本发明专利技术涉及一种对亲水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)O抗原特异的核苷酸及其应用，所述核苷酸包括1）SEQ ID NO:1-8所示的核苷酸中的至少一种；2）与SEQ ID NO:1-8所示的核苷酸互补的核苷酸中的至少一种。这些核苷酸可用于制备检测亲水气单胞菌用PCR试剂盒和基因芯片。本发明专利技术的对亲水气单胞菌O抗原特异的核苷酸及包含该核苷酸的PCR试剂盒、基因芯片的实用性强，PCR试剂盒配制方法简便，检测周期短、速度快，可操作性强，易于产业化生产，而检测成本却相对较低；准确性高；灵敏度高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及对亲水气单胞菌07,08,09和010血清型特异的核巧酸，尤其设及对亲 水气单胞菌07, 08, 09和010血清型0抗原基因簇中单个基因特异的核巧酸及其应用。
技术介绍
亲水气单胞菌（Aeromonashy化ophila)属于弧菌科气单胞菌属，为革兰氏阴性短 杆菌，没有芽抱和芙膜，又名嗜水气单抱菌。亲水气单胞菌广泛存在于自然界众多水体中， 是多种水生动物的原发性致病菌。为条件性致病菌，是典型的人-兽-鱼共患病病原菌。它 通过肠道进入机体，可W产生毒性很强的外毒素，引起暴发性出血病。一般情况下，菌体对 肠道组织的粘附力越强，其产生的外毒素的毒性就越强。亲水气单胞菌的血清型很多，症状 也各异，由亲水气单胞菌感染的疾病一般病情严重，多位恶性传播，死亡率较高。 细菌分型与鉴定方法主要有传统的表型方法、血清学方法W及分子鉴定方法。然 而，随着分子生物学的发展，传统的血清分型和鉴定方法存在着一定的问题，如血清分型运 种诊断方法需要大量的抗血清，而抗血清一般种类不全，数量不足，大量的抗血清在制备和 储存中也存在一些困难。另一方面血清分型方法耗时长、灵敏度低、漏检率高、准确性差，不 同的0抗原产生的抗血清之间经常存在交叉反应。因此，建立基于分子生物学技术的血清 鉴定方法成为发展方向。亲水气单胞菌的分子鉴定越来越受到人们的重视，成为亲水气单胞菌菌种与株型 鉴定的重要依据，不少新菌也因此产生。对弧菌而言，生化反应主要是各种酶谱的表现，属 于外部形态的内容，核酸的相似性才是弧菌种的界定最根本、最直接的特征。因此，亲水气 单胞菌的分型与鉴定最有效、最直接的方式应该从核酸的研究触发，通过比较核酸(包括基 因组与核酸片段）的相似性确定亲水气单胞菌的归属。 近年来，越来越多的分子技术用于病原菌的分型、鉴定、检测及病害诊断，包括转 录间隔区ατ巧序列分析、随机扩增长度多态性（RAPD)分析、核糖体DNA限制性片段长度 多态性（RFL巧分析等。分子生物学方法不仅可用于亲水气单胞菌的快速血清分型筛查， 稳定的鉴定结果可W弥补表型特征鉴定方法的不足。和传统检测技术相比，运些基于多聚 酶链式反应（PCR)的分子检测技术，不需要经过病原菌的分离、纯培养等过程，而且具有快 速、灵敏、特异性强等优点。 聚合酶链式反应技术（Polymerasechainreaction,简称PCR技术）作为微生物 检测技术目前正在得到认同和推广，该技术相对于传统的方法有高通量、检测速度快、特异 性强、灵敏度高等优点，只需对样品进行简单的预增菌或增菌过程，再通过离屯、及裂解制备 细菌DNA模板，就可W在高特异性引物介导下的PCR过程中扩增目标序列，达到检测样品中 是否含有待测的致病性微生物的目的。PCR的扩增过程仅需1个半小时。运对检验检疫部 口和临床检验无疑极大提高了工作速度和降低了工作成本。不论从国内和国际的角度来看，快速、准确地鉴定出血清类型，为亲水气单胞菌的 防控提供有效技术支持是十分重要的。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了一种对亲水气单胞菌0抗原特异的核巧酸，其特征在于 所述的核巧酸具有： 1) 沈QIDNO: 1-8所示的核巧酸中的至少一种； 2) 与SEQIDNO: 1-8所示的核巧酸互补的核巧酸中的至少一种；所述的SEQIDNO: 1-8 如下：本专利技术还提供了一种PCR试剂盒，包括PCR引物、dNTP、缓冲液和DM聚合酶，所述PCR引物为如SEQIDN0:l-8所示的核巧酸中的至少一种。所述的试剂盒，还包括如下试剂：10 mldNTP30μ1 ; 10X酶特异性反应缓冲液50μ1 ;5U/μ1耐热DNA聚合酶5μ1 ;引物混合 物10μ1 ;阳性对照品10μ1 ;阴性对照品10μ1;d地2〇 5ml。 其中所述的PCR引物优选为所述如SEQIDNO: 1-8所示的核巧酸中的至少一种。 本专利技术进一步公开了一种对亲水气单胞菌0抗原特异的SEQIDNO: 1-8核巧酸在 制备用于检测亲水气单胞菌0抗原PCR试剂盒、基因忍片或微阵列方面的应用。 本专利技术所述亲水气单胞可W取样于自来水、污水、海水的培养物的粗提液、瓜果蔬 菜中、病体标本或是亲水气单胞菌的纯培养物的粗提液。 收集亲水气单胞菌提取基因组是采用常规方法制备获得。 针对亲水气单胞菌的PCR试剂盒，整个检测步骤包括样品预处理一扩增一电泳检 测结果。引物和PCR反应体系所需要的试剂已预先加入扩增管中，使用者只需将预处理后 的样本加入扩增管启动扩增反应即可，简单快速的完成检测工作。 本专利技术还提供一种基因忍片，包括固相载体和固定在固相载体上的寡核巧酸探 针，其中所述寡核巧酸探针包括上述的核巧酸；其中所述核巧酸优选为如SEQIDNO: 1-8所 示的核巧酸。 本专利技术还提供一种微列阵，其包括上述的核巧酸；其中所述核巧酸优选为如SEQ IDNO: 1-8所示的核巧酸。检测亲水气单胞的基因忍片方面、检亲水气单胞微阵列方面的应 用。所述亲水气单胞菌是检测由于污染水源和未煮熟、未清洗的食物引起的急性胃肠炎、外 伤感染、肠道传染病、医院内感染等多种混合型感染的细菌。 本专利技术公开的一种对亲水气单胞菌0抗原特异的核巧酸与现有技术相比，本专利技术 具有如下优点： (1)实用性强：本专利技术建立的一种PCR反应体系，可检测亲水气单胞菌，提供血清分型 检测所用到的特异引物，利用该PCR方法可W对临床标本进行检测。 (2)准确性高：本专利技术通过对亲水气单胞菌的各血清型特异的基因的PCR反应，每 个样品得到一条目的条带，将得到目的片段与已知长度相比较，就可W得到亲水气单胞菌 所属的血清型。 (3)检测成本相对较低：可W推广应用于食品卫生监督、环境监测、尚品监测检验 检疫等领域，并为其他不同致病菌检测组合提供技术模式。 W上所述，仅是本专利技术的操作和实施方法而已，并非对本专利技术作任何形式上的限 审IJ，凡是依据本专利技术的技术实质对W上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍 属于本专利技术技术方案的范围内。【附图说明】： 图1表示本专利技术07血清型特异引物检测亲水气单胞菌其他血清型标准菌株电泳结果 图，wz/s基因P1和P2引物的筛选，目的条带为15化P，其余的血清型没有任何条带具体菌株 信息见表2 ; 图2表示本专利技术07血清型特异引物种特异性的鉴定电泳结果图，其中检测了 6株弧菌W及1株沙口菌、1株大肠杆菌，均无任何条带，具体菌株信息见表2 ; 图3表示本专利技术08血清型wzm基因P3和P4引物检测亲水气单胞菌其他血清型标准 菌株电泳结果图，wzm基因P3和P4引物的筛选，目的条带为193bp，其余的血清型没有任何 条带。具体菌株信息见表2; 图4表示本专利技术08血清型wzm基因P3和P4引物种特异性的鉴定电泳结果图，其中检 测了 6株弧菌W及1株沙口菌、1株大肠杆菌，均无任何条带。具体菌株信息见表2 ; 图5表示本专利技术09血清型G7基因P5和P6引物检测亲水气单胞菌其他血清型标准菌 株电泳结果图，獻基因P5和P6引物的筛选，目的条带为159bp，其余的血清型没有任何条 带，具体菌株信息见表2; 图6表示本专利技术09血清型G7基因P5和P6引物种特异性的鉴定；电泳结果图，其中检 测了 6株弧菌W及1株沙口菌、1株本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种对亲水气单胞菌O抗原特异的核苷酸，其特征在于所述的核苷酸具有：1）SEQ ID NO:1‑8所示的核苷酸中的至少一种；2）与SEQ ID NO:1‑8所示的核苷酸互补的核苷酸中的至少一种。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王磊，许广楠，王敏，张新杰，许玲玲，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：天津;12
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