体(EGFR)激活型突变(比如L858R点突变、19号外显子缺失突变)所设计的靶向EGFR激酶域的小分子抑制剂，包括吉非替尼(Gefitinib,Iressa)和厄洛替尼(Erlotinib,Tarceva)。临床上这些小分子抑制剂对具有上述EGFR激酶域突变的肺癌患者疗效显著，然而一些耐药突变(比如EGFR激酶域T790M点突变、MET或HER2基因的扩增等)的出现却极大削弱了靶向药物的治疗效果，且目前并没有很好的解决策略。因此，寻找和鉴定肺癌中潜在的关键致病基因和耐药相关基因，对于研发新的靶向药物和解决耐药性问题具有重大意义。近几年来癌症基因组学研究发现，除了致癌的基因突变外，由于基因组的不稳定而导致的融合基因或基因非正常剪切也是癌症发生的关键因素。比如，ALK的融合基因在各种恶性肿瘤包括淋巴癌和肺癌中都有发生，其中肺癌中两种形式的ALK融合基因是TFG-ALK和KIF5B-ALK，这些基因与ALK融合后使得ALK具有持续的酪氨酸激酶的活性。在检测融合基因的同时很多基因的非正常剪切被发现存在。研究发现一些基因的可变剪切与癌症的发生发展以及抗药存在密切的联系。典型的例子是抑癌基因P53，它的可变体存在于54.7％的卵巢癌中，降低卵巢癌细胞对化疗药物的敏感响应，其表达与卵巢癌的复发成正相关。综上所述，为了诊断和治疗癌症，本领域迫切需要开发与癌症发生或抗癌药物耐药性相关的物质。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种具有促进肺癌细胞增殖和增加肺癌细胞对抗癌药物耐药性的BMX非正常剪切体。本专利技术的另一目的是提供一种BMX非正常剪切体检测方法和应用。本专利技术的第一方面，提供了一种BMX非正常剪切体(以下称其为BMXΔN)，所述的剪切体蛋白缺失野生型BMX的N端，仅保留C端激酶域。在另一优选例中，所述的剪切体蛋白缺失野生型BMX氨基酸序列的第1-383位。在另一优选例中，所述的野生型BMX氨基酸序列如SEQIDNO.:2所示。在另一优选例中，所述的剪切体蛋白缺失如SEQIDNO.:2第1-383位所示的氨基酸序列。在另一优选例中，所述的剪切体蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.:4第1-292位所示。本专利技术的第二方面，提供了一种多核苷酸，所述的多核苷酸编码本专利技术的第一方面所述的BMX的剪切体蛋白。在另一优选例中，所述的多核苷酸含有SEQIDNO.:3所示的核苷酸序列。在另一优选例中，所述的多核苷酸不编码野生型BMX蛋白(如SEQIDNO.:2所示的氨基酸序列)。在另一优选例中，所述的多核苷酸BMXΔN是野生型BMX的核苷酸序列通过第942位特异性剪切位点剪切而形成，第942位之前为8号内含子部分序列。本专利技术的第三方面，提供了一种载体，所述的载体含有如本专利技术的第二方面所述的多核苷酸。本专利技术的第四方面，提供了一种遗传工程化宿主细胞，所述的遗传工程化宿主细胞包含本专利技术的第三方面所述的载体或基因组中整合有本专利技术的第二方面所述的多核苷酸。在另一优选例中，所述的宿主细胞包括原核细胞(如大肠杆菌等)或真核细胞(酵母细胞、CHO细胞等)。本专利技术的第五方面，提供了一种制备如本专利技术的第一方面所述的剪切体蛋白的方法，包括步骤：(a)在适合表达的条件，培养本专利技术第四方面所述的遗传工程化宿主细胞，从而表达本专利技术第一方面所述的BMX剪切体蛋白；和(b)分离或纯化所述的BMX剪切体蛋白。本专利技术的第六方面，提供了一种本专利技术的第一方面所述的剪切体蛋白或本专利技术的第二方面所述的多核苷酸的用途，它被(a)用于制备检测癌症易感性和/或癌症细胞耐药性的试剂或试剂盒；或(b)用于筛选抑制BMXΔN的抑制剂，所述抑制剂特异性或选择性抑制BMXΔN。在另一优选例中，所述的癌症包括非小细胞肺癌、胃癌。在另一优选例中，所述的试剂包括：引物、探针、对照品、芯片。在另一优选例中，所述的试剂盒包括所述的试剂和使用说明书。本专利技术的第七方面，提供了一种用于扩增如本专利技术的第三方面所述的多核苷酸或其片段的PCR引物对，所述的PCR引物对包括第一引物和第二引物，所述第一引物的接合位点位于BMX基因的8号内含子，第二引物的接合位点位于BMX基因的9号外显子，并且所述引物对所扩增出的扩增产物的长度≥150bp。在另一优选例中，所述引物对所扩增出的扩增产物的长度≥250bp，较佳地≥400bp。在另一优选例中，所述引物对不扩增野生型BMX的核苷酸序列。在另一优选例中，所述的第一引物的序列如SEQIDNO.:7所示。在另一优选例中，所述第一引物和第二引物的长度为15-50bp，较佳地为15-35bp。在另一优选例中，所述的第一引物和第二引物如SEQIDNO.:9和10所示。在另一优选例中，当扩增体系中存在BMXΔN的多核苷酸序列时，所述引物对所扩增出的PCR扩增产物含有所述BMX剪切体的上述剪切位点。本专利技术的第八方面，提供了一种可用于定量检测如本专利技术的第一方面所述的剪切体的核糖核酸的生物芯片，所述的芯片包括固相载体以及位于所述固相载体上的检测位点，所述检测位点含有用于特异性地检测本专利技术的第二方面中所述的多核苷酸的探针。在另一优选例中，所述探针含有所述BMX剪切体的上述剪切位点。本专利技术的第九方面，提供了一种试剂盒，所述试剂盒包含：一容器以及位于所述容器内的用于测定本专利技术的第一方面所述的BMX剪切体蛋白的试剂、用于检测本专利技术的第二方面所述的多核苷酸的试剂、或其组合；和使用说明书。在另一优选例中，所述的用于检测第二方面所述的多核苷酸的试剂包括核酸芯片。在另一优选例中，所述的试剂选自下组：(a)特异性扩增所述剪切体的引物或引物对；(b)特异性与所述剪切体的核酸分子进行杂交的探针。在另一优选例中，所述的试剂盒用于检测选自下组的样品：人类非小细胞肺癌的肿瘤组织本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种BMX剪切体蛋白，其特征在于，所述的剪切体蛋白缺失野生型BMX的N端，仅保留C端激酶域；较佳地，所述的剪切体蛋白缺失野生型BMX氨基酸序列的第1‑383位。

【技术特征摘要】
1.一种BMX剪切体蛋白，其特征在于，所述的剪切体蛋白缺失野生型BMX
的N端，仅保留C端激酶域；
较佳地，所述的剪切体蛋白缺失野生型BMX氨基酸序列的第1-383位。
2.一种多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸编码权利要求1所述的
BMX的剪切体蛋白。
3.如权利要求2所述的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸的核苷
酸序列如SEQIDNO.:3所示。
4.一种载体，其特征在于，它含有如权利要求2所述的多核苷酸。
5.一种遗传工程化宿主细胞，其特征在于，它包含权利要求4所述的载
体或基因组中整合有权利要求2所述的多核苷酸。
6.一种制备如权利要求1所述的剪切体蛋白的方法，其特征在于，包括
步骤：
(a)在适合表达的条件，培养权利要求5所述的遗传工程化宿主细胞，从
而表达权利要求1所述的BMX剪切体蛋白；和
(b)分离或纯化所述的BMX剪切体蛋白。
7.一种如权利要求1所述的剪切体蛋白或权利要求2所述的多核苷酸的用
途，其特征在于，(a)用于制备检测癌症易感性和/或癌症细胞耐药性的试剂或
试剂盒；或(b)用于筛选抑制BMXΔN的抑制剂，所述抑制剂特异性或选择性抑
制BMXΔN。
8.一种用于扩增如权利要求2所述的多核苷酸或其片段的PCR引...

【专利技术属性】
技术研发人员：季红斌，刘红艳，汪烨，李飞，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：上海;31