本发明专利技术涉及医药领域，尤其涉及ABCC4基因多态性位点rs3742106的用途及其检测引物与试剂盒。实验证明，根据多态性位点rs3742106基因型能够预测结直肠癌化疗疗效：基因型为AA时，预测结直肠癌患者的化疗效果好，基因型为CC或CA时化疗效果差。故而，本发明专利技术提供了ABCC4基因多态性位点rs3742106在制备预测结直肠癌化疗疗效的产品中的应用，且提供了检测ABCC4基因多态性位点rs3742106的引物组和试剂盒，以及检测方法。采用本发明专利技术提供的试剂盒和方法能够准确的测定多态性位点rs3742106，并能对结直肠癌化疗效果进行预测，预测结果与预期相符。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药领域，尤其涉及ABCC4基因多态性位点rs3742106的用途及其检测引物与试剂盒。
技术介绍
结直肠癌(CRC)是最常见的恶性肿瘤之一。在世界范围内，CRC在男性和女性中的发病率分别处于恶性肿瘤发病率的第三位和第四位，死亡率分别位居第四位和第五位。近年来，我国CRC发病率呈明显上升趋势，在沿海发达地区及大中城市尤为明显。据统计，我国年均新发CRC病例达13万，约占全身肿瘤的12％～15％，并以年均4％增幅不断攀升。由于其发展迅速、恶性程度高、治疗困难，CRC越来越受到医学界特别是国内医学界的重视，使其成为基础研究和临床研究的重大课题。由于CRC早期诊断率低，约60％的初发术后或复发转移患者需接受系统化疗。目前临床用于治疗CRC的一线化疗药物有5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨、奥沙利铂等。然而，这些药物由于生物利用度个体差异很大，导致其疗效存在明显的个体差异，即使是联合使用其总体有效率也仅为30～40％药物疗效的个体差异一直是临床常见的现象，也是临床医师关注的问题之一。癌症患者接受化疗时表现出的这种差异尤为明显，不同患者接受相同剂量强度的化疗药物后可能产生不同的反应，从有效到无效，甚至产生严重不良反应。药物发挥生物活性必须先进入靶细胞，而表达在靶细胞上的转运体对药物的转运直接关系到药物能否有效进入靶细胞，达到有效浓度。肠道作为口服药物最重要的吸收器官，分布着大量的药物转运体。这些转运体的诱导或抑制都将严重影响药物的疗效。业已证实，作为人类最常见的一种基因变异，SNP在药物反应个体差异中起着极其重要的作用，是决定药物敏感性的主要因素之一，其与药物敏感性之间的关系及其功能意义也逐渐被人们所认识。随着研究的不断深入，越来越多的研究发现，位于转运体基因3′非编码区(3′-UTR)内存在的基因多态性(SNP)能够通过影响蛋白表达调控的关键因子microRNA(miRNA)的调控，从而影响转运体蛋白表达水平。ABCC4定位于人类染色体13q32，有1325个氨基酸组成，属于ABC转运蛋白中的ABCC亚家族。ABCC4基因多态性位点rs3742106是位于ABCC4基因3’-UTR上的SNP位点，目前，尚无研究表明，ABCC4基因的多态性位点rs3742106与化疗药物的疗效相关。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供ABCC4基因多态性位点rs3742106的用途及其检测引物与试剂盒，本专利技术提供的引物具有良好的特异性，能够实现对ABCC4基因多态性位点rs3742106的准确检测，从而实现对结直肠癌化疗疗效的准确预测。本专利技术提供了ABCC4基因多态性位点rs3742106在制备预测结直肠癌化疗疗效的产品中的应用。在本专利技术的实施例中，化疗的药物为奥沙利铂、5-氟尿嘧啶、卡培他滨中的一种或两者以上的组合。所述的疗效是指结直肠癌患者经化疗后临床症状是否缓解，根据化疗后CT结果及肿瘤标志物联合评价化疗结果。化疗疗效评价根据RECIST疗效标准评价：完全缓解(completeremission，CR)：所有目标病灶消失，至少维持4周；部分缓解(partialremission，PR)：基线病灶最大径之和至少减少30％，至少维持4周；病情稳定(steadydisease，SD)：基线病灶最大径之和减少不足30％或增大不足20％；病情进展(progressdisease，PD)：基线病灶最大径之和至少增加20％或出现新病灶。化疗有效包括CR和PR，化疗无效为SD和PD。ABCC4基因多态性位点rs3742106存在3种基因型，分别为AA、CC、CA，本专利技术对277例结直肠癌病人进行调查，当完成4个月的治疗后，其中，137例患者疗效好，140例患者疗效差。对277例结直肠癌患者的ABCC4基因多态性位点rs3742106基因型分析显示其分布符合Hardy-Weinburg平衡。经回归分析发现，多态性位点rs3742106基因型均与结直肠癌化疗疗效显著相关，根据多态性位点rs3742106基因型能够预测结直肠癌化疗疗效：基因型为AA时，预测结直肠癌患者的化疗效果好，基因型为CC或CA时化疗效果差。本专利技术还提供了扩增ABCC4基因多态性位点rs3742106的引物组，包括SEQIDNO:1～8所示核苷酸序列的引物中任意二条或二条以上的引物。其中，用于扩增rs3742106多态性位点的引物为SEQIDNo.1～3，其核苷酸序列为：SEQIDNo.1：5'-CAAGATGGTGCAACAACTGG-3'；SEQIDNo.2：5'-GTTAGAGCTGGAGATCCTTG-3'；SEQIDNo.3：5'-AGTCCGTTCCGAAGGCAATT-3'；用于单碱基延伸的引物为SEQIDNo.4，其核苷酸序列为：SEQIDNo.4：5'-AGTCCGTTCCGAAGGCATTT-3'；用于扩增等位基因的特异性引物为SEQIDNo.5～8，其核苷酸序列为：SEQIDNo.5：5'-CATAGTCCAAAAACTAGTCGA-3'；SEQIDNo.6：5'-CATAGTCCAAAAACTAGTCGC-3'；SEQIDNo.7：5'-GTCCGTTCCGAAGGCATATT-3'；SEQIDNo.8：5'-GTCCGTTCCGAAGGCATATG-3'。通常，用于检测基因多态性位点的方法有单碱基延伸-MALDI/TOF/MS法、DNA测序法、限制性片段长度多态性分析法、等位基因特异性扩增法、四引物扩增法。这些方法的灵敏性和准确性皆基于引物的特异性，本专利技术提供的引物能够具有良好的特异性，能够实现对ABCC4基因多态性位点rs3742106的准确检测。其检测样品为全血的基因组DNA。本专利技术提供了一种扩增ABCC4基因多态性位点rs3742106的试剂盒，包括：SEQIDNO:1所示核苷酸序列的上游引物、SEQIDNO:2所示核苷酸序列的下游引物和SEQIDNO:4所示核苷酸序列的单碱基延伸引物。该试剂盒可通过单碱基延伸-MALDI/TOF/MS法对多态性位点rs3742106进行检测。该试剂盒中还包括：PCR反应缓冲液、Mg2+、dNTP和TaqDNA聚合酶。该试剂盒中还包括：SAP酶。该试剂盒中还包括：IPLEX反应液。本专利技术提供了一种检测ABCC4基因多态性位点rs3742106基因型的方本文档来自技高网...
【技术保护点】
ABCC4基因多态性位点rs3742106在制备预测结直肠癌化疗疗效的产品中的应用。
【技术特征摘要】
1.ABCC4基因多态性位点rs3742106在制备预测结直肠癌化疗疗效的产
品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述化疗的药物为奥沙利
铂、5-氟尿嘧啶、卡培他滨中的一种或两者以上的组合。
3.扩增ABCC4基因多态性位点rs3742106的引物组，包括SEQIDNO:1～8
所示核苷酸序列的引物中任意二条或二条以上的引物。
4.一种扩增ABCC4基因多态性位点rs3742106的试剂盒，其特征在于，
包括：
SEQIDNO:1所示核苷酸序列的上游引物、
SEQIDNO:2所示核苷酸序列的下游引物和
SEQIDNO:4所示核苷酸序列的单碱基延伸引物。
5.一种检测ABCC4基因多态性位点rs3742106基因型的方法，其特征在
于，包括以下步骤：
步骤1：以待测样品的基因组DNA为模板，以SEQIDNO:1所示核苷酸
序列的上游引物和SEQIDNO:2所示核苷酸序列的下游引物进行PCR扩增，
获得扩增产物；
步骤2：所述扩增产物经纯化后，以SEQIDNO:4所示核苷酸序列的单
碱基延伸引物进行延伸，获得延伸产物；
步骤3：所述延伸产物经纯化后，以MALDI/TOF/MS测定ABCC4基因
多态性位点rs3742106的基因型。
6.一种扩增ABCC4基因多态性位点rs3742106的试剂盒，其特征在于，
包括：
SEQIDNO:1所示核苷酸序列的上游引物和
SEQIDNO:2所示核苷酸序列的下游引物。
7.一种检测ABCC4基因多态性位点rs3742106基因型的方法，其特征在
于，包括以下步骤：
步骤1：以待测样品的基因组DNA为模板，以SEQIDNO:1所示核苷酸
序列的上游引物和SEQIDNO:2所示核苷酸序列的下游引物进行PCR扩增，
\t获得扩增产物；
步骤2：所述扩增产物纯化后，经测序获得ABCC4基因多态性位点
rs3742106的基因型。
8.一种扩增ABCC4基因多态性位点rs3742106的试剂盒，其特征在于，
包括：
SEQIDNO:3所示核苷酸序列的上游引物和
SEQIDNO:2所示核苷酸序列的下游引物。
9.一种检测ABCC4基因多态性位点rs3742106基因型的方法，其特征在
于，包括以下步骤：
...
【专利技术属性】
技术研发人员：汪维鹏，王蕾，陈琦，邹玲婷，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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