一种鉴定或辅助鉴定猪达100kg体重日龄的方法及其专用试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种鉴定或辅助鉴定猪达100kg体重日龄的方法及其专用试剂盒。本发明专利技术的方法是检测猪个体的H19基因的第402位脱氧核糖核苷酸是C还是T还是C和T，以确定猪个体的基因型是TT还是CC还是TC，根据所述猪个体的基因型确定猪达100kg体重日龄大小：TT基因型的猪个体达100kg体重日龄多于CC基因型的猪个体，CC基因型的猪达100kg体重日龄多于TC基因型。通过试验证明：本发明专利技术用H19基因的第402位单核苷酸多态性鉴定猪达100kg体重日龄的方法与猪达100kg体重日龄的实际测定结果一致，对选择优良猪种有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程领域，具体涉及一种鉴定或辅助鉴定猪达100kg体重日龄的 方法及其专用试剂盒。
技术介绍
猪为六畜之首，养猪业在世界尤其是中国国民经济中占有重要地位。猪肉在诸多 肉类产品中的比重一直保持在三分之一左右，是人们比较喜爱的副食之一。人们的生活不 断改善，传统的养殖技术已经不能满足人们对猪肉的需求量。随着现代育种技术的发展，猪 的生产性能显著提高，猪的健康养殖和育肥就显得格外重要。 猪达100kg体重日龄是评估猪生长速度的重要指标，可以间接反映饲料利用率。 大量数据表明猪达l〇〇kg体重日龄的缩短，生长速度越快，可以减少猪场的生产成本，猪场 经济效应会明显提高。遗传力是数量性状的重要参数，根据遗传力的大小，可以预测遗传进 展，个体育种值。因此，如何有效的提高猪生长速度，缩短达100kg体重日龄，并提前做出判 断，是每个猪场经营者及育种学家追求的目标。 近十年来，分子生物技术的发展为猪的育种提供了一种基于DNA变异的新型遗传 标记。特别是分子标记辅助选择技术的出现，为显著改善猪的这些数量性状提供可能。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种鉴定或辅助鉴定猪达100kg体重日龄性状的方法。 本专利技术提供的鉴定或辅助鉴定猪达100kg体重日龄性状的方法是检测猪个体的 H19基因的第402位脱氧核糖核苷酸是T还是C还是T和C，以确定猪个体的基因型是TT基 因型还是CC基因型还是TC基因型，根据所述猪个体的基因型确定所述猪个体达100kg体 重日龄大小：TT基因型的猪个体达100kg体重日龄多于CC基因型的猪个体，CC基因型的猪 个体达100kg体重日龄多于TC基因型的猪个体； 所述CC基因型为H19基因自5'末端第402位脱氧核糖核苷酸为C的纯合体； 所述TC基因型为H19基因自5'末端第402位脱氧核糖核苷酸为T和C的杂合 体； 所述TT基因型为H19基因自5'末端第402位脱氧核糖核苷酸为T的纯合体； 所述H19基因的核苷酸序列如序列表中序列1所示。 上述方法中，所述检测猪个体的H19基因的第402位脱氧核糖核苷酸是T还是C 还是T和C的方法为如下A)或B): A)直接测序； B)用能够扩增含有猪H19基因的第402位脱氧核糖核苷酸的引物对扩增所述待测 猪的基因组DNA，得到PCR扩增产物，如果PCR扩增产物自5'末端起第402位的碱基均为 C，则所述猪的基因型为CC基因型，如果PCR扩增产物自5'末端起第402位的碱基为T和 C，则所述猪的基因型为AG基因型，如果PCR扩增产物自5'末端起第118位的碱基均为T， 则所述猪的基因型为ΤΤ基因型。 上述方法中，所述Β)包括如下步骤：所述扩增所用的引物对满足如下条件：以所 述猪个体的基因组DNA为模板进行PCR扩增的产物含有Η19基因的第402位脱氧核糖核苷 酸； 所述引物对为由序列表中序列2所示的单链DNA分子和序列表中序列3所示的单 链DNA分子组成的引物对。 本专利技术的另一个目的是提供一种鉴定或辅助鉴定猪达100kg体重日龄的试剂。 本专利技术提供的鉴定或辅助鉴定猪达100kg体重日龄的试剂是检测猪个体的H19基 因的的第402位脱氧核糖核苷酸是T还是C还是T和C的物质； 所述H19基因的核苷酸序列如序列表中序列1所示。 上述试剂中，所述物质为由序列表中序列2所示的单链DNA分子和序列表中序列 3所示的单链DNA分子组成的引物对。 本专利技术还有一个目的是提供一种鉴定或辅助鉴定猪达100kg体重日龄的试剂盒。 本专利技术提供的鉴定或辅助鉴定猪达100kg体重日龄的试剂盒含有上述试剂。 上述试剂或上述试剂盒在鉴定或辅助鉴定猪个体达100kg体重日龄中的应用也 属于本专利技术的保护范围。 上述试剂或上述试剂盒在制备鉴定或辅助鉴定猪个体达100kg体重日龄的产品 中的应用也属于本专利技术的保护范围。 上述方法或上述试剂或上述试剂盒在猪育种中的应用也属于本专利技术的保护范围。 上述方法或上述试剂或上述试剂盒在选育生长速度快和/或猪达100kg体重日龄 短的种猪中的应用也属于本专利技术的保护范围。 本专利技术的最后一个目的是提供一种选育生长速度快和/或猪达100kg体重日龄短 的种猪的方法。 本专利技术提供的选育生长速度快和/或猪达100kg体重日龄短的种猪的方法包括选 择TC基因型的猪进行育种；所述TC基因型为H19基因的第402位脱氧核糖核苷酸为TC的 杂合体； 所述H19基因的核苷酸序列如序列表中序列1所示。 本专利技术发现了猪H19基因的第一外显子的T402C位点对猪达100kg体重日龄有显 著影响，并基于该SNP位点提供了一种鉴定或辅助鉴定猪达100kg体重日龄的方法：基因型 为TT的猪个体达100kg体重日龄多于CC基因型的猪个体，CC基因型的猪个体达100kg体 重日龄多于TC基因型猪个体。通过试验证明：本专利技术用H19基因的第402位单核苷酸多态 性鉴定猪达l〇〇kg体重日龄的方法与猪达100kg体重日龄的实际测定结果一致，对选择优 良猪种有重要意义。【具体实施方式】 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。 下述实施例中的猪达100kg体重日龄为自猪出生日起至猪体重达到100kg的时 间。 实施例1、一种辅助鉴定猪达100kg体重日龄的方法 -、猪H19基因的SNP位点的筛选 1、猪耳组织样品DNA的提取 分别采集来自河北猪场的32头长白猪的血液样品，样品采集后，保存于75%酒精 中，并于-20°C保存。采用苯酚-氯仿抽提法提取血液样品的基因组DNA，具体步骤如下： (1)耳组织样的准备：剪取大小适中的耳组织样，用生理盐水冲洗掉表面的杂质 和血污，放于1. 5ml离心管中，用眼科剪剪碎，并向其中加入500uL的组织裂解液（北京百 泰科生物技术有限公司；产品编号：AU19011); (2)根据所剪取的耳组织样的大小，向离心管中加入15~25uL的蛋白酶 K(SIGMA-ALDRICH;产品编号：SRE0005); (3)放于水浴摇床上，55°C消化过夜，确保耳组织样消化完全，得到消化彻底的耳 组织； (4)将上述消化彻底的耳组织样于室温放置，加入等体积的Tris-饱和酚（江苏宝 莱生物科技有限公司），翻覆颠倒混勾5min ; (5) 14000rpm/min离心10min，离心管中会出现分层现象，上层为含有核酸的水 相，下层为含有其他杂质的有机相。 (6)利用微量移液器小心吸取上层含核酸的水相，放置于一个新的1. 5ml离心管 中（为了避免吸起下层的有机相，最好用去除尖头的蓝枪头），弃下层有机相； (7)重复步骤⑷~（6); (8)向含有水相的离心管中加入等体积的饱和酚：氯仿=1 :1，反复颠倒混匀 5min，14000rpm/min离心10min，然后吸取上层液体，放于一个新的1. 5mL离心管中； (9)重复步骤（8); (10)向其中加入饱和酚：氯仿：异戊醇的体积比为25 :24 :1，翻覆颠倒混匀， 14000rpm/min 离心 lOmin ; (11)吸除上层液体，加入2倍体积的无水乙醇（事先放于_20°C冰箱内预冷）沉 淀DNA，此时会在离心管内出现丝本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鉴定或辅助鉴定猪达100kg体重日龄性状的方法，是检测猪个体的H19基因的第402位脱氧核糖核苷酸是T还是C还是T和C，以确定猪个体的基因型是TT基因型还是CC基因型还是TC基因型，根据所述猪个体的基因型确定所述猪个体达100kg体重日龄大小：TT基因型的猪个体达100kg体重日龄多于CC基因型的猪个体，CC基因型的猪个体达100kg体重日龄多于TC基因型的猪个体；所述CC基因型为H19基因自5’末端第402位脱氧核糖核苷酸为C的纯合体；所述TC基因型为H19基因自5’末端第402位脱氧核糖核苷酸为T和C的杂合体；所述TT基因型为H19基因自5’末端第402位脱氧核糖核苷酸为T的纯合体；所述H19基因的核苷酸序列如序列表中序列1所示。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：唐中林，孙浩，李奎，梁如意，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11