干细胞培养用培养基制造技术

由脱脂肪酸处理等而含有脂肪酸负载量降低的白蛋白的干细胞培养用培养基；干细胞培养用培养基的制造方法、等，其特征在于，对白蛋白进行脱脂肪酸处理而制备脂肪酸负载量降低的白蛋白，将该制备的白蛋白添加到培养基。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】干细胞培养用培养基
本专利技术涉及干细胞培养用培养基、所述培养基的制造方法等。 【
技术介绍
】 以往、干细胞（胚胎干细胞、人工多能性干细胞（iPS细胞）等）的培养使用含有 血清的培养基进行。例如，胎牛血清（FBS)等作为对于细胞增殖重要的添加物在细胞培养 中广泛使用。但是将培养后的干细胞以医疗目的使用时，异种来源成分有成为血液媒介病 原菌的感染源或异种抗原的可能性。另外由血清的批间差而也有培养结果发生偏差的可能 性。因此，近年，使用化学组成明了的培养基（chemicallydefinedmedium)培养干细胞成 为主流，进行无血清培养基的开发。 作为在无血清培养基中重要性高的成分之一，可举出白蛋白。通过添加白蛋白，可 期待培养基性能的稳定维持效果。作为细胞培养用，有数种的白蛋白在市售。但是，在细胞 培养、特别干细胞的培养中，不是全部的白蛋白有同等的效果，由白蛋白的品质而培养成绩 受影响。 另一方面，作为白蛋白的纯化方法，已知活性炭处理、离子交换、加热处理等（非 专利文献1、4、5及6)。另外，有说棕榈酸在间质干细胞中诱导凋亡的报告（非专利文献2)、 及说通过添加在iPS细胞中抑制油酸合成酶的物质而棕榈酸蓄积，ER应激-凋亡被诱导的 报告（非专利文献3)。 在专利文献1中记载，为了白蛋白的稳定化而在培养基中使用辛酸，此辛酸对于 干细胞培养有害。但是，未见为了白蛋白的稳定化而使用长链脂肪酸的记载，另外，未见显 示长链脂肪酸相比作为中链脂肪酸的辛酸对于干细胞培养更有害，对于未分化能力维持有 不良影响的数据或记载。另外，在专利文献2中记载，干细胞用培养基中含无脂肪酸的白蛋 白。在该文献中无关于在培养干细胞上自白蛋白除去何程度的脂肪酸就充分的记载，另外， 由于作为无脂肪酸的白蛋白使用市售的Proliant公司制的牛血清来源白蛋白，未进行从 白蛋白的脂肪酸除去的复杂性的探讨。【现有技术文献】 【专利文献】 专利文献1 :国际公开第2013/006675号 专利文献2 :国际公开第2013/134378号 【非专利文献】 非专利文献1:J.BiologicalChemistry1968, 212(2)，173-181非专利文献2EndocrinologyNovember2012, 153(11) ,5275-5284 非专利文献3:CellStemCell2013, 12, 167-179非专利文献4 :BioChim.Biophy.Acta1970, 221，376-378非专利文献5:Biologics1997, 25, 391-401 非专利文南犬6:Brazilianjournalofmedicinalandbiologicalresearch 1998,31, 1383-1388【
技术实现思路
】 【专利技术要解决的技术课题】 本专利技术解明由添加到培养基的白蛋白的品质的差异的培养成绩的偏差的机制，旨 在提供培养成绩更好的干细胞培养用培养基，提供制造所述培养用培养基的方法，还提供 选择适宜于添加到培养用培养基的白蛋白的方法，另外，提供干细胞培养用培养基添加剂， 再者，提供可使干细胞维持在未分化状态的培养系统。 【解决课题的技术方案】 本专利技术人为达成上述目的进行锐意探讨的结果，发现在干细胞的培养中添加的负 载了白蛋白的脂肪酸与细胞增殖之间有相关关系，确认通过对于白蛋白进行以脱脂肪酸作 为目的的纯化而培养成绩改善，从而完成本专利技术。 SP，本专利技术如下： 含有脂肪酸负载量降低的白蛋白的干细胞培养用培养基。 所述的培养基，其中脂肪酸负载量的降低是由脱脂肪酸处理所致。 所述的培养基，其中脱脂肪酸处理是活性炭处理。 ~之任一项所述的培养基，其中白蛋白的脂肪酸负载量是10mg/g以 下。 ~之任一项所述的培养基，其中白蛋白的脂肪酸负载量是6mg/g以下。 ~之任一项所述的培养基，其中白蛋白的脂肪酸负载量是0.lmg/g~ 0.65mg/g〇 ~之任一项所述的培养基，其中培养基中的脂肪酸含量是60μΜ以下。 干细胞培养用培养基，其中每lg白蛋白的脂肪酸负载量是0·lmg~0· 65mg。 所述的培养基，其中培养基中的脂肪酸含量是60μΜ以下。 ~之任一项所述的培养基，其中脂肪酸是长链脂肪酸。 ~之任一项所述的培养基，其中脂肪酸是选自油酸、棕榈酸、硬脂酸、 亚油酸、亚麻酸及花生四烯酸的至少1种。 ~之任一项所述的培养基，其中白蛋白是人血清来源白蛋白。 ~之任一项所述的培养基，其中干细胞是多能性干细胞。 所述的培养基，其中多能性干细胞是胚胎干细胞（ES细胞）或人工多能 性干细胞（iPS细胞）。 干细胞的培养方法，其包括在~之任一项所述的培养基中培养的工 序。 所述的方法，其中干细胞是多能性干细胞。 所述的方法，其中多能性干细胞是胚胎干细胞（ES细胞）或人工多能性 干细胞（iPS细胞）。选择适于向培养基中添加的白蛋白的方法，其包括测定脂肪酸负载量，挑选 脂肪酸负载量降低的白蛋白的工序。干细胞培养用培养基的制造方法，其特征在于对白蛋白进行脱脂肪酸处理而 制备脂肪酸负载量降低的白蛋白，将该制备的白蛋白添加到培养基。 所述的方法，其中脱脂肪酸处理是活性炭处理。 所述的方法，其中活性炭处理是每白蛋白重量使用30~60重量％的活 性炭量而进行。 或所述的方法，其中活性炭处理在pH6. 7~7. 3进行。 或所述的方法，其中活性炭处理在pH3. 7~4. 3进行。 ~之任一项所述的方法，其中制备的白蛋白的脂肪酸负载量是 10mg/g以下。 ~之任一项所述的方法，其中制备的白蛋白的脂肪酸负载量是 6mg/g以下。 ~之任一项所述的方法，其中制备的白蛋白的脂肪酸负载量是 0·lmg/g~0· 65mg/g〇 ~之任一项所述的方法，其中培养基中的脂肪酸含量是60μΜ以 下。 ~之任一项所述的方法，其中脂肪酸是长链脂肪酸。 ~之任一项所述的方法，其中脂肪酸是选自油酸、棕榈酸、硬脂酸、 亚油酸、亚麻酸及花生四烯酸的至少1种。 ~之任一项所述的方法，其中白蛋白是人血清来源白蛋白。 ~之任一项所述的方法，其中干细胞是多能性干细胞。 所述的方法，其中多能性干细胞是胚胎干细胞（ES细胞）或人工多能性 干细胞（iPS细胞）。 含有脂肪酸负载量是0.lmg/g~0. 65mg/g的白蛋白的干细胞培养用培养基 添加剂。 所述的培养基添加剂，其中脂肪酸是长链脂肪酸。 所述的培养基添加剂，其中脂肪酸是选自油酸、棕榈酸、硬脂酸、亚油酸、 亚麻酸及花生四烯酸的至少1种。 ~之任一项所述的培养基添加剂，其中白蛋白是人血清来源白蛋 白。 ~之任一项所述的培养基添加剂，其中干细胞是多能性干细胞。 所述的培养基添加剂，其中多能性干细胞是胚胎干细胞（ES细胞）或人 工多能性干细胞（iPS细胞）。 干细胞的培养系统，其包括在含有脂肪酸负载量降低的白蛋白的培养基中 培养的工序，且所述培养系统以可以使干细胞维持在未分化状态的方式选择该脂肪酸负载 量。 所述的培养系统，其中脂肪酸负载量的降低是由脱脂肪酸处理所致。 所述的培养系统，其中脱脂肪酸处理是活性炭处理。 ~之任一项所述的培养系统，其中白蛋白的脂肪酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
干细胞培养用培养基，其含有脂肪酸负载量降低的白蛋白。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：栗山阳子，千田将，安东裕未，吉田智美，佐藤春奈，江岛大辅，藤井孝吉，伊达雅代，北泽学，
申请(专利权)人：味之素株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP