紫苏中黄酮及其衍生物的提取方法技术

本发明专利技术公开了紫苏中黄酮及其衍生物的提取方法，其包括如下步骤：(1)选取紫苏叶片，通过研钵研磨破碎，过筛；(2)将研磨过筛的紫苏叶放入超声波提取机的槽内，加入质量百分比为30-80％乙醇，料液比为1:30-50，水浴温度40～80℃，水浴时间0.5-2.5小时，超声时间20-60min，(3)将前述步骤得到的混合物12000g离心，去除沉淀，得到黄酮及其衍生物的溶液。本发明专利技术方法提取紫苏中黄酮及其衍生物的得率为78.2mg/g。本发明专利技术得到的紫苏黄酮具有广谱抗菌活性，能够对革兰氏阴性细菌和革兰氏阳性细菌均具有较好的抑菌活性，24h抑菌率可以达到90％以上，具有广阔的开发前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及化学
，具体涉及。
技术介绍
紫苏（Perilla frutescens)，又名香苏，为唇形科草本植物，在我国已有2000多 年的栽培历史，是国家卫生部颁布的首批传统药、食两用植物之一 。研究显示，紫苏 的多个部位均含有丰富的营养物质和活性物质。其中，紫苏茎、叶中含有8种人体必需氨基 酸。紫苏籽含油率为30%-51 %且多为不饱和脂肪酸，其中α-亚麻酸含量为64. 73%、亚 油酸为15. 43%、油酸为12. 01%，是一种理想的食用油原料。紫苏叶提取物具有抑制炎症 反应和止痒效果。 目前，关于紫苏活性物质提取与应用的研究越来越多，但是目前对紫苏的研究主 要集中在紫苏油方面，而关于紫苏黄酮的报道相对较少。 为了解决上述的技术问题，本专利技术由此而来。
技术实现思路
本专利技术所要解决的第一方面技术问题是提供一种紫苏中黄酮及其衍生物的提取 方法。 为了解决上述的技术问题，本专利技术提供一种， 其特征在于，其包括如下步骤： (1)选取紫苏叶片，通过研钵研磨破碎，过筛； (2)将研磨过筛的紫苏叶放入超声波提取机的槽内，加入质量百分比为30-80% 乙醇，料液比为1:30-50,水浴温度40~80°C，水浴时间0. 5-2. 5小时，超声时间20-60min， (3)将前述步骤得到的混合物12000g离心，去除沉淀，得到黄酮及其衍生物的溶 液。 在本专利技术的技术方案中，所述步骤（2)中，加入质量百分比为30-50%乙醇。 在本专利技术的技术方案中，所述步骤（2)中，加入质量百分比为40%乙醇。 在本专利技术的技术方案中，所述步骤（2)中，加入乙醇后，料液比为1:40。 在本专利技术的技术方案中，所述步骤（2)中，水浴温度50~70°C，水浴时间0. 5-1. 0 小时。 在本专利技术的技术方案中，所述步骤（2)中，超声时间30-50min。 在本专利技术的技术方案中，所述步骤（2)中，超声时间40min。 在本专利技术的技术方案中，所述步骤（3)中，将步骤⑵处理后得到的混合物12000g 离心。 黄酮衍生物或黄酮类化合物泛指两个具有酚羟基的苯环通过中心三碳原子连结 而成的一系列酚类化合物，其基本母核为2-苯基色原酮。黄酮衍生物结构中常连接有酚羟 基、甲基、甲氧基、异戊烯基等官能团。此外，它还常与糖结合成苷。本文研究发现紫苏黄 酮及其衍生物对羟自由基和氧自由基有显著的清除作用，清除能力均与浓度呈正相关。当 紫苏中黄酮的浓度为2. OOmg/ml时，对羟自由基和氧自由基的清除率分别达到82. 5%和 75. 2%，与浓度为0. 75mg/ml的抗坏血酸Vc溶液的清除能力相当。紫苏中黄酮类化合物对 DPPH ·也有较好的清除作用，但不如抗坏血酸效果明显。自由基是人体新陈代谢过程中产 生的化合物，具有强氧化性，机体自身具有自由基清除能力。但一旦机体的自由基积累过多 且机体清除能力下降时，机体的组织和细胞就会受到损害，进而引起疾病及衰老。本文的研 究结果表明紫苏黄酮类化合物具有清除自由基的活性，说明紫苏可以作为一种抗衰老的天 然活性药物进行开发。 本专利技术中总黄酮是指包括黄酮及黄酮衍生物。 本专利技术的，当提取工艺为乙醇浓度40%，料液 比为1:30,超声时间40min，水浴温度70°C，此条件下提取紫苏中黄酮及其衍生物的得率为 78. 2mg/g。现有技术中，通常紫苏黄酮得率为50-60mg/g。本专利技术采用超声波提取法，且选 用紫苏叶对其中的黄酮进行了提取，提高了黄酮得率。 近年来，抗生素耐药性问题越来越突出。开发新型抗生素制剂对于解决耐药性问 题尤为重要。黄酮类且具有与传统抗生素不同的抗菌机理。黄酮类化合物可以通过直接抑 菌作用、抑制细菌的毒力因子以及与抗生素协同作用而发挥抗菌作用。本文研究发现，紫 苏黄酮具有广谱抗菌活性，能够对革兰氏阴性细菌和革兰氏阳性细菌均具有较好的抑菌活 性，24h抑菌率可以达到90 %以上。紫苏黄酮类化合物是一种天然抗菌药物，具有广阔的开 发前景。【附图说明】 图1为芦丁标准曲线。 图2为乙醇浓度对总黄酮提取率的影响曲线图。 图3为料液比对总黄酮提取率的影响曲线图。 图4为超声时间对总黄酮提取率的影响曲线图。 图5为水浴温度对总黄酮提取率的影响曲线图。 图6为水浴时间对总黄酮提取率的影响曲线图。 图7为DPPH.清除曲线图。 图8为羟自由基清除曲线图。 图9为氧自由基的清除曲线图。 图10为黄酮对大肠杆菌抑菌效果图。 图11为黄酮对金黄色葡萄球菌抑菌效果图。【具体实施方式】 下面结合附图和实施例对本专利技术进行更详细地说明。 根据下述实例项，可以更好的理解本专利技术。然而，本领域的技术人员更容易理解， 实施所述的具体的物料比、工艺条件及其结果仅用于说明本专利技术，而不应当也不会限制权 利要求中所详细描述的本专利技术。 紫苏叶、芦丁购自江苏健中源中药有限公司。试验中所用到的试剂均为国产分析 纯。 芦丁标准曲线 取芦丁标准品5. 3mg，配置0. 212mg/ml的芦丁标准液。以浓度（C)为横坐标，以 吸光度值（A)为纵坐标，绘制标准曲线（图1)，得回归方程：y = 0. 8149X-0. 0037, R2 = 0.9802。结果表明，芦丁在0.01-0.1 m g/m 1呈良好的线性关系。 -、紫苏黄酮及其衍生物的提取方法 实施例1: 按照
技术实现思路
的技术方案提取方法，以乙醇为溶剂，分别考察乙醇体积数（30%、 40 %、50 %、60 %、70 %、80 % )、对黄酮化合物得率的影响。黄酮浓度的测定采用芦丁标准曲 线配合吸光度进行。黄酮化合物得率计算公式为： 紫苏总黄酮得率=(粗提物中黄酮总量/紫苏叶质量）X100%，以下计算方式同。 由图2可知，乙醇浓度与黄酮得率呈曲线关系，且不同浓度的乙醇提取黄酮得率 相差较大。乙醇浓度在30%~40%时黄酮得率急剧增加；浓度为40%~60%时得率相对 稳定（差值仅为〇. 06% );浓度为60 %~80 %提取率骤降。因此选择浓度40 %~60 %乙 醇进行正交实验。 实施例2 按照
技术实现思路
的技术方案提取方法，以乙醇为溶剂，分别考察乙醇料液比（1:20、 1 :30、1:40、1:50)对黄酮化合物得率的影响。计算公式和计算方法同上。由图3可知，随着 料液比的增大，黄酮得率逐步提高。当料液比为1:40时，总黄酮有最高得率达3. 32% ;当 料液比为1:50时，提取率稍有减少。所以选取1:30、1:40、1:50为正交试验考察的条件。 实施例3 按照
技术实现思路
的技术方案提取方法，选择不同的超声波处理时间（20、30、40、50、 60min)考察对黄酮化合物得率的影响。 由图4可知，超声波作用时间20-40时黄酮得率逐渐增多。因为超声波的空化和 振荡作用有利于细胞内物质的溶出。但当超声处理时间超过40min时提取率开始下降，这 可能是因为长时间超声处理破坏了黄酮的结构和生物活性。因此选择超声时间30~50min 进行正交实验。 实施例4 按照
技术实现思路
的技术方案提取方法，选择不同的水浴温度（40、50、60、70、80°C ) 考察对黄酮化合物得率的影响。 由图5可知，随着浸提温度的升高，黄酮提取率逐步上升，提取包括渗透、溶解和 扩散等过程，随温度升本文档来自技高网...

【技术保护点】
紫苏中黄酮及其衍生物的提取方法，其特征在于，其包括如下步骤：(1)选取紫苏叶片，通过研钵研磨破碎，过筛；(2)将研磨过筛的紫苏叶放入超声波提取机的槽内，加入质量百分比为30‑80％乙醇，料液比为1:30‑50，水浴温度40～80℃，水浴时间0.5‑2.5小时，超声时间20‑60min，(3)将前述步骤得到的混合物10000‑15000g离心，去除沉淀，得到黄酮及其衍生物的溶液。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张启焕，李凤伟，仇明，王资生，许伟，邵荣，
申请(专利权)人：盐城工学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32