本发明专利技术描述了用于预防流感病毒感染的蛋白质和免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物包含免疫原如甲型流感病毒的M2e和HA2FP结构域以及免疫增强物如人IgG的Fc片段以及任选的稳定化序列。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】 与相关申请的夺叉引用 本申请根据35U. S. C. § 119(e)要求于2013年2月15日提交的美国临时专利申 请61/765, 519的权益，其全部内容以引用并入本文。 关于联邦咨助研究的声明 本专利技术是在美国国立卫生研究院授予的批准号为R03AI088449的政府支持下进 行的。政府对本专利技术享有一定的权力。
本公开内容涉及用于预防流感感染的免疫原性组合物。
技术介绍
属于正粘病毒（Orthomyxoviridae)科的甲型流感病毒可在人类、禽类或驯养食 用动物中导致流感。该病毒可基于其表面糖蛋白、血凝素（HA)和神经氨酸酶（NA)而被进 一步分为不同亚型。在已知的18种HA和11种NA中，三种HA亚型（Hl、H2和H3)和两种 NA亚型（NI和N2)在人类中是最常见的。HlNl和H3N2是导致人类季节性流感和全球流行 性流感的主要亚型。2009年的流感流行是由猪源性甲型流感病毒HlNl所引起的。这已导 致人们对高致病性禽流感（HPAI)H5N1病毒的流行可能性的关注增加。因此，迫切需要开发 针对不同甲型流感病毒株的有效且安全的疫苗以预防流感在未来爆发。 专利技术概沐 本文公开了用于预防和治疗流感病毒感染的蛋白质和免疫原性组合物。 在一个实施方式中，提供了包含免疫原序列的蛋白质，所述免疫原序列包含甲型 流感病毒基质蛋白M2e结构域或其片段，以及甲型流感病毒血凝素融合肽（FP)结构域或其 片段；以及免疫增强物（immunopotentiator)序列。 在一个实施方式中，FP结构域来自于甲型流感病毒血凝素亚型1、2、3、4、5、6、7、 8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18。在另一个实施方式中，FP结构域和M2e结构域独立 地来自于选自HlNl病毒、H1N2病毒、H2N2病毒、H3N2病毒、H5N1型病毒、H7N2病毒、H7N3 病毒、H7N7病毒、H7N9病毒、H9N2病毒或H10N8病毒的甲型流感病毒。在另一个实施方式 中，FP结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO. 3、7、17、18、19或20中的一个至少90%相同。在 另一个实施方式中，M2e结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO. 4、8、21、22、23或24中的一个 至少90%相同。在某些实施方式中，免疫原包括12〇4?或？?-126。 在另一个实施方式中，蛋白质还包含稳定化序列。在另一个实施方式中，所述稳定 化序列为折叠子（Fd)或GCM序列。 在另一个实施方式中，免疫增强物序列为人IgG Fc的Fc片段序列、C3d序列、旋 盘尾丝虫（Onchocerca volvulus)ASP-I序列、霍乱毒素序列或胞壁酰肽序列。在另一个实 施方式中，免疫增强物序列与SEQ ID NO. 10的人IgG Fc序列至少90%相同。 在另一个实施方式中，所述蛋白质为融合蛋白。在一个实施方式中，所述免疫增强 物序列被连接至免疫原序列的C端。在另一个实施方式中，所述稳定化序列被连接至免疫 原序列的C端；且免疫增强物序列被连接至稳定化序列的C端。在某些实施方式中，融合蛋 白包括 M2e-FP-Fc、FP-M2e-Fc、M2e-FP-FdFc 或 FP-M2e-FdFc。 在另一个实施方式中，所述融合蛋白还包含位于至少一个以下位置的连接子序 列：免疫原序列的M2e和FP结构域之间、免疫原序列和稳定化序列之间，以及稳定化序列和 免疫增强物序列之间。在另一个实施方式中，所述连接子为（GGGGS) n，其中η为0和8之间 的整数。在一个实施方式中，η为1。 还提供了一种免疫原性组合物，其包含本文所公开的蛋白质以及至少一种药学上 可接受的赋形剂。在另一个实施方式中，所述免疫原性组合物还包含佐剂。 本文还提供了一种在受试者中诱导针对流感病毒的免疫应答的方法，其包括向所 述受试者施用本文所公开的免疫原性组合物或蛋白质。在另一个实施方式中，所述免疫应 答为保护性免疫应答。在另一个实施方式中，所述流感病毒是甲型流感病毒、乙型流感病毒 或丙型流感病毒。 本文还提供了一种预防受试者的流感病毒感染的方法，其包括向所述受试者施用 本文所公开的免疫原性组合物或蛋白质。在另一个实施方式中，免疫应答为保护性免疫应 答。在另一个实施方式中，所述流感病毒是甲型流感病毒、乙型流感病毒或丙型流感病毒。 附图简沐 图IA-B示出了含甲型流感病毒H5NlM2e和FP结构域的与折叠子（Fd)和人 IgG可结晶（Fe)部分片段融合（M2e-FP-FdFc，其也被称为M2e-FP-FdFc)或与Fc融合 (M2e-FP-Fc)或M2e仅与Fc融合（M2e-Fc)以及H7N9M2e和FP与Fd以及人IgG的Fc融合 (H7N9M2e-FP-FdFc)的所构建的重组融合蛋白的示意性结构。H5N1和H7N9甲型流感病毒 的M2e和FP的高度保守序列以及Fd序列被列在顶部。H5N1和H7N9的M2e和FP中氨基酸 残基的差异用下划线标出。 图2A-C示出了通过SDS-PAGE和Western印迹进行的重组M2e-FP融合蛋白的表 征。用SDS-PAGE分析纯化的H5NlM2e-FP融合蛋白，然后考马斯蓝染色（图2A)并通过分别 使用H5NlM2e-(图2B)和HA2-特异性MAb进行Western印迹（图2C)。在左边示出了蛋白 质分子量标记（kDa)。MAb以I :3000进行稀释以用于H5N1病毒的M2e(#16)和HA2(1B12)。 图3A-B示出了由重组H5NlM2e_FP融合蛋白所诱导的抗流感IgG抗体应答。PBS被 用作阴性对照。图3A :在每次接种后10天收集的小鼠血清（I :6400)中检测H5N1 M2e-FP 特异性IgG抗体应答。数据被表示为每组5只小鼠的平均A450土标准差（SD)。图3B:IgG 抗体的结合至重组H5N1 M2e-FP融合蛋白的能力，其中在最后一次接种后10天收集的小鼠 血清中检测IgG抗体。数据被表示为各稀释点的每组5只小鼠的平均A450土SD。 图4A-B示出了 IgGl (图4A)和IgG2a (图4B)抗体的结合至重组H5N1 M2e-FP融 合蛋白的能力，其中在最后一次接种后10天收集的小鼠血清中检测抗体。PBS被用作阴性 对照。数据被表示为各稀释点的每组5只小鼠的平均A450土SD。 图5六-8示出了由重组!15附126-??融合蛋白诱导的针对1050%致死剂量（〇)5。） 的H5N1病毒攻击的跨分支（cross-clade)保护。接种的小鼠经鼻内（i.n.)分别受到 10〇) 5。的 H5N1 病毒分支 I :A/ 越南 /1194/2004(VN/1194)(图 5A)或分支 2. 3. 4 :A/ 深圳 /406H/06 (SZ/406H)(图5B)的攻击，并监控被攻击小鼠的存活率（％ ) 2周。用时序检验 (log-rank test)的Kaplan-Meier生存分析来分析每组8只小鼠的生存曲线之间的显著 性。*和**分别指示与对照组相比P〈0. 05和P〈0. 01。 图6A-B示出了由重组H5NlM2e-FP融合蛋白诱导的针对3LD5。的H5N1病毒攻击的 跨分支保护。接种的小本文档来自技高网...
【技术保护点】
蛋白质，其包含：免疫原序列，所述免疫原序列包含甲型流感病毒基质蛋白M2e结构域或其片段，和甲型流感病毒血凝素融合肽(FP)结构域或其片段；以及免疫增强物序列。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：周育森，赵光宇，姜世勃，杜兰英，
申请(专利权)人：纽约血库公司，周育森，赵光宇，
类型：发明
国别省市：美国;US
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