抗肝纤维化青霉呋喃酮A化合物及其药物组合物和应用制造技术

由结构式(1)所示的青霉呋喃酮A(Penicilfuranone A)或其药用盐，以其为有效成分和至少一种药学上可接受的载体组成的药物组合物，其制备方法，以及其在制备预防或治疗肝纤维化药物中的应用。青霉呋喃酮A为化学结构新颖的呋喃聚酮类化合物，具有显著的体外抗肝纤维化活性，化学结构新颖，活性强，作为抗肝纤维化药物有较多优势。

【技术实现步骤摘要】
抗肝纤维化青霉呋喃酮A化合物及其药物组合物和应用
：本专利技术属于药物
，具体地说，涉及具有抗肝纤维化活性的呋喃酮聚酮类活性化合物PenicilfuranoneA及其制备方法，以该化合物为活性成分的药物组合物，以及其在制备治疗肝纤维化疾病的药物中的应用。
技术介绍
：呋喃酮类聚酮类化合物是一类有真菌产生的次生代谢产物，目前见报道于真菌Aspergillusrugulosus,Cephalosporiumgregatum,以及Penicilliumdaleae的次生代谢产物中。迄今为止，文献报道的呋喃聚酮类化合物不足20个化合物，且其分子量皆为300左右。前人研究表明该类化合物具有抗菌，致植物枯萎，抑制哺乳动物Y族DNA酶等作用。本专利技术化合物结构新颖，分子量为486，与之前报道的该类化合物，结构完全不一样。迄今为止，现有技术中尚未见有本专利技术的结构新颖的呋喃酮聚酮类化合物被报道，同时也未见任何文献报道该类呋喃酮类化合物具有抗肝纤维化活性的研究。
技术实现思路
：本专利技术目的在于提供从内生真菌Penicilliumdaleae中分离得到的呋喃聚酮类化合物A，其制备方法，在药物中特别是在抗肝纤维化药物中的应用。为了实现本明的上述目的，本专利技术提供了如下的技术方案：下述结构式(I)所示的青霉呋喃酮A化合物或其药学上可接受的盐，药物组合物，其包含所述的青霉呋喃酮A化合物或其药学上可接受的盐和至少一种药学上可接受的载体和/或稀释剂。根据所述的青霉呋喃酮A化合物或其药学上可接受的盐，其中所述的药学上可接受的盐为盐酸盐、氢溴酸盐、硝酸盐、硫酸盐、磷酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、甲酸盐、乙酸盐、乙二酸盐。本专利技术同时提供了青霉呋喃酮A化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，取青霉呋喃酮APenicilliumdaleae发酵物，用有机溶剂提取，浓缩得浸膏，分别用乙酸乙酯萃取，硅胶层析柱，制备型高效液相色谱等方法得结构式(I)化合物。更具体的制备方法如下：取Penicilliumdaleae菌丝体接种于灭菌马铃薯葡萄糖培养液中PDA，于室温下以170转每分钟在摇床中震荡五天，做成种子液，将种子液转接到灭菌的大米培养基中，28℃条件下无菌培养40天，用乙酸乙酯提取利用大米培养基培养40天后的菌丝体，共提取四次，得到乙酸乙酯提取物，利用硅胶柱色谱，高效液相色谱质谱联用，制备型高效液相色谱处理乙酸乙酯提取物，最后得到青霉呋喃酮A，其制备液相色谱条件为：12mL/min,UVλmax230nm,MeCN-H2O45:55，保留时间15.0min。上述制备方法中，青霉呋喃酮A化合物可进一步与适当的酸成盐，适当的酸选自盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸、酒石酸、柠檬酸、甲酸、乙酸、乙二酸或其他适合的有机酸或无机酸。本专利技术还提供了所述的青霉呋喃酮A化合物或药物组合物在制备抗肝纤维化的药物中的应用。本专利技术的药物组合物，能作为适宜口服或注射给药的制剂形式。其中所述的口服给药的制剂形式为片剂、缓释片、控释片、锭剂、硬或软胶囊、滴丸、微丸、水性或油混悬剂、乳剂、可分散的散剂或颗粒剂、口服溶液、糖浆剂或酏剂，所述的注射给药的制剂形式为灭菌的水性或油性溶液、无菌粉末、脂质体、乳剂、微乳剂、纳米乳剂或微囊。本专利技术化合物青霉呋喃酮A结构新颖，分子量为486，与之前报道的该类化合物结构完全不一样，且具有明显的抗肝纤维化活性，其机制与阻断TGF-β1刺激肝星状细胞的过度激活和细胞外基质的形成能力有关，在低于32μM的浓度下，PenicilfuranoneA未见明显的肝细胞毒性。附图说明：图1为本专利技术PenicilfuranoneA的结构示意图；图2为本专利技术PenicilfuranoneA的X-单晶衍射结构示意图；图3为本专利技术PenicilfuranoneA对正常人肝脏细胞生长活力的影响(MTT法；处理48h)；图4为本专利技术PenicilfuranoneA抑制TGF-β1诱导下，肝星状细胞纤维化形成相关蛋白的表达(westernblot法；A为大鼠T6肝星状细胞株，B为人LX-2肝星状细胞株)。具体实施方式：下面结合附图，用本专利技术的实施例来进一步说明本专利技术的实质性内容，但并不以此来限定本专利技术。实施例1：化合物PenicilfuranoneA的制备：分离流程：取少量Penicilliumdaleae菌丝体接种于1000ml灭菌马铃薯葡萄糖培养液中(PDA)，于室温下以170转每分钟在摇床中震荡五天，做成种子液。将种子液转接到2.0公斤灭菌的大米培养基中，25度条件下，无菌培养35天。用乙酸乙酯5L提取利用大米培养基培养35天后的菌丝体，共提取五次，每次5L，得到乙酸乙酯提取物18g。利用硅胶柱色谱，高效液相色谱质谱联用，制备型高效液相色谱处理18g的乙酸乙酯提取物，最后得到PenicilfuranoneA12mg，其制备液相色谱条件为：12mL/min,UVλmax230nm,MeCN-H2O45:55，保留时间15.0min。实施例2：PenicilfuranoneA结构解析：化合物PenicilfuranoneA，金色针状晶体，[α]22D–6(c0.2,MeOH)。ESI-MS谱给出准分子离子峰为m/z509[M+Na]+，结合高分辨正离子HR-ESI-MS(m/z[M+Na]+509.1792，计算值为C26H30O9Na,509.1782)和13CNMR、DEPT谱提供的信息，确定其分子式为C26H30O9，不饱和度为12。UV光谱在196(4.5),222(4.6),359(4.0),495(2.6)nm处有吸收，说明分子中存在大共轭基团。分析1H和13CNMR谱(表1)，再结合HSQC，HMBC，1H-1HCOSY，以及ROESY谱表明得到化合物PenicilfuranoneA的结构。最后，通过X-单晶衍射分析进一步证实了以上分析，并确定了其立体构型(图2)。PenicilfuranoneA的X-单晶衍射数据已经上传到应该剑桥大学单晶数据库www.ccdc.cam.ac.uk，其登记号为：CCDC1042018。表1.PenicilfuranoneA的NMR波谱数据(δinppm,JinHz)a测试于600MHz仪器，溶剂为DMSO-d6.b测试于600MHz仪器，溶剂为acetone-d6.实施例3：PenicilfuranoneA对正常人肝细胞的毒性检测：正常人肝脏细胞(L-02细胞株)购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心；RPMI1640培养基为Hyclone公司产品；胎牛血清为Gibco公司产品；二甲基亚砜(DMSO)和噻唑蓝(MTT)为sigma公司产品；全自动酶标仪(美国，Thermo公司)；恒温CO2培养箱(美国，Thermo公司)；正常人肝细胞L-02细胞株用RPMI1640培养基(含10％灭活胎牛血清，100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素)于37℃、饱和空气湿度、含5％CO2的培养箱内常规传代培养。取指数生长期L-02细胞株，1000×g离心5min，弃去上清液，用相应的培养基打匀，制成细胞悬液，计数后稀释成浓度为3×104个细胞/mL的细胞悬液，接种于96孔板，每孔200μL，置于细胞培养箱24h后给药，分别设置细本文档来自技高网...

【技术保护点】
下述结构式(I)所示的青霉呋喃酮A化合物或其药学上可接受的盐，

【技术特征摘要】
1.下述结构式(I)所示的青霉呋喃酮A化合物或其药学上可接受的盐，2.权利要求1所述的青霉呋喃酮A化合物的制备方法，其特征在于包括取青霉呋喃酮APenicilliumdaleae菌丝体接种于灭菌马铃薯葡萄糖培养液中，于室温下以170转每分钟在摇床中震荡五天，做成种子液，将种子液转接到灭菌的大米培养基中，28℃条件下无菌培养40天，用乙酸乙酯提取利用大米培养基培养40天后的菌丝体，共提取四次，得到乙酸乙酯提取物，利用硅胶柱色谱，高效液相色谱质谱联用，制备型高效液相色谱处理乙酸乙酯提取物，最后得到青霉呋喃酮A，其制备液相色谱条件为：12mL/min,UVλmax230nm,MeCN-H2...

【专利技术属性】
技术研发人员：普建新，汪伟光，李傲，杜雪，孙汉董，
申请(专利权)人：中国科学院昆明植物研究所，重庆理工大学，
类型：发明
国别省市：云南;53