本发明专利技术公开了一种采用SSR分子标记技术鉴别谷子品种的方法及应用，属于植物品种鉴别技术领域。本发明专利技术所提供的方法提取谷子DNA，利用谷子DNA和5对SSR核心引物进行PCR扩增反应，电泳检测后根据电泳检测结果鉴别谷子品种；所述5对SSR核心引物的核苷酸序列如SEQID NO.1-10所示。本发明专利技术所提供的方法能有效的区分谷子品种，为进一步鉴别大量谷子品种提供了重要途径。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种采用SSR分子标记技术鉴别谷子品种的方法及应用，属于植物品 种鉴别
技术介绍
谷子属禾木科狗尾草属作物，具有生育期短、耐旱、耐瘠等生理特性，广泛分布于 亚欧大陆的温带和热带，是中国黄河中上游地区主要栽培作物之一。同时，谷子营养价值极 高，含有丰富的氨基酸、蛋白质、维生素以及妈、铜、铁、锌、硒、碘、镁等微量元素，营养保健 作用也非常显著。多年来，品种鉴定是以形态学标记为依据的。这种方法虽然简单经济，但 周期长，花费大，受季节限制，而且很多性状的表现受栽培措施及环境因子影响，从而制约 了鉴定的准确性。DNA分子标记技术则具有高效、准确、不受环境条件影响、实验操作简单等 优点，已广泛应用于植物品种真实性鉴定及纯度检测研究。SSR标记是近年来发展起来的建 立在PCR基础上的第二代分子标记。由于SSR分子标记具有数量丰富、多态性高、遗传共显 性、谱带扩增稳定、精度高、检测时间短、技术成熟等特点，已应用于作物遗传学研究。
技术实现思路
为解决现有技术的不足，本专利技术提供了一种采用SSR分子标记技术鉴别谷子品种 的方法，采用的技术方案如下： 本专利技术的目的在于提供一种采用SSR分子标记技术鉴别谷子品种的方法，该方法 是提取谷子DNA，利用谷子DNA和5对SSR核心引物进行PCR扩增反应，电泳检测后根据电 泳检测结果鉴别谷子品种；所述5对SSR核心引物的核苷酸序列如SEQID NO. 1-10所示。 优选地，所述方法步骤如下： 1)提取谷子DNA ; 2)利用步骤1)所得谷子DNA和5对SSR核心引物进行PCR扩增反应，然后进行 8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，银染显色；所述SSR核心引物，每对包括一个正向引 物和一个反向引物，5对SSR核心引物的核苷酸序列如SEQID NO. 1-10所示； 3)观察步骤2)的电泳结果，统计稳定且易于分辨的差异性条带，谱带按0、1系统 记录，有差异性条带时赋值为1，无差异性条带时赋值为〇,根据记录结果计算遗传相似系 数，鉴别谷子品种。 优选地，步骤1)所述提取谷子DNA，是取谷子幼芽，液氮冷冻后于-80°c保存备用， 然后利用植物基因组试剂盒提取谷子DNA。 更优选地，所述谷子幼芽，为谷子发芽后l〇d-15d的幼芽。 优选地，步骤1)所述谷子，品种为大叶黄谷、紫梗刀把齐、钱串紧谷、四寸红根、红 根绳子头、细皮白谷、母鸡嘴、大满谷、干尖糙、六十天还仓、缰绳头、金苗黄、磨里谷、小紫苗 谷、红酒谷、黑谷、钱串子、骡子尾、鸟谷、蓬莱麦茬谷、小绳头、红苗金耙齿、竹叶红、野鸡令、 红苗绳头子、大鹅脖、棒子熟、八沟道、干尖子、竹叶青、二青苗、二白谷、蒜皮白谷、玉黄谷、 齐头红、黄钱串、紫杆谷、白露黄、压塌车、张纯一、黑谷、青颗谷、大黑谷、小卜谷或白毛粮 谷。 优选地，步骤3)所述PCR扩增反应，包括 10XPCR buffer，25mM MgCl2，10mM dNTP， IOmM正向引物，IOmM反向引物，5U/ μ L Taq酶，50ng/ μ L模板DNA和ddH20。 更优选地，步骤3)所述PCR扩增反应，体系总体积为25yL，其中包括10XPCR buffer 2.5 μ L，25mM MgCl2 3 μ L，IOmM dNTP 1.25 μ L，IOmM正向引物 1 μ L，IOmM反向引物 1 μ L，5U/ μ L Taq 酶 0· 2 μ L，50ng/ μ L 模板 DNAl μ L，ddH20 16. 5 μ L。 优选地，步骤3)所述PCR扩增反应，程序为：94°C预变性3min ;94°C变性45s，50°C 退火30s，72°C延伸30s，共30个循环；72°C延伸10min，4°C保存。 优选地，所述方法具体步骤为： 1)谷子DNA的提取：取发芽后10d-15d的谷子幼芽，液氮冷冻后于_80°C保存备 用，利用植物基因组试剂盒提取谷子幼芽的DNA，获得谷子DNA ; 2)PCR扩增和电泳检测：利用步骤1)所得谷子DNA和5对核苷酸序列如SEQID NO. 1-10所示的SSR核心引物进行PCR扩增反应；然后对PCR产物进行8%非变性聚丙烯酰 胺凝胶电泳检测，银染显色； 所述SSR核心引物，每对包括一个正向引物和一个反向引物；所述PCR扩增反 应，体系总体积为 25 μ L，其中包括 10 X PCR buffer 2.5 μ L，25mM MgCl2 3 μ L，IOmM dNTP I. 25yL，10mM 正向引物 I yL，10mM 反向引物 I yL，5U/yL Taq 酶 0· 2 4 1^，50即/^14莫板 DNAl μ L，CldH2O 16. 5 μ L ;PCR 扩增反应程序为：94°C预变性 3min ;94°C变性 45s，50°C退火 30s，72°C延伸30s，共30个循环；72°C延伸lOmin，4°C保存； 3)观察步骤2)的电泳结果，统计稳定且易于分辨的差异性条带，谱带按0、1系统 记录，有差异性条带时赋值为1，无差异性条带时赋值为〇,根据记录结果计算遗传相似系 数，鉴别谷子品种。 以上所述任一方法在鉴别谷子品种中的应用。本专利技术有益效果： 1、本专利技术利用SSR分子标记对45个谷子品种进行鉴别，结果表明：5对谷子SSR 引物共扩增出35个等位基因，平均每对引物7个等位基因；各引物的多态信息指数为 0. 688~0. 846,平均值为0. 779 ;通过NTsys-pc 2. 11进行各品种间遗传相似系数的计算， 各品种间遗传相似系数在〇. 6571~0. 9429之间，45个谷子品种的平均遗传相似系数为 0. 7554 ;选用的5对谷子引物均有良好的多态性及鉴别能来，能有效将45个谷子品种区分， 为进一步鉴别大量谷子品种提供了重要途径。 2、本专利技术仅利用5对谷子引物就能够将谷子品种有效鉴别开，鉴别准确率高达 100%，在进一步鉴别大量谷子品种方面具有很大潜力，与现有专利相比，效果更佳，更节约 时间、成本等。【具体实施方式】 下面结合具体实施例对本专利技术做进一步说明，但本专利技术不受实施例的限制。 以下实施例中谷子品种名称及资源库号均来自于中国作物种质信息网。 实施例1 :方法的建立 1、准备谷子材料：将盖州红、鸭子嘴、大头黄、大白毛、老来变、红粘谷、刀把齐、勾 根红、钱串子、大青苗、黄粘谷、红谷子、黄谷、鸭子嘴、大粒黄、红苗谷这15种谷子材料种植 于温室；取发芽后l〇d-15d左右的谷子幼芽，液氮冷冻后放入-80°C超低温冰箱中保存备 用；15种谷子品种信息如表1所示。 表1 15种谷子品种信息 2、谷子DNA的提取：用植物基因组试剂盒提取各种谷子材料的DNA，用1%的琼脂 糖凝胶电泳检测DNA纯度；将各材料的DNA浓度稀释至50ng/ μ L后，置于-20°C冰箱中备 用； 3、PCR扩增反应、电泳检测：PCR反应总体积为25 μ L，包括10 X PCR buffer 2. 5 μ L, MgC12 (25mM) 3 μ L, dNTP (IOmM) I. 25 μ L,正向引物（IOmM) 1 μ L，反向引物 (IOmM) 1 μ L，Taq 酶（5U/μ L) 0· 2 μ L，模本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种采用SSR分子标记技术鉴别谷子品种的方法，其特征在于，提取谷子DNA，利用谷子DNA和5对SSR核心引物进行PCR扩增反应，电泳检测后根据电泳检测结果鉴别谷子品种；所述5对SSR核心引物的核苷酸序列如SEQID NO.1‑10所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张东杰，王颖，沈琰，杨义杰，孙大庆，张桂芳，
申请(专利权)人：黑龙江八一农垦大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23
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