本发明专利技术提供了一种PRRT2蛋白相关的抗原表位肽及其应用，具体的本发明专利技术提供了一种抗原表位肽，所述抗原表位肽源自PRRT2蛋白，并且所述抗原表位肽的氨基酸长度为100-200个氨基酸。实验结果表明，使用该抗原表位肽免疫动物，能够制备出对PRRT2特异性强、灵敏度高的抗PRRT2抗体。而且该抗体对检测方法的适用性广，可用于western blot分析、细胞免疫荧光检测、组织免疫荧光检测和免疫共沉淀(IP)分析等。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体地说，本专利技术涉及一种PRRT2蛋白相关的抗原表 位肽及其应用。
技术介绍
PRRT2(proline_richtransmembraneprotein)为富含脑氨酸的跨膜蛋白，在人 类已发现了 3个PRRT2蛋白亚型（isoform1、isoform2和isoform3)，其编码基因定位于 16号染色体上（16pl1. 2)。最近的研究表明，PRRT2基因突变与运动诱发性运动障碍（PKD)、 良性家族性婴儿癫痫症（BFIE)和婴儿惊厥伴发作性手足舞蹈徐动征（ICCA)等多种运动障 碍疾病的发病相关，提示PRRT2突变是多种运动障碍疾病共同的致病因素之一。 目前，已经出现了商业化的PRRT2抗体，但这些商品化的抗体基本都只适用于单 一的检测方法，如PRRT2的westernblot检测，而且其识别抗原的特异性不强。此外，PRRT2 基因的突变会导致运动障碍等相关的疾病。现有的商品化PRRT2抗体大多只能检测正常的 PRRT2蛋白，不能检测突变的PRRT2蛋白，因此，这类抗体无法用于疾病发病机理研究。 由于没有高质量的同时可以检测正常和突变PRRT2的抗体，人们无法在蛋白水平 上系统研究PRRT2在组织中的分布、表达规律、亚细胞定位及其与其他蛋白的相互作用，因 而无法揭示PRRT2基因突变导致运动障碍的致病机理。因此，制备灵敏度高、特异性强、同 时可检测正常和突变PRRT2的PRRT2抗体是此类运动障碍疾病发病机理研究工作中亟待解 决的关键技术问题之一。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种制备PRRT2抗体的技术，通过该技术制备的PRRT2抗体 适用于组织、细胞中PRRT2的检测，特别适合针对由PRRT2基因突变导致的人神经系统疾病 的致病机理的研究。 本专利技术的第一方面，提供了一种抗原表位肽，所述抗原表位肽源自PRRT2蛋白，并 且所述抗原表位肽的氨基酸长度为100-200个氨基酸。 在另一优选例中，所述的抗原表位肽的氨基酸序列选自下组： (A)具有SEQIDN0:4或6所示氨基酸序列的多肽； (B)具有与SEQIDN0:4或6中任一所示氨基酸序列彡80%同源性（优选地， 彡90%的同源性；等优选地彡95%的同源性；最优选地，彡97%的同源性）的多肽，且所述 多肽具有与抗PRRT2蛋白抗体的结合能力； (C)将SEQIDN0:4或6中任一所示氨基酸序列经过1-5个氨基酸残基的取代、缺 失或添加而形成的，且保留与抗PRRT2蛋白抗体的结合能力的衍生多肽。 在另一优选例中，所述PRRT2蛋白为哺乳动物的PRRT2蛋白（包括人）。 本专利技术的第二方面，提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白含有本专利技术第一方面所 述的抗原肽和任选的标签序列。 在另一优选例中，所述标签序列选自：GST标签序列、FLAG标签序列、HIS标签序 列、MYC标签序列。 本专利技术的第三方面，提供了一种抗体，所述抗体特异性的结合本专利技术第一方面所 述的抗原表位肽或本专利技术第二方面所述的融合蛋白，并且所述抗体能够特异性地结合天然 的PRRT2蛋白和突变的PRRT2蛋白。 在另一优选例中，所述天然的PRRT2蛋白氨基酸序列如SEQIDNO. : 1所示。 在另一优选例中，所述突变的PRRT2蛋白氨基酸序列如SEQIDN0. : 10所示。 在另一优选例中，所述抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体或抗血清。 本专利技术的第四方面，提供了一种分离的多核苷酸，它编码本专利技术第一方面所述的 抗原肽或本专利技术第二方面所述的融合蛋白或本专利技术第三方面所述的抗体。 本专利技术的第五方面，提供了一种表达载体，所述表达载体含有本专利技术第四方面所 述的多核苷酸。 本专利技术的第六方面，提供了一种宿主细胞，所述的宿主细胞含有本专利技术第五方面 所述的表达载体，或者在基因组中整合有本专利技术第四方面所述的多核苷酸。 本专利技术的第七方面，提供了一种药物组合物，所述的组合物含有本专利技术第一方面 所述的抗原表位肽、本专利技术第二方面所述的融合蛋白、本专利技术第三方面所述的抗体、本专利技术 第四方面所述的多核苷酸、本专利技术第五方面所述的表达载体或者本专利技术第六方面所述的宿 主细胞，以及药学上可接受的载体和/或辅料。 在另一优选例中，所述药物组合物包括疫苗组合物。 本专利技术的第八方面，提供了本专利技术第一方面所述的抗原表位肽、本专利技术第二方面 所述的融合蛋白、本专利技术第三方面所述的抗体、本专利技术第四方面所述的多核苷酸、本专利技术第 五方面所述的表达载体或者本专利技术第六方面所述的宿主细胞的用途， (a)用于制备针对所述PRRT2蛋白的抗体；和/或 (b)用于制备治疗与所述PRRT2蛋白相关的疾病的药物。 在另一优选例中，所述疾病包括发作性运动诱发性运动障碍（PKD)、良性家族性婴 儿癫痫症（BFIE)和婴儿惊厥伴发作性手足舞蹈徐动征（ICCA)。 本专利技术的第九方面，提供了本专利技术第三方面所述的抗体的用途，用于 (1)PRRT2蛋白的分离纯化；或 (2)非诊断目的PRRT2蛋白的检测；或 (3)制备检测PRRT2蛋白的试剂或试剂盒。 在另一优选例中，所述PRRT2蛋白包括天然PRRT2蛋白和/或突变的PRRT2蛋白。 本专利技术的第十方面，提供了一种制备抗PRRT2蛋白抗体的方法，包括步骤： (1)使用本专利技术的本专利技术第一方面所述的抗原表位肽或本专利技术第二方面所述的融 合蛋白作为抗原免疫动物，并在动物体内产生抗PRRT2蛋白的抗体； (2)分离纯化所述抗PRRT2蛋白的抗体。 在另一优选例中，所述动物为哺乳动物。 在另一优选例中，所述动物包括人、鼠、兔、牛或羊。 应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文（如实施例）中具 体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。【附图说明】 图1显示了实施1中所制备的抗原肽电泳结果。 图2显示了以人流产胎儿脑组织为材料，通过WesternBlot实验，检测本抗体对 组织中PRRT2的检测效果；其中图2A为实施例中所用的脑组织图片以及3个不同部位的检 测结果，图2B为对照抗体的检测结果。 图3显示了以流产胎儿的脑组织为材料，通过IP实验，检测抗体在IP实验中的应 用效果；图3A为本专利技术抗体的检测结果，图3B为对照抗体的检测结果。 图4免疫荧光染色实验的检测结果，其中图4A显示了体外过表达PRRT2_flag蛋 白，通过免疫荧光染色实验，检测本专利技术抗体的特异性，图4B显示了对照抗体检测神经前 体细胞的免疫荧光结果，图4C显示了本专利技术抗体检测神经前体细胞的免疫荧光结果。【具体实施方式】 本专利技术人通过广泛而深入的研究，获得一种源于PRRT2的抗原表位，实验结果表 明，使用包含该抗原表位的多肽免疫动物，能够制备出对PRRT2特异性强、灵敏度度高的抗 PRRT2抗体。而且该抗体对检测方法的适用性广，可用于westernblot分析、细胞免疫突光 检测、组织免疫荧光检测和免疫共沉淀（IP)分析等。 术语 PRRT PRRT家族包括PRRT1、PRRT2、PRRT3、PRRT4，其中PRRT2 (proline-rich transmembraneprotein2)包含4个外显子，共3794bp，编码一个由340个氨基酸组成的跨 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗原表位肽，其特征在于，所述抗原表位肽源自PRRT2蛋白，并且所述抗原表位肽的氨基酸长度为100‑200个氨基酸；优选地，所述的抗原表位肽的氨基酸序列选自下组：(A)具有SEQ ID NO:4或6所示氨基酸序列的多肽；(B)具有与SEQ ID NO:4或6中任一所示氨基酸序列≥80％同源性(优选地，≥90％的同源性；等优选地≥95％的同源性；最优选地，≥97％的同源性)的多肽，且所述多肽具有与抗PRRT2蛋白抗体的结合能力；(C)将SEQ ID NO:4或6中任一所示氨基酸序列经过1‑5个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且保留与抗PRRT2蛋白抗体的结合能力的衍生多肽。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：金颖，李春，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：上海;31
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。