一种雪落樱组培快速繁殖方法技术

本发明专利技术公开了一种雪落樱组培快速繁殖方法，包括以下步骤：A叶片、茎段灭菌，B不定芽诱导及增殖，C抗褐化试验，D愈伤组织诱导及增殖，E愈伤组织分化丛芽试验，F壮苗及生根培养，G胚性愈伤组织诱导及分化试验；采用植物组织培养的方法繁殖雪落樱，不仅可以节约大量外汇，而且受外界影响较小，四季皆可进行，节约育苗占地，降低成本，并且保存了母体的全部优良性状及遗传稳定性。这种快速的繁殖方法在短期内可以进行大量的试管苗规模化、工厂化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物无性繁殖
，尤其涉及。
技术介绍
带芽茎段是目前使用最多的离体快繁外植体，众多试验表明樱花以茎段或芽心为外植体时可成功的诱导出丛生芽。愈伤培养是组织培养中非常常见并且也是重要的环节。任何外植体均可以通过愈伤组织培养诱导出芽和根。当外植体为叶片、叶柄、花瓣、花柄、子房等只能通过愈伤组织途径培养，很难直接诱导出丛芽，这可能与外植体的基因型、生理状态、生长调节剂配比、培养条件、继代周期等方面有关，仍需要进一步深入研究。尤其是褐化、污染、玻璃化是组织培养再生体系建立过程中常见的问题。雪落楼((SkrasiAs.xueluoensis C.H.Nan & Χ.R.Wang)为蓄薇科楼属矮生楼亚属新种，具有极大的观赏价值，但目前存在繁殖障碍，市场无商品苗提供。
技术实现思路
专利技术目的:针对现有技术中存在的不足，本专利技术的目的是提供，建立雪落樱的再生体系，获得优质的雪落樱种苗。技术方案:为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下: ，包括以下步骤: 1)剪取春季雪落樱幼嫩的茎段，消毒洗净，剪成带芽茎段，放入配方为1/4MS+6-BA1.0mg/L+IBA 0.01 mg/L+6.4 g/L琼脂+30 g/L蔗糖的培养基中，培养一周后诱导出丛芽； 2)将生长健壮的丛芽块放入配方为MS+6-BA 0.5 mg/L +NAA 0.05 mg/L +TDZ 0.1mg/L+6.4 g/L琼脂+30 g/L蔗糖的培养基中培养，每25d继代一次直至培养出小苗； 3)将小苗培养在壮苗培养基MS+6-BA0.1 mg/L+IBA 0.05 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.4 g/L中，当单个不定芽生长到1.5~3 cm规格时，转入生根培养基3/4MS+NAA 0.1 mg/L+蔗糖15 g/L+琼脂6.4 g/L中，生根培养40 d ; 4)将生长健壮的苗子在培养室中炼苗3~5d，清洗干净根系间的培养基进行移栽，移栽后适当遮阴，保持湿度，移栽成活。，包括以下步骤: 1)取幼嫩叶片，消毒洗净，剪成小叶片放入配方为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L+2, 4-D 2.0 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.4 g/L的培养基中培养，每25天继代一次直至培养出愈伤组织； 2)将愈伤组织放入丛芽增殖培养基MS+6-BA0.5-2.0 mg/L+NAA 0.05-0.2 mg/L+TDZ0.1-1.0 mg/L+Vc 20 mg/L+鹿糖30 g/L+琼脂6.4 g/L中培养，每25 d继代一次直至培养出小苗； 3)将小苗培养在配方为MS+6-BA0.05-0.1 mg/L+IBA 0.01-0.1 mg/L的壮苗培养基中，当单个不定芽生长到1.5~3cm时，然后转入配方为3/4 MS+NAA 0.1 mg/L+蔗糖15 g/L+琼脂6.4 g/L的培养基中，进行生根培养40 d ; 4)将生长健壮的苗子在培养室中炼苗3~5 d，清洗干净根系间的培养基进行移栽，移栽后适当遮阴，保持湿度，移栽成活。步骤2)中，丛芽增殖培养基为 MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.05 mg/L+TDZ 0.1 mg/L+Vc 20 mg/L+琼脂 6.4 g/L+鹿糖 30 g/L。步骤1)中，消毒洗净的方法为:用洗洁精浸泡2~4 min，用软毛刷轻轻刷除茎段表面的污染物，再于流水下冲洗1~3 h;茎段以75 %的酒精30 s，用无菌水清洗3~5次，然后0.1% HgCl2 10 min，用无菌水清洗5~8次。步骤3)中，壮苗培养基配方为:MS+ 6-BA 0.1 mg/L+ IBA 0.05 mg/L+蔗糖 30 g/L+ 琼脂 6.4 g/L。有益效果:与现有的技术相比，本专利技术的雪落樱组培快速繁殖方法，有效建立出雪落樱的再生体系，能快速高效的获得优质种苗，解决了实生苗生长周期长的问题，为工厂化育苗缩短了时间、提高了效率、降低了成本，同时保留了母本的优良性状。研究中发现丛芽诱导效率较高为95.38%、增殖量大，愈伤组织的诱导与分化成功实现了无菌苗的大量培育，得出了较佳的培育体系；胚性愈伤组织的诱导及分化初探也得出了较为理想的胚状体。【附图说明】图1是茎段培养培养图； 图2是生根图； 图3是移栽图； 图4是愈伤诱导图； 图5是愈伤增殖图； 图6愈伤分化图。【具体实施方式】下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的说明。实施例1 ，包括以下步骤: 1)茎段芽诱导培养:1)剪取春季雪落樱幼嫩的茎段，消毒洗净，剪成带1-2个芽的1.5cm的茎段，以竖插和横放方式接种到以MS、1/2MS、1/4MS、改良MS (硝酸铵减半)为基本培养基，以6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.01 mg/L为激素组合的启动培养基中；其中添加6.4 g/L琼脂和30 g/L蔗糖。结果表明:MS、1/2MS、1/4MS、改良MS培养基的出芽率分别为75.35%、88.46%,97.75%,84.92%，其中1/4MS培养基出芽时间最短，在一周左右，其他3种培养基出芽时间在13 d左右，如图1所示。2)将生长健壮的丛芽块(3?5芽)作为外植体进行丛芽增殖，以MS为基本培养基，以 6-BA (0.5、1.0、1.5 mg/L) +IBA (0.01、0.05、0.1、0.2 mg/L)组合的 12 组培养基和6-BA (0.5、1.0、1.5 mg/L) +NAA (0.05、0.1、0.2 mg/L) +TDZ (0.1、0.5、1.0 mg/L)组合的9组培养基中进行丛芽增殖试验，另外添加琼脂6.4 g/L、碳源(蔗糖、葡糖糖、麦芽糖)30g/L ο 25天后统计丛芽增殖系数及生长情况。结果表明:在6-ΒΑ和ΙΒΑ的激素组合中MS+6-BA 1.5 mg/L+ IBA 0.01 mg/L的培养基丛芽增殖系数最高，为13.71，但增殖慢，叶片细小，节间短；在 6-BA和 NAA和 TDZ 的激素组合中 MS+ 6-BA 0.5 mg/L +NAA 0.05 mg/L +TDZ0.1 mg/L的培养基中丛芽增殖系数最高，为28.37，丛芽增殖快速，新生丛芽多，叶片狭小，茎段细弱，生长健康。3)壮苗及生根培养:将小苗培养在壮苗及生根培养基中，确定MS+6-BA 0.1 mg/L+IBA 0.05 mg/L+蔗糖 30 g/L+琼脂 6.4 g/L 培养基壮苗效果理想，3/4 MS+NAA 0.1 mg/L+蔗糖15 g/L+琼脂6.4 g/L为最佳的生根培养基。生根率达100%，如图2所示。采用1/2 MS培养基添加NAA (0.1,0.5,1.0 mg/L)，生根率最高达95.56%。采用1/4 MS培养基添加 NAA (0.1,0.5,1.0 mg/L)，生根率最高达 94.81%。4)试管苗的移栽:移栽前将穴盘和基质高温曝晒灭菌，将生长健壮的苗子在培养室中炼苗3~5 d，清洗干净根系间的培养基进行移栽，移栽后适当遮阴，保持湿度，移栽成活率达90%，如图3所示。实施例2 ，包括以下步骤: 1)愈伤组织诱导培养:取幼嫩叶片流水下冲洗1~3 ho以75%酒精30 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种雪落樱组培快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：1）剪取春季雪落樱幼嫩的茎段，消毒洗净，剪成带芽茎段，放入配方为1/4MS+6‑BA 1.0 mg/L+IBA 0.01 mg/L+6.8 g/L琼脂+30 g/L蔗糖的培养基中，培养一周后诱导出丛芽；2）将生长健壮的丛芽块放入配方为MS+ 6‑BA 0.5 mg/L +NAA 0.05 mg/L +TDZ 0.1 mg/L+6.4 g/L琼脂+30 g/L蔗糖的培养基中培养，每25d继代一次直至培养出小苗；3）将小苗培养在壮苗培养基MS+6‑BA 0.1 mg/L+IBA 0.05 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.4 g/L中，当单个不定芽生长到1.5~3 cm规格时，转入生根培养基3/4MS+NAA 0.1 mg/L+蔗糖15 g/L+琼脂6.4 g/L中，生根培养40 d；4）将生长健壮的苗子在培养室中炼苗3~5d，清洗干净根系间的培养基进行移栽，移栽后适当遮阴，保持湿度，移栽成活。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王华辰，王贤荣，伊贤贵，张开文，袁长权，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32