【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】TMPRSS6IRNA组合物及其使用方法相关申请本申请要求2013年5月22日提交的美国临时专利申请号61/826,178和2013年12月6日提交的美国临时专利申请号61/912,988的优先权权益。本申请涉及2011年11月18日提交的美国临时申请号61/561,710和2012年11月16日提交的PCT/US2012/065601。前述申请的每个的全部内容特此通过引用结合在此。序列表本申请包含已经以电子方式以ASCII格式提交并且特此通过引用以其全文结合的序列表。创建于2014年5月21日的所述ASCII副本被命名为121301-00720_SL.txt并且大小为449,620个字节。专利技术背景TMPRSS6(跨膜蛋白酶，丝氨酸6)基因编码TMPRSS6，TMPRSS6也称为蛋白裂解酶-2，这是一种II型丝氨酸蛋白酶。它主要在肝脏中表达，但在肾脏中也发现了高水平的TMPRSS6mRNA，在子宫中检测到的水平较低并且在许多其他组织中检测到远远更小的量(拉姆塞(Ramsay)等人，血液学(Haematologica)(2009),94(6),840-849)。TMPRSS6通过结合并蛋白质裂解地降解铁调素活化剂以及BMP辅助受体HJV(血幼素，其导致铁调素水平下调)而在铁稳态中起作用。TMPRSS6包括：一个短的N-末端胞质内尾部、一个II型跨膜结构域、由2个胞外CUB(补体因子Cls/Clr、海胆胚生长因子和BMP(骨形态发生蛋白))结构域组成的一个干区、3个LDLR(A类低密度脂蛋白受体)结构域、以及一个C-末端胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶结构域。在胞外结...
【技术保护点】
一种能够抑制细胞中TMPRSS6的表达的双链RNAi试剂，其中所述双链RNAi试剂包含形成一个双链区的一条有义链和一条反义链，其中所述有义链包含与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、或SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、或SEQ ID NO:5的核苷酸序列中的任一个相差不多于3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，并且所述反义链包含与SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、或SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、或SEQ ID NO:10的核苷酸序列中的任一个相差不多于3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，其中所述有义链的基本上所有的这些核苷酸和所述反义链的基本上所有的这些核苷酸是修饰的核苷酸，并且其中所述有义链被缀合到在3'‑末端处附接的一个配体上。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.05.22 US 61/826,178;2013.12.06 US 61/912,9881.一种能够抑制细胞中TMPRSS6的表达的双链RNAi试剂，其中所述双链RNAi试剂包含形成一个双链区的一条有义链和一条反义链，其中所述有义链包含5'-CUUCUUCUGGUUCAUUCUCCA-3'(SEQIDNO:223)的核苷酸序列的至少19个连续核苷酸，并且所述反义链包含5'-UGGAGAAUGAACCAGAAGAAGCA-3'(SEQIDNO:292)的核苷酸序列的至少19个连续核苷酸，其中每条链具有19-30个核苷酸，其中所述有义链和所述反义链包括不多于5、4、3、2、1或0个未修饰的核苷酸，并且其中所述有义链被缀合到在3'-末端处附接的一个配体上。2.如权利要求1所述的双链RNAi试剂，其中所述有义链的所有这些核苷酸和所述反义链的所有这些核苷酸均是修饰的核苷酸。3.如权利要求1或2所述的双链RNAi试剂，其中所述修饰的核苷酸中的至少一个是选自下组，该组由以下各项组成：3’-末端脱氧-胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2'-O-甲基修饰的核苷酸、2'-氟代修饰的核苷酸、2'-脱氧-修饰的核苷酸、锁核苷酸、脱碱基核苷酸、2'-氨基-修饰的核苷酸、2'-烷基-修饰的核苷酸、吗啉代核苷酸、氨基磷酸酯、包含核苷酸的非天然碱基、包含5'-硫代磷酸酯基团的核苷酸、包含5’磷酸酯或5’磷酸酯模拟物的核苷酸以及连接到胆固醇基衍生物或十二烷酸二癸酰胺基团上的末端核苷酸。4.如权利要求1所述的双链RNAi试剂，其中至少一条链包含具有至少1个核苷酸的3'突出端。5.如权利要求1所述的双链RNAi试剂，其中至少一条链包含具有至少2个核苷酸的3'突出端。6.一种能够抑制细胞中TMPRSS6(蛋白裂解酶-2)的表达的双链RNAi试剂，其中所述双链RNAi试剂包含与一条反义链互补的一条有义链，其中所述反义链包含与编码TMPRSS6的mRNA的一部分互补的一个区，其中所述互补的区域包含5'-UGGAGAAUGAACCAGAAGAAGCA-3'(SEQIDNO:292)的核苷酸序列的至少19个连续核苷酸，其中每条链的长度是19个至30个核苷酸，其中所述双链RNAi试剂由式(III)表示：有义：5'np-Na-(XXX)i-Nb-YYY-Nb-(ZZZ)j-Na-nq3'反义：3'np′-Na′-(X′X′X′)k-Nb′-Y′Y′Y′-Nb′-(Z′Z′Z′)l-Na′-nq′5'(III)其中：i、j、k以及l各自独立地是0或1；p、p'、q以及q'各自独立地是0-6；各Na和Na′独立地表示包含0-25个修饰的或未修饰的或其组合的核苷酸的寡核苷酸序列，每个序列包含至少两个不同修饰的核苷酸；各Nb和Nb′独立地表示包含0-10个修饰的或未修饰的或其组合的核苷酸的寡核苷酸序列；各np、np′、nq以及nq′，其中每个可以是存在的或可以是不存在的，独立地表示突出核苷酸；XXX、YYY、ZZZ、X′X′X′、Y′Y′Y′以及Z′Z′Z′各自独立地表示在三个连续核苷酸上具有三个相同修饰的一个基序；Nb上的修饰不同于Y上的修饰，并且Nb'上的修饰不同于Y'上的修饰；并且其中该有义链被缀合到至少一个配体上。7.如权利要求6所述的双链RNAi试剂，其中i是0；j是0；i是1；j是1；i和j两者均是0；或i和j两者均是1。8.如权利要求6所述的双链RNAi试剂，其中k是0；l是0；k是1；l是1；k和l两者均是0；或k和l两者均是1。9.如权利要求6所述的双链RNAi试剂，其中XXX与X'X'X'互补，YYY与Y'Y'Y'互补，并且ZZZ与Z'Z'Z'互补。10.如权利要求6所述的双链RNAi试剂，其中该YYY基序出现在该有义链的裂解位点处或附近。11.如权利要求8所述的双链RNAi试剂，其中该Y'Y'Y'基序出现在该反义链的从5'-端起的11、12以及13位置处。12.如权利要求11所述的双链RNAi试剂，其中该Y'是2'-O-甲基。13.如权利要求6所述的双链RNAi试剂，其中式(III)由式(IIIa)表示：有义：5'np-Na-YYY-Na-nq3'反义：3'np′-Na′-Y′Y′Y′-Na′-nq′5(IIIa)。14.如权利要求6所述的双链RNAi试剂，其中式(III)由式(IIIb)表示：有义：5'np-Na-YYY-Nb-ZZZ-Na-nq3'反义：3'np′-Na′-Y′Y′Y′-Nb′-Z′Z′Z′-Na′-nq′5'(IIIb)其中各Nb和Nb'独立地表示包含1-5个修饰的核苷酸的寡核苷酸序列。15.如权利要求6所述的双链RNAi试剂，其中式(III)由式(IIIc)表示：有义：5'np-Na–XXX-Nb-YYY-Na-nq3'反义：3'np′-Na′-X′X′X′-Nb′-Y′Y′Y′-Na′-nq′5'(IIIc)其中各Nb和Nb'独立地表示包含1-5个修饰的核苷酸的寡核苷酸序列。16.如权利要求6所述的双链RNAi试剂，其中式(III)由式(IIId)表示：有义：5'np-Na–XXX-Nb-YYY-Nb-ZZZ-Na-nq3'反义：3'np′-Na′-X′X′X′-Nb′-Y′Y′Y′-Nb′-Z′Z′Z′-Na′-nq′5'(IIId)其中各Nb和Nb'独立地表示包含1-5个修饰的核苷酸的寡核苷酸序列，并且各Na和Na'独立地表示包含2-10个修饰的核苷酸的寡核苷酸序列。17.如权利要求6所述的双链RNAi试剂，其中该双链区的长度是15-30个核苷酸对。18.如权利要求17所述的双链RNAi试剂，其中该双链区的长度是17-23个核苷酸对。19.如权利要求17所述的双链RNAi试剂，其中该双链区的长度是17-25个核苷酸对。20.如权利要求17所述的双链RNAi试剂，其中该双链区的长度是23-27个核苷酸对。21.如权利要求17所述的双链RNAi试剂，其中该双链区的长度是19-21个核苷酸对。22.如权利要求17所述的双链RNAi试剂，其中该双链区的长度是21-23个核苷酸对。23.如权利要求6所述的双链RNAi试剂，其中在这些核苷酸上的修饰选自下组，该组由以下各项组成：LNA、HNA、CeNA、2′-甲氧基乙基、2′-O-烷基、2′-O-烯丙基、2′-C-烯丙基、2′-氟代、2′-脱氧、2’-羟基及其组合。24.如权利要求23所述的双链RNAi试剂，其中在这些核苷酸上的修饰是2′-O-甲基或2′-氟代修饰。25.如权利要求1或6所述的双链RNAi试剂，其中该配体是通过一个二价或三价支链接头附接的一种或多种GalNAc衍生物。26.如权利要求1或6所述的双链RNAi试剂，其中该配体是27.如权利要求1或6所述的双链RNAi试剂，其中该配体被附接到该有义链的3′端上。28.如权利要求27所述的双链RNAi试剂，其中该RNAi试剂被缀合到如以下示意式中所示的配体上其中X是O或S。29.如权利要求1或6所述的双链RNAi试剂，其中所述试剂进一步包含至少一个硫代磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸间键联。30.如权利要求29所述的双链RNAi试剂，其中该硫代磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸间键联是在一条链的3'-末端处。31.如权利要求30所述的双链RNAi试剂，其中所述链是该反义链。32.如权利要求30所述的双链RNAi试剂，其中所述链是该有义链。33.如权利要求29所述的双链RNAi试剂，其中该硫代磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸间键联是在一条链的5'-末端处。34.如权利要求33所述的双链RNAi试剂，其中所述链是该反义链。35.如权利要求33所述的双链RNAi试剂，其中所述链是该有义链。36.如权利要求29所述的双链RNAi试剂，其中该硫代磷酸酯或甲基膦酸酯核苷酸间键联是在一条链的5'-末端和3'-末端这两者处。37.如权利要求36所述的双链RNAi试剂，其中所述链是该反义链。38.如权利要求29所述的双链RNAi试剂，其中所述RNAi试剂包含6-8个硫代磷酸酯核苷酸间键联。39.如权利要求38所述的双链RNAi试剂，其中该反义链包含5’-末端处的两个硫代磷酸酯核苷酸间键联和3’-末端处的两个硫代磷酸酯核苷酸间键联，并且该有义链包含5’-末端抑或3’-末端处的至少两个硫代磷酸酯核苷酸间键联。40.如权利要求1或6所述的双链RNAi试剂，其中在该双链体的该反义链的5′-端的1位置处的碱基对是一个AU碱基对。41.如权利要求6所述的双链RNAi试剂，其中这些Y核苷酸含有一个2′-氟代修饰。42.如权利要求6所述的双链RNAi试剂，其中这些Y′核苷酸含有一个2′-O-甲基修饰。43.如权利要求6所述的双链RNAi试剂，其中p’>0。44.如权利要求6所述的双链RNAi试剂，其中p’＝2。45.如权利要求44所述的双链RNAi试剂，其中q'＝0，p＝0，q＝0，并且p'突出核苷酸与该靶mRNA互补。46.如权利要求44所述的双链RNAi试剂，其中q'＝0，p＝0，q＝0，并且p'突出核苷酸与该靶mRNA不互补。47.如权利要求38所述的双链RNAi试剂，其中该有义链具有总共21个核苷酸，并且该反义链具有总共23个核苷酸。48.如权利要求43-47中任一项所述的双链RNAi试剂，其中至少一个nP'经由硫代磷酸酯键联连接到相邻核苷酸上。49.如权利要求48所述的双链RNAi试剂，其中所有nP'均经由硫代磷酸酯键联连接到相邻核苷酸上。50.如权利要求1或6所述的双链RNAi试剂，其中所述RNAi试剂选自下组，该组由以下各项组成：AD-59743、AD-60940以及AD-61002。51.一种能够抑制细胞中TMPRSS6的表达的双链RNAi试剂，其中所述双链RNAi试剂包含形成一个双链区的一条有义链和一条反义链，其中所述有义链包含5'-CUUCUUCUGGUUCAUUCUCCA-3'(SEQIDNO:223)的核苷酸序列的至少19个连续核苷酸，并且所述反义链包含5'-UGGAGAAUGAACCAGAAGAAGCA-3'(SEQIDNO:292)的核苷酸序列的至少19个连续核苷酸，其中所述有义链包括不多于5、4、3、2、1或0个未修饰的核苷酸，其中所述修饰的核苷酸包含选自下组的一种修饰，该组由以下各项组成：2'-O-甲基修饰和2'-氟代修饰，其中所述有义链包含在5'-末端处的两个硫代磷酸酯核苷酸间键联，其中所述反义链包括不多于5、4、3、2、1或0个未修饰的核苷酸，其中所述修饰的核苷酸包含选自下组的一种修饰，该组由以下各项组成：2'-O-甲基修饰和2'-氟代修饰，其中所述反义链包含在5'-末端处的两个硫代磷酸酯核苷酸间键联和在3'-末端处的两个硫代磷酸酯核苷酸间键联，其中每条链具有19-30个核苷酸，并且其中所述有义链被缀合到一种或多种GalNAc衍生物上，这些GalNAc衍生物通过一个支链二价或三价接头附接在3'-末端处。52.如权利要求51所述的双链RNAi试剂，其中所述有义链的所有这些核苷酸和所述反义链的所有这些核苷酸均包含一种修饰。53.一种能够抑制细胞中TMPRSS6(蛋白裂解酶-2)的表达的双链RNAi试剂，其中所述双链RNAi试剂包含与一条反义链互补的一条有义链，其中所述反义链包含与编码TMPRSS6的mRNA的一部分互补的一个区，其中所述互补的区域包含5'-UGGAGAAUGAACCAGAAGAAGCA-3'(SEQIDNO:292)的核苷酸序列的至少19个连续核苷酸，其中每条链的长度是19个至30个核苷酸，其中所述双链RNAi试剂由式(III)表示：有义：5'np-Na-(XXX)i-Nb-YYY-Nb-(ZZZ)j-Na-nq3'反义：3'np′-Na′-(X′X′X′)k-Nb′-Y′Y′Y′-Nb′-(Z′Z′Z′)l-Na′-nq′5'(III)其中：i、j、k以及l各自独立地是0或1；p、p'、q以及q'各自独立地是0-6；各Na和Na′独立地表示包含0-25个修饰的或未修饰的或其组合的核苷酸的寡核苷酸序列，每个序列包含至少两个不同修饰的核苷酸；各Nb和Nb′独立地表示包含0-10个修饰的或未修饰的或其组合的核苷酸的寡核苷酸序列；各np、np′、nq以及nq′，其中每个可以是存在的或可以是不存在的，独立地表示突出核苷酸；XXX、YYY、ZZZ、X′X′X′、Y′Y′Y′以及Z′Z′Z′各自独立地表示...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·巴特勒，B·贝腾考特，K·G·雷杰夫，M·迈尔，K·查里斯，
申请(专利权)人：阿尔尼拉姆医药品有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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