一种与高邮鸭体重、胸腿肌重和胸肌肌纤维性状相关的分子标记、其获取方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种与高邮鸭体重、胸腿肌重和胸肌肌纤维性状相关的分子标记及其获取方法和应用，所述分子标记位于SEQ ID NO:1所示核苷酸的第190位，该位点的核苷酸为G或T。PCR扩增高邮鸭基因组DNA，扩增产物经连接酶检测反应后测序，通过序列分析获取与高邮鸭体重、胸腿肌重和胸肌肌纤维性状相关的分子标记。该分子标记在筛选高邮鸭体重、胸腿肌重及胸肌肌纤维性状中应用，可以用于家系选育中的早期选择，在选配中提供分子依据，以提高高邮鸭上市时的体重，增加经济效益。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于家禽基因工程的
，更具体地，涉及一种与高邮鸭体重、胸腿肌 重和胸肌肌纤维性状相关的分子标记、其获取方法及应用。
技术介绍
胰岛素增长因子-l(IGF-l)属胰岛素家族成员，是动物生长轴的重要基因之一， 具有促进细胞增殖和个体发育的功能。IGF-1可通过靶器官上的IGFs受体，促进蛋白合成， 肌肉干细胞增殖、成肌细胞分化及肌管融合等，从而促进骨骼肌的发育。试验发现，在鸭胚 胎期，蛋内注射外源IGF-1可以显著提高出雏后鸭的体重和胸肌重，说明IGF-I对雏鸭的生 长具有促进作用。 单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP)，主要是指在基因组水 平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。SNP作为第三代分子标记，具有数量 多、分布广、代表性强和遗传稳定性好等特点。目前已经在动植物的遗传多样性分析、基因 作图、分子标记辅助育种和功能基因学的研究中得到了广泛的应用。结合PCR技术、电泳、 荧光灯方法的SNP检测方法，在动植物遗传育种中起到重要作用。高邮鸭是全国三大名鸭 之一，生长发育快，肉质好，属于肉蛋兼用型地方品种。在育种工作中，与改变个体遗传特性 (人工诱变）相比较，改变品种遗传结构相对容易。而现有技术中尚未发现与与高邮鸭体 重、胸腿肌重和胸肌肌纤维性状相关的分子标记与应用。
技术实现思路
为了解决现有技术存在的不足，本专利技术提供了一种与高邮鸭体重、胸腿肌重和胸 肌肌纤维性状相关的分子标记、其获得方法及应用。 本专利技术提供了一种与高邮鸭体重、胸腿肌重和胸肌肌纤维性状相关的分子标记， 所述分子标记位于SEQ ID NO: 1所示核苷酸的第190位，该位点的核苷酸为G或T。 本专利技术还提供了一种获取与高邮鸭体重、胸腿肌重和胸肌肌纤维性状相关的分子 标记的方法，PCR扩增高邮鸭基因组DNA，扩增产物经连接酶检测反应后测序，通过序列分 析获取与高邮鸭体重、胸腿肌重和胸肌肌纤维性状相关的分子标记。 其中，PCR扩增所用引物对序列如SEQ ID N0:2和SEQ ID N0:3所示。 其中，连接酶检测反应所用探针序列如SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5和SEQ ID N0:6 所示。 其中，连接酶检测反应产物长度170bp的为基因型GG，连接酶检测反应产物长度 172bp的为基因型TT，连接酶检测反应产物长度170bp和172bp的为基因型GT。 本专利技术还提供了一种与高邮鸭体重、胸腿肌重和胸肌肌纤维性状相关的分子标记 在筛选高邮鸭体重、胸腿肌重及胸肌肌纤维性状中的应用。 本专利技术的有益效果：本专利技术提供了一种与高邮鸭体重、胸腿肌重及胸肌肌纤维性 状相关的分子标记，针对该分子标记位点的单核苷酸多态性，设计特定的引物扩增包含SNP 位点的基因片段，然后进行连接酶检测反应，测序分析，能够简单、快速、成本低、精确的检 测其单核苷酸的多态性。对上述分子位点的基因型与高邮鸭70日龄体重、胸腿肌重和胸肌 肌纤维性状进行关联分析，可以用于家系选育中的早期选择，在选配中提供分子依据，以提 高高邮鸭上市时的体重，增加经济效益。【附图说明】 图1是ABI3730型基因分析仪检测与Genemapper分析结果。【具体实施方式】 下面结合实施例对本专利技术进行详细地解释说明。 本专利技术的与高邮鸭体重、胸腿肌重和胸肌肌纤维性状相关的分子标记，所述分子 标记位于SEQ ID NO: 1所示核苷酸的第190位，该位点的核苷酸为G或T，导致该基因位点 的单核苷酸多态性。PCR扩增得到与高邮鸭体重、胸腿肌重和胸肌肌纤维性状相关的分子标 记，其核苷酸序列为鸭IGF-1的部分基因组序列，序列如SEQ ID NO: 1所示。该序列中的第 190bp处有一个G190-T190的突变，导致该位点的单核苷酸多态性。 针对上述位点的单核苷酸多态性，本专利技术还公开了其获取的方法，其中用于扩增 所述IGF-1基因和检测该基因位点突变的正反向引物对序列如SEQ ID N0:2-3所示。 其中用于对上述扩增产物进行连接酶检测反应（LDR)，所需的LDR探针序列如SEQ ID NO :4-6 所示。 本专利技术的与高邮鸭体重、胸腿肌重和胸肌肌纤维性状相关的分子标记用于筛选高 邮鸭体重、胸腿肌重和胸肌肌纤维性状。 本专利技术的获取与高邮鸭体重、胸腿肌重和胸肌肌纤维性状相关的分子标记的方 法，包括以下步骤： 1、鸭血样的采集 本专利技术的试验鸭来自江苏省高邮鸭集团，在相同的日粮水平下饲喂的同日龄高邮 鸭和金定鸭种鸭群。采用一次性注射器从鸭翅下静脉中抽取lml血液，注入经高压灭菌并 装有200 μ 1 2%无菌的乙二胺四乙酸（EDTA)抗凝剂的1. 5ml离心管中，轻轻摇勾，记录翅 号，-80 °C保存备用。 2、DNA 的提取 基因组DNA的抽提采用苯酚-氯仿抽提法 (1)取上述全血30 μ 1置于1.5ml离心管，分别加入470 μ 1 1XSET缓冲液、 12. 5 μ 1 20% SDS (十二烷基硫酸钠）和6 μ 1的10mg/ml蛋白酶Κ，混合均匀后放于55°C 水浴过夜； (2)取出样本于1. 5ml离心管，加入500 μ 1饱和苯酚，轻摇20min，lOOOOrpm离心 10min ； (3)取上清，再次加入500 μ 1饱和苯酚，轻摇20min，lOOOOrpm离心10min ; (4)取上清，加入500 μ 1氯仿-异戊醇（23 :1)轻摇20min，lOOOOrpm离心10min ; (5)取上清，加入lml冰无水乙醇（-20°C )，来回摇摆以沉淀DNA，lOOOOrpm离心 lOmin后倒出乙醇； (6)用1ml 75%乙醇清洗DNA -次，倒掉乙醇，置于50°C干燥箱内烘干； (7)待DNA完全干燥后加入300 μ 1灭菌后的双蒸水溶解，50°C水浴锅中过夜以溶 解DNA ;将DNA原液1 :100稀释并进行分光光度计检测浓度，0D值为1. 85-1. 94。 (8)将DNA浓度稀释到50ng/ μ 1，存放于-20°c冰箱中保存备用。 3、PCR 扩增 扩增包含G190T位点的片段：根据GenBank的鸭IGF-1基因（NW_004677293)全序 列设计包含该位点的正反向引物，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。以上述高 邮鸭基因组为模板，在包含待测位点序列的正反向引物、Taq DNA聚合酶、缓冲环境、dNTPs 存在的情况下，在PCR反应条件下进行扩增，PCR产物大小为232bp，用于LDR反应。 所述引物对序列如下： 上游引物序列为：5'-TTGCATGGAGTGGATGTGAT-3'（SEQ ID NO :2); 下游引物序列为：5'-GCAGGAATAAGAGTGCCATGT-3'（SEQ ID NO :3) PCR扩增反应的具体步骤为： 1) PCR扩增反应体系准备：在200 μ 1的PCR薄壁管中，加入1 μ 1 DNA模板（50ng/ μ1)、2μ1 Bufer、0.6yl Mg2+(3mmol/L)、2yl dNTP(2mmol/L)、0.2yl Taq DNA 聚合酶 (5υ/μ1)、2μ1 Primer π?χ、12·2μ1 ddH20，共20μ1 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种与高邮鸭体重、胸腿肌重和胸肌肌纤维性状相关的分子标记，其特征在于，所述分子标记位于SEQ ID NO:1所示核苷酸的第190位，该位点的核苷酸为G或T。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：朱春红，陶志云，宋卫涛，徐文娟，李慧芳，刘宏祥，章双杰，姬改革，王晓峰，
申请(专利权)人：江苏省家禽科学研究所，
类型：发明
国别省市：江苏;32