一种鸡传染性支气管炎卵黄抗体的提取方法技术

本发明专利技术提供了一种鸡传染性支气管炎卵黄抗体的提取方法，该方法先将高免卵黄加适量纯化水稀释，而后利用双水相萃取方法初步萃取，再分两次萃取纯化，在此基础上结合双效超滤技术除盐、浓缩，能最大限度的提纯卵黄抗体，且不会对卵黄抗体造成破坏、不影响其生物活性，因此本发明专利技术方法制备的产品具有较高的纯度和收率，同时生物活性较强，可制作成粉剂、溶液剂、喷雾剂、注射剂、注射用冻干粉等临床适用剂型，易于推广应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及兽用生物制品
，具体涉及。
技术介绍
鸡传染性支气管炎是由传染性支气管炎病毒引起的鸡的一种急性高度接触性呼吸道传染病。传染性支气管炎病毒属于尼多病毒目、冠状病毒科、冠状病毒属、冠状病毒III群的成员。本病主要通过空气传播，也可以通过饲料、饮水、垫料等传播，产蛋鸡感染通常变现产蛋量降低，蛋的品质下降。本病广泛流行于世界各地，是养鸡业的重要疫病。鸡卵黄抗体(Immunoglobulin of egg yolk, IgY)是由母禽血液中IgG转移至其卵黄中对子代产生保护性作用的免疫球蛋白，是卵黄中存在的唯一一种免疫球蛋白，也称卵黄免疫球蛋白。免疫鸡蛋卵黄中含有大量来源于血清的IgG抗体(即IgY)，浓度远高于血清，具有高度稳定性和生物学活性，这使鸡卵黄抗体IgY 口服防病治病成为可能。目前卵黄抗体的提取方法主要有水稀释法、有机物沉淀法、有机溶剂抽提法和超临界气体提取法等。其中水稀释法工艺比较简单，抗体回收率较高，是目前应用较广泛的分离方法。而这些方法存在诸如实验不易操作、IgY提取的纯度与得率均较低等缺点。因此，寻求一种相对简单、实用、纯度与得率均较高的提取卵黄免疫球蛋白IgY方法势在必行。
技术实现思路
本专利技术旨在针对现有技术的技术缺陷，提供，以解决现有技术的相关方法收率和纯度较低的技术问题。本专利技术要解决的另一技术问题是现有技术的相关方法不易操作。为实现以上技术目的，本专利技术采用以下技术方案:—种鸡传染性支气管炎卵黄抗体的提取方法，包括以下步骤:1)取鸡传染性支气管炎高免卵黄，与水按1:5?1:15 (w/w)的比例混合均匀，得到卵黄稀释液；2)向步骤1)所述卵黄稀释液中加入10?30% (v/v)的饱和硫酸铵溶液和PEG，得到第一萃取体系，而后搅拌10?30min，再静置10?20min，收集上相即为第一上相，所述第一萃取体系中PEG含量为8?20% (w/w)； 3)向步骤2)所述第一上相中加入10?30% (v/v)的饱和硫酸铵溶液，得到第二萃取体系，而后搅拌10?30min，再静置10?20min，收集上相即为第二上相；向所述第二上相中加入10?30% (v/v)的饱和硫酸铵溶液，得到第三萃取体系，调节其pH至5.0?5.4，而后搅拌10?30min，再静置10?20min，收集下相；4)取步骤3)所述下相超滤浓缩，即得到鸡传染性支气管炎卵黄抗体浓缩液。作为优选，步骤1)所述的水是由超纯水系统制备的纯化水。作为优选，步骤2)所述的PEG是PEG2000。作为优选，步骤3)中利用盐酸调节第三萃取体系pH。作为优选，步骤3)中调节第三萃取体系pH至5.2。作为优选，步骤4)所述的超滤是利用双效超滤系统执行的。作为优选，步骤4)所述超滤的截留分子量为150kd?220kd。作为优选，步骤4)中超滤浓缩至原体积的1/10?1/15。作为优选，还包括步骤5):取步骤4)所述鸡传染性支气管炎卵黄抗体浓缩液，冷冻干燥，制得鸡传染性支气管炎卵黄抗体冻干粉。作为优选，所述鸡传染性支气管炎卵黄抗体浓缩液于4°C条件下密封保存。在以上技术方案中，所述上相是指在萃取过程中，密度较小、处于体系上方的溶液；相对应的，所述下相是指在萃取过程中，密度较大、处于体系下方的溶液。此外，本专利技术所述的高免卵黄是用于提取卵黄抗体的原料，通常是以鸡传染性支气管炎疫苗免疫鸡后，取其所产鸡蛋的卵黄，该卵黄中含有卵黄抗体；本专利技术中高免卵黄的获取方法可以依照本
的公知方法实施。本专利技术技术方案先将高免卵黄加适量纯化水稀释，而后利用双水相萃取方法初步萃取，再分两次萃取纯化，在此基础上结合双效超滤技术除盐、浓缩，能最大限度的提纯卵黄抗体，且不会对卵黄抗体造成破坏、不影响其生物活性，因此本专利技术方法制备的产品具有较高的纯度和收率，同时生物活性较强，可制作成粉剂、溶液剂、喷雾剂、注射剂、注射用冻干粉等临床适用剂型，易于推广应用。【具体实施方式】以下将对本专利技术的【具体实施方式】进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情况下可允许数量有一定的变动。因此，用“大约”、“左右”等语言所修正的数值不限于该准确数值本身。在一些实施例中，“大约”表示允许其修正的数值在正负百分之十(10%)的范围内变化，比如，“大约100”表示的可以是90到110之间的任何数值。此外，在“大约第一数值到第二数值”的表述中，大约同时修正第一和第二数值两个数值。在某些情况下，近似性语言可能与测量仪器的精度有关。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本专利技术所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂耗材，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值；以下实施例中的％，如无特别说明，均为质量百分含量。实施例1取鸡传染性支气管炎免疫母鸡所产鸡蛋，浸入42°C的0.1 %新洁尔灭水溶液中消毒15min，随后将鸡蛋浸入温度为95°C以上的水中消毒5s，取出后于无菌条件下晾干或吹干，打蛋分离蛋清与卵黄，充分除去蛋清和卵黄系膜，将卵黄收集于一容器中，搅拌均匀，即得到鸡传染性支气管炎高免卵黄。1)原材料的预处理:将鸡传染性支气管炎高免卵黄与纯化水按一定的比例搅拌均匀； 2)双水相初步萃取:缓慢加入15 %体积的饱和硫酸铵溶液，加入PEG，使其质量分数达到12%，搅拌20min，静置15min，收集上相；3)双水相萃取纯化:向上述溶液中缓慢加入15 %体积的饱和硫酸铵溶液，搅拌20min，静置15min，收集上相，向上相中加入20%体积的饱和硫酸钱溶液，用盐酸调节PH至5.2，搅拌20min，静置15min，收集下相；4)卵黄抗体的浓缩:使用超滤系统进行除盐，同时进行浓缩至原体积的1/10 ;5)卵黄抗体的干燥:将卵黄浓缩液进行冷冻干燥，制成冻干粉，即为卵黄抗体产品Ο实施例2取鸡传染性支气管炎免疫母鸡所产鸡蛋，浸入42°C的0.1 %新洁尔灭水溶液中消毒15min，随后将鸡蛋浸入温度为95°C以上的水中消毒5s，取出后于无菌条件下晾干或吹干，打蛋分离蛋清与卵黄，充分除去蛋清和卵黄系膜，将卵黄收集于一容器中，搅拌均匀，即得到鸡传染性支气管炎高免卵黄。1)原材料的预处理:将鸡传染性支气管炎高免卵黄与纯化水按一定的比例搅拌均匀；2)双水相初步萃取:缓当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鸡传染性支气管炎卵黄抗体的提取方法，其特征在于包括以下步骤：1)取鸡传染性支气管炎高免卵黄，与水按1:5～1:15(v/v)的比例混合均匀，得到卵黄稀释液；2)向步骤1)所述卵黄稀释液中加入10～30％(v/v)的饱和硫酸铵溶液和PEG，得到第一萃取体系，而后搅拌10～30min，再静置10～20min，收集上相即为第一上相，所述第一萃取体系中PEG含量为8～20％(w/w)；3)向步骤2)所述第一上相中加入10～30％(v/v)的饱和硫酸铵溶液，得到第二萃取体系，而后搅拌10～30min，再静置10～20min，收集上相即为第二上相；向所述第二上相中加入10～30％(v/v)的饱和硫酸铵溶液，得到第三萃取体系，调节其pH至5.0～5.4，而后搅拌10～30min，再静置10～20min，收集下相；4)取步骤3)所述下相超滤浓缩，即得到鸡传染性支气管炎卵黄抗体浓缩液。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：高华义，李亚杰，杨保收，付旭彬，梁武，
申请(专利权)人：天津瑞普生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12