小麦TaAGO4a基因CRISPR/Cas9载体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了小麦TaAGO4a基因的CRISPR-Cas9载体及其应用，属于作物分子生物学领域。本发明专利技术首先提供了特异性靶向TaAGO4a第三个外显子的gRNA，其DNA序列如SEQ ID NO.1所示，包含一个酶切位点XmnI，本发明专利技术接着提供了含有该gRNA的CRISPR-Cas9载体，通过共转化Cas9和该特异性gRNA到小麦原生质体中，利用酶切和测序技术，成功检测到该gRNA可以引导Cas9切割分别位于TaAGO4a染色体3A、3B和3D上的三个拷贝，从而引起该基因发生移码突变，致使其功能缺失或部分缺失，可用于制备TaAGO4a基因缺失的转基因小麦。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程和基因遗传修饰领域，具体地说，涉及小麦TaAG04a基因的 CRISPR/Cas9载体及其应用。
技术介绍
小麦作为一种重要的粮食作物，全世界有35%-40%的以小麦为主要粮食。同时 作为三大谷物之一，产量几乎全做食用，是世界上总产量仅次于玉米的粮食作物。随着分 子生物学技术的不断发展和对基因功能研究的逐步深入，表观遗传学如DNA甲基化、组蛋 白修饰等在修饰基因、调控基因表达进而控制重要农艺性状如千粒重、开花等，发挥重要作 用。AG04a是AGO大家族成员，通过介导sRNAs参与DNA甲基化路径，进而调控相关基因的 表达。AG04蛋白作为RdDM路径的核心组分不仅参PAMP (pathogen-associated molecular pattern)启动的基础抗性，同时参与抗病基因介导的小种专化抗性。最新研究则显示，拟南 芥接种细菌后，包括AG04、AG06在内的10个RdDM路径组分的表达均下调，这种基因表达下 调直接导致了一个受甲基化调控的NLR(N0D-like rec印tor)类抗病基因 RMG1的上调，进 而启动抗病反应。说明包括AG0本文档来自技高网...

【技术保护点】
特异性靶向小麦TaAGO4a基因第三外显子的gRNA，其特征在于，分别位于染色体3A、3B、3C上，其DNA序列包含一个酶切位点XmnI。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李爱丽，宋高原，耿帅锋，贾美玲，毛龙，
申请(专利权)人：中国农业科学院作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11