一种促生长合生元菌液的制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种促生长合生元的制备方法及应用，将一定配比的菊糖-黄芪多糖复合物加入到MRS培养基中，用微孔滤膜过滤、分离，收集滤液。将活化后的干酪乳杆菌接种在上述含有菊糖-黄芪多糖复合物的MRS培养基滤液中，并放置在37℃的厌氧培养箱静置培养，即得菊糖-黄芪多糖-干酪乳杆菌合生元菌液。将本发明专利技术合生元添加到全价饲料中，现喂现拌。菊糖和黄芪多糖能为肠道中的干酪乳杆菌提供营养并产生酸环境促进有益菌的增殖，三者相辅相成，对病原微生物有较强的抑制作用。能够耐受有机体的防御机制，能调节机体肠道保持健康的状态。具有较高的免疫活性，从而降低致病菌的数量，能够抑制治病类有害菌和外源性病菌的生存。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种动物添加剂，特别是一种促生长合生元的制备方法及应用，属于微生态调节剂。具体地说是干酪乳杆菌-菊糖-黄芪多糖合生元菌液的制备方法及应用。
技术介绍
动物在遭受疾病、断奶等外在或内在各种因素时，常造成免疫功能下降、肠道微生物菌群结构发生变化（有益菌群数量会减少，有害菌群数量增多），从而出现抵抗力低、腹泻，最终导致生产性能下降。抗生素及化学添加剂的使用在一段时间内确实起到了明显的促生长效应，但其药物残留、耐药性等问题随之而来。现如今，食品安全越来越受到消费者的重视，抗生素以及一些高残留的化学添加剂已经淡出规模养殖产业的视野，合生元作为新型绿色、无污染无残留的新型添加剂随即而生并迅速推广，倍受养殖者青睐。合生元是一种由益生菌（如乳酸菌、芽孢杆菌、光合细菌等）和益生元（如低聚糖、微藻等）按照一定的工艺配制而成的微生态活性物质。其作用的主要优势是，能促进有益微生物在肠道内的定殖与增殖，减少病源微生物在体内的数量，提高机体免疫力，促进营养物质的消化吸收。合生元能同时发挥益生菌、益生元自身固有的优质效应以及二者间的协同作用，以增强肠道的消化和抗菌能力，进而提高动物机体的生产性能。目前，合生元产品制备方法都是采用常规方法，即一种益生菌和一种益生元按照质量比直接组合而成，而采用两种益生元和益生菌组成合生元的制备方法还没有相应的研发。干酪乳杆菌是一类有益于机体健康的活性微生物食品原料，其与嗜酸乳杆菌和双歧杆菌并称“健康三益菌”，其多用于乳制品的发酵剂及辅助发酵剂。但目前我国对干酪乳杆菌的研究还不多，而干酪乳杆菌作为益生菌与益生元组成合生元的制备方法和应用则研究更少。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对上述问题，在考虑益生菌与益生元配合效果的基础上，提供一种由干酪乳杆菌和两种功能性糖组成的合生元，即干酪乳杆菌-菊糖-黄芪多糖合生元菌液的制备和应用方法。本专利技术原理：干酪乳杆菌是一种兼性厌氧型微生物，其发酵分解代谢多种糖产生的乳酸和其他有机酸对病原微生物（如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌以及沙门氏菌等）有较强的抑制作用。与其他益生菌相比，干酪乳杆菌能够耐受有机体的防御机制，包括口腔酶、胃酸和小肠的胆汁酸等，所以干酪乳杆菌进入人体后可以在肠道内大量存活。但单独的干酪乳杆菌菌体不能起到有效的抗菌作用，只有附植肠道粘膜，在一些益生元作用下增殖并产生代谢产物（主要是乳酸），才能有效的阻止肠道有害菌的附着和生长繁殖。菊糖是一种由多个果糖通过β-2,1糖苷键相连接而构成的多糖聚合物，常见于蒲公英、草木香的根部，其水解后能产生大量的葡萄糖和果糖。菊糖作为益生元，不易被胃消化是其最显著的特征之一，因此在动物日粮中添加菊糖几乎不能被胃和小肠内的消化酶分解，其顺利进入大肠，为干酪乳杆菌提高营养，以促进其增殖，因此菊糖常被用作益生菌的增殖剂。菊糖与低聚果糖一样能调节机体肠道保持健康的状态。黄芪多糖是中药黄芪的主要成分，其主要成分均为多糖，具有较高的免疫活性，常常被作为免疫促进剂应用在动物生产中。黄芪多糖代谢产物为短链脂肪酸，可降低肠道pH值。低的pH值一方面可以刺激肠道蠕动，从而降低致病菌的数量，另一方酸性环境有利于乳酸菌等有益菌的增殖，同时有益菌在增殖过程中产生过氧化氢、有机酸等具有抗菌活性的代谢产物，能够抑制治病类有害菌和外源性病菌的生存。菊糖和黄芪多糖可以为肠道中的干酪乳杆菌提供营养并产生酸环境促进有益菌的增殖，三者相辅相成，能够极大地发挥益生菌和益生元的互作作用。本专利技术提供的促生长合生元菌液的制备方法，其特征是包括以下步骤：1、将MRS培养基初始pH值控制在6.4~6.6之间，并经高压灭菌、冷却、静置；2、将菊糖所占质量比例25~35%、黄芪多糖所占质量比例65~75%的菊糖-黄芪多糖复合物以5~10g/L的浓度加入到MRS培养基中；然后，将MRS培养基经微孔滤膜过滤，分离，收集滤液；3、在无菌操作台下，将活化后的干酪乳杆菌按体积比1%~2%的接种量接种在上述含有菊糖-黄芪多糖复合物的MRS培养基的滤液中，分装，封口；4、将上述滤液以状态静置放置在37℃的厌氧培养箱中培养，培养时间为24~26h；配养后的黄色菌液，即为干酪乳杆菌-菊糖-黄芪多糖合生元菌液。本专利技术的积极效果：菊糖和黄芪多糖能为肠道中的干酪乳杆菌提供营养并产生酸环境促进有益菌的增殖，三者相辅相成，能够极大地发挥益生菌和益生元的互作作用。对病原微生物有较强的抑制作用。能够耐受有机体的防御机制，干酪乳杆菌进入人体后可以在肠道内大量存活并起到有效的抗菌作用。能调节机体肠道保持健康的状态。具有较高的免疫活性，从而降低致病菌的数量，能够抑制治病类有害菌和外源性病菌的生存。附图说明图1 是静置和摇床培养状态下干酪乳杆菌的生长曲线。图2 是不同培养时间干酪乳杆菌-菊糖-黄芪多糖合生元的生长曲线。具体实施方式实施例1：用1 mol/L的NaOH调节MRS培养基pH值，使其pH值为6.6。高温高压灭菌20分钟。将100mLMRS液体培养基装入150mL锥形瓶中，加入1g菊糖和黄芪多糖复合物，其中菊糖0.3g，黄芪多糖0.7g，然后用孔径为0.22μm微孔滤膜过滤，分离滤液。在无菌操作台下，将活化后的干酪乳杆菌按体积比2%的接种量接种在上述含有菊糖-黄芪多糖复合物的MRS培养基的滤液中，分装后封口。将上述含有干酪乳杆菌的滤液静置放置于37 ℃厌氧培养箱中培养25h。配养后黄色菌液即为干酪乳杆菌-菊糖-黄芪多糖合生元菌液。图1示出静置和摇床培养状态下干酪乳杆菌的生长曲线；图2示出不同培养时间干酪乳杆菌-菊糖-黄芪多糖合生元的生长曲线。利用平板菌落计数法检测干酪乳杆菌-菊糖-黄多糖合生元菌液活菌数为2.83×109CFU/mL。采用EDTA定钙法，测得合生元菌液乳酸含量为23.53mol/mL。应用方法：干酪乳杆菌-菊糖-黄芪多糖合生元添加在全价饲料中，添加量为50~100mL/kg，现喂现拌。贮藏方法：该干酪乳杆菌-菊糖-黄芪多糖合生元菌液应放在2~8℃冰箱中，并在24小时内使用。实施例2：用1 mol/L的NaOH调节MRS培养基pH值，使其pH值为6.5。高温高压灭菌20分钟。将100mLMRS液体培养基装入150mL锥形瓶中，加入1g菊糖和黄芪多糖复合物，其中菊糖0.2g，黄芪多糖0.8g，然后用孔径为0.22μm微孔滤膜过滤，分离滤液。在无菌操作台下，将活化后的干酪乳杆菌按体积比2%的接种量接种在上述含有菊糖-黄芪多糖复合物的MRS培养基的滤液中，分装后封口。将上述含有干酪乳杆菌的滤液静置放置于37 ℃厌氧培养箱中培养24h。配养后黄色菌液，即为干酪乳杆菌-菊糖-黄芪多糖合生元菌液。利用平板菌落计数法检测干酪乳杆菌-菊糖-黄芪多糖合生元菌液活菌数为活菌数为2.78×109CFU/mL。采用EDTA定钙法，测得合生元菌液乳酸含量为23.48mol/mL。应用方法和贮藏方法同实施例1。下面结合生化本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种促生长合生元菌液的制备方法，其特征是包括以下步骤：（1）将MRS培养基初始pH值控制在6.4~6.6之间，并经高压灭菌、冷却、静置；（2）将菊糖所占质量比例25~35%、黄芪多糖所占质量比例65~75%的菊糖‑黄芪多糖复合物以5~10g/L的浓度加入到MRS培养基中；然后，将MRS培养基经微孔滤膜过滤，分离，收集滤液；（3）在无菌操作台下，将活化后的干酪乳杆菌按体积比1%~2%的接种量接种在上述含有菊糖‑黄芪多糖复合物的MRS培养基的滤液中，分装，封口；（4）将上述滤液以状态静置放置在37℃的厌氧培养箱中培养，培养时间为24~26h；配养后的黄色菌液，即为干酪乳杆菌‑菊糖‑黄芪多糖合生元菌液。

【技术特征摘要】
1.一种促生长合生元菌液的制备方法，其特征是包括以下步骤：
（1）将MRS培养基初始pH值控制在6.4~6.6之间，并经高压灭菌、冷却、静置；
（2）将菊糖所占质量比例25~35%、黄芪多糖所占质量比例65~75%的菊糖-黄芪多糖复合物以5~10g/L的浓度加入到MRS培养基中；然后，将MRS培养基经微孔滤膜过滤，分离，收集滤液；
（3）在无菌操作台下，将活化后的干酪乳杆菌按体积比1%~2%的接种量接种在上述含有菊糖-黄芪多糖复合物的MRS培养基的滤液中，分装，封口；
（4）将上述滤液以状态静置放置在37℃的厌氧培养箱中培养，培养时间为24~26h；配养后的黄色菌液，即为干酪乳杆菌-菊糖-黄芪多糖合生元...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈静，刘显军，李建涛，杨璐，鲁茗源，
申请(专利权)人：沈阳农业大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21