本发明专利技术公开了含有下述重量配比的原料药在制备促使胚胎干细胞向雌性生殖细胞分化的诱导液中的用途：熟地18-30份、山茱萸9-12份、山药8-16份、枸杞子9-12份、菟丝子8-16份、鹿角胶8-16份、杜仲1-16份、肉桂1-9份、当归1-16份、制附子1-16份。本发明专利技术还公开了促使胚胎干细胞向雌性生殖细胞分化的诱导液。本发明专利技术诱导液可以诱导胚胎干细胞向雌性生殖细胞分化，临床应用前景良好。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种中药复方药物组合物的新用途，具体地，是在制备促进胚胎干细 胞向雌性生殖细胞分化的诱导液中的用途。
技术介绍
近年来，由于环境污染严重、工作压力加大、饮食习惯改变、生殖系统疾病等因素 对正常受孕造成不利影响，不孕症患者数量呈上升势头，发病率约为12. 5%~15%，且有 逐年增加趋势。因此世界卫生组织（WHO)宣布将不孕症与必血管病、肿瘤并列为当今影响 人类生活和健康的H大主要疾病。自1978年全球首例试管婴儿诞生W来，W体外授精-胚 胎移植（IVF-ET)为代表的辅助生殖技术（ART)的引入给不孕不育症的成功治疗提供了更 大的可能。助孕的相关研究对于解决不孕不育患者的实际问题具有现实的意义。 体外受精（IV巧是指哺乳动物的精子和卵在体外人工控制的环境中完成受精过 程的技术。获取合格的卵和精子，是体外受精的基础，目前，体外受精包括促排卵、卵泡检 测与取卵、精子的优选与处理和体外受精步骤。诱发多个卵泡发育的促排卵是不孕治疗的 重要基础，此环节早时使用自然周期排卵，但每一自然周期一般仅有一个卵泡成熟，提供卵 少，导致实施W后步骤困难，且妊娠率低，现已被超排卵技术所取代。然而，超排卵技术是指 应用人类促性腺激素促进更多卵泡成熟排卵的一种技术，由于此过程多个同时发育，雌二 醇增加，引起反馈性的黄体生成素（LH)峰出现，导致卵早熟，质量差，妊娠率低，而且因药 物过度使用引起的并发症，如卵巢过度刺激综合征（0服S)、多胎妊娠、出生缺陷和表遗传学 修饰异常等。因此，急需寻找其他合适的方法，制备生殖细胞。 同时，对于因机能衰退，体内无法发育得成熟生殖细胞的人群，如，绝经妇女，更需 要寻找一种体外制备生殖细胞的方法。 右归丸出自明代温补名家张景岳的《景岳全书?新方八阵》，为补益肾阴、肾阳的经 典方，具有调经、助孕、促卵泡发育及排卵、提高卵细胞质量W及提高卵受精率、促进早期胚 胎发育的作用。 胚胎干细胞，简称ES、邸或ESC细胞，是早期胚胎（原肠胚期之前）或原始性腺中 分离出来的一类细胞。目前，未见右归丸影响胚胎干细胞向生殖细胞分化的报道。
技术实现思路
本专利技术的技术方案是提供了一种中药复方药物组合物的新用途。具体地，是在制 备促使干细胞向雌性生殖细胞分化的诱导液中的用途。 本专利技术含有下述重量配比的原料药在制备促使胚胎干细胞向雌性生殖细胞分化 的诱导液中的用途：熟地18-30份、山莱英9-12份、山药8-16份、构杞子9-12份、寃丝子 8-16份、鹿角胶8-16份、杜仲1-16份、肉桂1-9份、当归1-16份、制附子1-16份。[000引优选地，所述原料药的重量配比如下；熟地24份、山莱英9-12份、山药12份、构杞 子9-12份、寃丝子12份、鹿角胶12份、杜仲12份、肉桂6份、当归9份、制附子6份。 进一步优选地，所述原料药的重量配比如下；熟地24份、山莱英9份、山药12份、 构杞子9份、寃丝子12份、鹿角胶12份、杜仲12份、肉桂6份、当归9份、制附子6份。 本专利技术促使胚胎干细胞向雌性生殖细胞分化的诱导液，它W常用细胞培养基为基 础培养基，添加含药血清，其终浓度为2~20% (v/v); 所述含药血清按照如下方法制备： (1)按照前述配比取原料药，制备成为超细粉，W5.Og/kg的剂量施用于鼠，施用 方式为口服给药； 似给药30min、60min、90min后，眼底静脉丛取血，分别静置、离必得上清液，混 匀，过滤除菌，即可。 常用细胞培养基，是指包含供给细胞营养和促使细胞增殖的基础物质的培养基， 女口，a-MEM培养基（又叫MEM培养基，MinimumEssentialMedium)、DMEM-高糖培养基、 DMEM-低糖培养基、RPMI-1640培养基、DMEM/F12培养基或M-199培养基。 所述含药血清的终浓度为4. 5~5% (v/v)。 所述常用细胞培养基为a-MEM培养基、DMEM-高糖培养基、DMEM-低糖培养基、 RPMI-1640培养基、DMEM/F12培养基或M-199培养基。 所述诱导液中还添加有终浓度为10~20% (v/v)的胎牛血清和/或1% (v/v) 青链霉素。 青链霉素；即青霉素和链霉素的混合液，其中，青霉素的含量为lOOOOU/ml，链霉 素的含量为lOmg/ml。 本专利技术提供了一种促使胚胎干细胞向雌性生殖细胞分化的方法，步骤如下；取胚 胎干细胞，置于前述的诱导液中培养至少3天，即可。 本专利技术补肾中药复方右归丸可W上调胚胎干细胞中与雌性生殖细胞相关的基因 表达，促进其向雌性生殖细胞分化，为雌性生殖细胞的体外构建提供了新方法，临床应用前 景良好。 显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离 本专利技术上述基本技术思想前提下，还可W做出其它多种形式的修改、替换或变更。 W下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于W下的实例。凡基于本专利技术上述内容 所实现的技术均属于本专利技术的范围。【附图说明】 图1未分化的MESC-1B10的生长 图2MESC-1B10的邸形成 图3ZGW-RS对贴壁的邸的形态学影响 图4YGW-RS对贴壁的邸的形态学影响 图5RBS对贴壁的邸的形态学影响【具体实施方式】 实施例1本专利技术诱导液的制备I、含药血清的制备 SD大鼠，清洁级，6~8周龄，体重220~250g，竿巧兼用，各15只，许可证号： SCXK(川）2004-15 ;四川省医学科学院实验动物研究所提供。动物饲养于清洁级动物室，温 度22±2°C，湿度40~70%，1化/14h明暗交替，每3min自动换气一次，常规全价颗粒饲料 喂养，自由饮水，竿(S'分开饲养于不镑钢饲养笼内。 对小鼠灌服药物组合物（熟地30g、山莱英12g、山药16g、构杞子12g、寃丝子16g、 鹿角胶16g、杜仲16g、肉桂9g、当归16g、制附子16g)，给药剂量为5.Og/kg，给药容量均为 20ml/kg，空白组大鼠灌服蒸傭水。分别于给药后30min、60min、90min眼底静脉丛取血，血 液静置2小时后，300化pm离必lOmin，分离各组各不同时间段血清，将每组H个时间段的血 清混匀，过滤除菌，即得本专利技术含药血清。 2、诱导液的制备将步骤1制得的含药血清加入a-MEM培养基中，至其终浓度为2 % (v/v)，即可。 实施例2本专利技术诱导液的制备 1、含药血清的制备 SD大鼠，清洁级，6~8周龄，体重220~250g，竿易兼用，各15只，许可证号： SCXK(川）2004-15 ;四川省医学科学院实验动物研究所提供。动物饲养于清洁级动物室，温 度22±2°C，湿度40~70%，1化/14h明暗交替，每3min自动换气一次，常规全价颗粒饲料 喂养，自由饮水，竿分开饲养于不镑钢饲养笼内。 对小鼠灌服药物组合物（熟地18g、山莱英9g、山药8g、构杞子9g、寃丝子8g、鹿角 胶8g、杜仲Ig、肉桂Ig、当归Ig、制附子Ig)，给药剂量为5.Og/kg，给药容量均为20ml/kg， 空白组大鼠灌服蒸傭水。分别于给药后30min、60min、90min眼底静脉丛取血，血液静置2 小时后，3本文档来自技高网...
【技术保护点】
含有下述重量配比的原料药在制备促使胚胎干细胞向雌性生殖细胞分化的诱导液中的用途：熟地18‑30份、山茱萸9‑12份、山药8‑16份、枸杞子9‑12份、菟丝子8‑16份、鹿角胶8‑16份、杜仲1‑16份、肉桂1‑9份、当归1‑16份、制附子1‑16份。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陆华，万谦，刘志斌，
申请(专利权)人：成都中医药大学，
类型：发明
国别省市：四川;51
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。