本发明专利技术公开一种表面增强拉曼散射免疫层析试纸条及制备方法与应用。该试纸条包含底衬、样品吸收垫、结合垫、层析膜和吸水垫；样品吸收垫、结合垫、层析膜和吸水垫依次紧密相连、且附着在底衬上；其中，结合垫上附着金核银壳纳米花标记的抗体I；层析膜上设置检测线；检测线上附着有抗体II或者抗原A。本发明专利技术通过将金核银壳纳米花标记的抗体I分散在结合垫上，将抗原A或者抗体II呈直线型附着在层析膜上，形成检测线；在底衬上将样品吸收垫、结合垫、层析膜和吸水垫依次相互搭接；得到表面增强拉曼散射免疫层析试纸条。本发明专利技术具有操作安全、简便、低成本、快速、灵敏度高等优点，应用范围广。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于光谱及免疫学检测检测领域，特别涉及。
技术介绍
免疫学检测方法是应用免疫学理论设计的一系列检测抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子，小分子的实验方法。在免疫学检测中，国内外主要采用放射性免疫技术，酶联免疫吸附法(ELISA)，电化学免疫分析技术，电化学发光免疫分析技术，胶体金免疫层析法等方法以实现定量或者定性检测。但是这些方法都存在不同程度的缺点:①酶联免疫吸附法检测有较高的的灵敏度，但是需要一些配套的专业仪器仪器，需要专业的人员进行操作，对检测环境有一定的要求，检测时间较长，步骤繁琐。②胶体金免疫层析试纸条具有成本低，快速，操作便捷等特点。经过多年的研究，胶体金免疫层析试纸条具有成熟的工艺流程。目前胶体金免疫层析试纸条在疾病诊断，环境污染监测和食品安全监控方面有着重要的作用。但是由于胶体金颗粒信号放大作用有限，所以胶体金免疫层析试纸条灵敏度不高，并且胶体金免疫层析试纸条很难实现准确定量检测。③胶体金免疫层析试纸条相比，荧光免疫层析试纸条具有灵敏度高，可实现准确检测的目的。荧光免疫层析试纸条的示踪剂有有机荧光染料，荧光乳胶微球，镧系元素，量子点等。单个荧光染料信号放大能力有限，并且在光照条件线容易发生荧光淬灭现象，影响了试纸条的灵敏度和稳定性。量子点具有激发光谱宽，发射光谱窄，斯托克斯位移大、稳定性高等特点，但是量子点也有一些不足:量子点亮度中等、价格较高，这些影响了试纸条的灵敏度，增加了试纸条的研发和生产的成本。荧光乳胶微球具有荧光信号强，稳定性高，易于和蛋白标记等优点，是一种很好的免疫层析试纸条的示踪剂。但是荧光乳胶微球和有机荧光染料一样，斯托克斯位移较小，容易受到背景光的干扰，影响其灵敏度。因此，仍需进一步研究，以期获得一种高灵敏度、操作简单、快速、低成并且可定量检测的方法。
技术实现思路
本专利技术的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种表面增强拉曼散射(Surface-enhanced Raman scattering, SERS)免疫层析试纸条。该试纸条以金核银壳纳米花为基底。本专利技术的另一目的在于提供上述表面增强拉曼散射免疫层析试纸条的制备方法。本专利技术的另一目的在于提供上述表面增强拉曼散射免疫层析试纸条的应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现:一种表面增强拉曼散射免疫层析试纸条，包含底衬、样品吸收垫、结合垫、层析膜和吸水垫；样品吸收垫、结合垫、层析膜和吸水垫依次紧密相连、且附着在底衬上；其中，结合垫上附着金核银壳纳米花标记的抗体I ;层析膜上设置检测线；检测线上附着有抗体II或者抗原A ;抗体I与抗体II是不同的抗体，且都能与待检测蛋白质抗原结合；抗体I能与抗原A结合，抗原A与待检测抗原是竞争性抗原。在检测蛋白质抗原时:对于检测阴性样品，金核银壳纳米花标记的抗体I与检测线上的抗体II不结合，对于检测阳性样品，金核银壳纳米花标记的抗体I与检测物结合，再通过所结合的检测物与检测线上的抗体II结合。在检测小分子抗原时:对于检测阴性样品，金核银壳纳米花标记的抗体I与检测线上的抗原A结合，对于检测阳性样品，金核银壳纳米花标记的抗体I与检测线上的抗原A不结合。所述的表面增强拉曼散射免疫层析试纸条，还包含塑料外壳，塑料外壳包裹底衬和附着在底衬且依次紧密连接样品吸收垫、结合垫、层析膜和吸水垫；其中，塑料外壳上设置有加样孔和观察孔，加样孔位于样品吸收垫的位置，观察孔位于检测线；塑料外壳的作用是防止基于SERS免疫层析试纸条受到污染以及便携易用。所述的底衬为不透水物质，优选为聚氯乙烯(PVC)。所述的样品吸收垫的材质优选为玻璃纤维。所述的结合垫的材质优选为聚酯膜或者玻璃纤维素膜。所述的层析膜的材质优选为硝酸纤维素膜。所述的吸水垫的材质优选为吸水纸。所述的抗原A为完全抗原，优选为完全抗原Cd2+-1EDTA-BSA或血红蛋白。所述的抗体I优选为抗Cd2+-EDTA抗体。所述的抗体II优选为抗血红蛋白抗体。所述的金核银壳纳米花标记的抗体I通过如下方法制备得到:将金核银壳纳米花与抗体I混合，搅拌均匀；再加入牛血清白蛋白封闭即可。所述的金核银壳纳米花的制备过程如下:(1)金纳米花的制备:0.2mL浓度为25mM的氯金酸加入到10mL 20mM、pH 7.4的HEPES溶液中后，静止反应30min，得到金纳米花；(2)金核银壳纳米花的制备:40 μ L浓度为0.1Μ的NaOH溶液和30 μ L浓度为0.1Μ的抗坏血酸加入到lmL步骤(1)制备的金纳米花中，搅拌后加入400 μ L浓度为10mM的AgN03溶液，反应半小时，得到金核银壳纳米花。所述的金核银壳纳米花标记的抗体I优选通过如下具体步骤制备得到:(1)金纳米花的制备:0.2mL浓度为25mM的氯金酸加入到10mL 20mM、pH 7.4的HEPES溶液中后，静止反应30min，得到金纳米花；(2)金核银壳纳米花的制备:40 μ L浓度为0.1Μ的NaOH溶液和30 μ L浓度为0.1Μ的抗坏血酸加入到lmL步骤(1)制备的金纳米花中，搅拌后加入400 μ L浓度为10mM的AgN03溶液，反应半小时，得到金核银壳纳米花；(3)金核银壳纳米花标记的抗体I的制备:0.2 μ L浓度为20mM的4-巯基苯甲酸加入到lmL步骤⑵制备得到的金核银壳纳米花中，室温静置1小时后加入3 yL浓度为lmg/mL的单克隆抗体I和15 μ L浓度为lmg/mL的聚乙烯吡咯烷酮(PVP);室温反应30min后，再加入100 μ L浓度为10mg/mL的牛血清白蛋白；室温反应30min后，离心，去上清，再用lmL浓度为12mM的磷酸缓冲液重新分散，得到金核银壳纳米花标记的抗体I。步骤(3)中所述的室温指的是20?30°C。步骤(3)中所述的离心的条件优选为7000rpm离心10分钟。所述的表面增强拉曼散射免疫层析试纸条的制备方法，包含以下步骤:(A)将金核银壳纳米花标记的抗体I分散在结合垫上；(B)将抗原A或者抗体II呈直线型附着在层析膜上，形成检测线；(C)在底衬上将样品吸收垫、步骤(1)得到的结合垫、步骤(2)得到的层析膜和吸水垫依次相互搭接；得到表面增强拉曼散射免疫层析试纸条。步骤(A)优选为:用喷金划膜仪将金核银壳纳米花标记的抗体I喷到结合垫上。步骤⑶中所述的抗原A或者抗体II优选通过喷金划膜仪包裹到层析膜上。所述的表面增强拉曼散射免疫层析试纸条在检测领域中的应用。本专利技术的原理:表面增强拉曼散射(surface enhancement of Ramanscattering, SERS)是指一些分子在接近一些金属纳米颗粒的表面后，拉曼信号有所增强的现象。目前主要用于增强拉曼信号的纳米颗粒有金纳米颗粒，银纳米颗粒。在这两种材料中，金纳米颗粒制备简单，化学性质稳定，但是其拉曼增强因子比较低，在102_106之间。银纳米颗粒的拉曼增强较高，平均在106左右，但是银纳米颗粒的稳定性和均一性较金纳米颗粒而言较差。研究证明，和表面光滑的纳米颗粒相比较当前第1页1 2 3 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种表面增强拉曼散射免疫层析试纸条，其特征在于：包含底衬、样品吸收垫、结合垫、层析膜和吸水垫；样品吸收垫、结合垫、层析膜和吸水垫依次紧密相连、且附着在底衬上；其中，结合垫上附着金核银壳纳米花标记的抗体I；层析膜上设置检测线；检测线上附着有抗体II或者抗原A；所述的金核银壳纳米花标记的抗体I通过如下方法制备得到：将金核银壳纳米花与抗体I混合，搅拌均匀；再加入牛血清白蛋白封闭得到；所述的金核银壳纳米花的制备过程如下：(1)金纳米花的制备：0.2mL浓度为25mM的氯金酸加入到10mL 20mM、pH 7.4的HEPES溶液中后，静止反应30min，得到金纳米花；(2)金核银壳纳米花的制备：40μL浓度为0.1M的NaOH溶液和30μL浓度为0.1M的抗坏血酸加入到1mL步骤(1)制备的金纳米花中，搅拌后加入400μL浓度为10mM的AgNO3溶液，反应半小时，得到金核银壳纳米花。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：唐勇，付强强，吴泽，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东;44
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