用于检测培养于含有EGF或BFGF的培养基的脂肪源性干细胞的增殖和治疗能力的标记物及其用途制造技术

本发明专利技术涉及用于检测标记物的组合物，所述标记物用于检测培养于含有表皮生长因子(EGF)或碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的培养基的脂肪源性干细胞的增殖能力或治疗能力；以及检测方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于检测标记物的组合物及其检测方法，所述标记物能够检测培养于含有表皮生长因子(EGF)或碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的培养基的脂肪源性干细胞的增殖或治疗潜能。
技术介绍
因为脂肪组织含有的干细胞比可以从等量的骨髓获得的干细胞多1000倍，已经进行各种研究来将脂肪组织源性干细胞(ASC)用作移植材料。而且，脂肪源性干细胞是多能样(multipotentlike)骨髓源性干细胞因此能够被分化为软骨类、骨类、脂肪细胞、肌肉细胞等。此外，脂肪源性干细胞在表达细胞表面标记物方面与骨髓源性干细胞类似，并已经被报道不诱导针对体内和体外自体移植或异体移植的免疫反应，而是在调节免疫反应方面表现出潜能，从而获得作为有效用于基于细胞治疗的方法方面的关注。但是，如果使用常规已知基础培养基通过标准培养方法体外培养脂肪源性干细胞，该细胞培养需要大量时间，从而使得难于获得临床有效数量的细胞。因此，标准培养方法在实际临床应用中具有低效率的缺点。在这方面，本专利技术人目标在于开发用于有效临床治疗方法的培养方法，并确认，相比于通过标准培养方法培养的脂肪源性干细胞，在含有表皮生长因子(EGF)或碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的培养基中培养的脂肪源性干细胞表现出优异的临床效果(申请公开号为10-2010-0118491的韩国专利)。但是，尚未提供与在含有EGF或bFGF的培养基中培养的脂肪源性干细胞的优异临床效果有关的涉及分子生物学特征的目标分析。特别地，对于作为实际药物具有高于一定水平的治疗作用同时相比于在基础培养基中培养的干细胞表现出在生长培养基中培养的干细胞的优异的增殖和治疗潜能的干细胞治疗剂的可重复生产，需要开发可被应用于使用生长培养基通过改善的培养方法所获得的医学效果如干细胞的分化潜能、增殖潜能和效力的质量控制检查的方法。特别地，为了开发评估治疗剂的质量和细胞治疗剂的产量提高的方法，需要能够表示这种提高的生物标记物。
技术实现思路
技术问题与培养于基础培养基中相比，当培养于生长培养基中时，脂肪源性干细胞表现出优异的增殖潜能，使得其甚至在长期传代培养之后仍然能够维持干细胞的特征，并表现出高治疗效果以及分化潜能。在这方面，本专利技术人目标在于开发一种标记物，其在培养于基础培养基中的脂肪源性干细胞和培养于生长培养基中的脂肪源性干细胞之间显示出表达差异，并且本专利技术人观察到在培养于生长培养基中的脂肪源性干细胞中，1-酰基甘油-3-磷酸O-酰基转移酶9(AGPAT9)、膜联蛋白A10(ANXA10)、胰岛素样生长因子2结合蛋白3(IGF2BP3)和前列腺素E受体2(PTGER2)的基因表达提高，并且整合素α11(ITGA11)、PRKC细胞凋亡WT1调节子蛋白(PAWR)(PRKCapoptosisWT1regulatorprotein)和分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)的基因表达降低。因此，本专利技术人确认，这些基因可以被用于测量培养于生长培养基中的脂肪源性干细胞的治疗活性等以及增殖、免疫抑制潜能、分化潜能等，并完成了本专利技术。技术方案本专利技术的一个目的是提供检测标记物的组合物，所述标记物能够检测培养于含有表皮生长因子(EGF)或碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的培养基的脂肪源性干细胞的治疗潜能，所述组合物包括用于测量至少一种基因的mRNA或蛋白质水平的试剂，所述至少一种基因选自由1-酰基甘油-3-磷酸O-酰基转移酶9(AGPAT9)、膜联蛋白A10(ANXA10)、胰岛素样生长因子2结合蛋白3(IGF2BP3)、前列腺素E受体2(PTGER2)、整合素α11(ITGA11)、PRKC细胞凋亡WT1调节子(PAWR)和分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)组成的组。本专利技术的另一个目的是提供用于检测标记物的组合物，所述标记物能够检测培养于含有EGF或bFGF的培养基中的脂肪源性干细胞的增殖潜能，所述组合物包括用于测量选自由AGPAT9、ANXA10、IGF2BP3、PTGER2、ITGA11、PAWR和SFRP2组成的组中至少一种基因的mRNA或蛋白质水平的试剂。本专利技术的另一个目的是提供用于检测标记物的试剂盒，所述标记物能够检测培养于含有EGF或bFGF的培养基中的脂肪源性干细胞的治疗或增殖潜能，所述试剂盒包括用于检测该标记物的组合物。本专利技术的另一个目的是提供用于检测脂肪源性干细胞的治疗或增殖潜能的方法，所述方法包括测量培养于含有EGF或bFGF的培养基中的脂肪源性干细胞中的选自由AGPAT9、ANXA10、IGF2BP3、PTGER2、ITGA11、PAWR和SFRP2组成的组中至少一种基因的mRNA或蛋白质水平的步骤。有益效果本专利技术提供能够检测培养于生长培养基中的具有增强的临床效果的脂肪源性干细胞的标记物，从而为证实脂肪源性干细胞的效果提供更加有效的数据。而且，本专利技术可以被有效用作能够检测通过改善的培养方法培养的脂肪源性干细胞的由增殖潜能、分化潜能等代表的治疗活性的标记物。附图说明图1显示在基础培养基和生长培养基中的脂肪源性干细胞的细胞形态学。图2显示在基础培养基和生长培养基中的脂肪源性干细胞的细胞生长差异。图3显示使用Illumina24K芯片的培养于3组基础培养基中的细胞和培养于生长培养基中的脂肪源性干细胞的微阵列结果。图4显示由RT-PCR和实时PCR所证实的、收集自17个供体的脂肪源性干细胞中的基因表达量的改变，其在图3中的生长培养基中提高，其中RPL13A为对照基因。图4A、4B、4C和4D分别显示APPAT9、ANXA10、IGF2BP3和PTGER2的结果，其在生长培养基中均提高。图5显示由RT-PCR和实时PCR所证实的、收集自17个供体的脂肪源性干细胞中的基因表达量的改变，其在图3中的生长培养基中降低，其中RPL13A为对照基因。图5A、5B和5C分别显示ITGA11、PAWR和SFRP2的结果，其在生长培养基中均降低。图6显示在基础培养基和生长培养基中的基因的蛋白质改变。具体实施方式本专利技术提供用于检测标记物的组合物，所述标记物能够检测培养于含有EGF或bFGF的培养基中的脂肪源性干细胞的治疗潜能，所述组合物包括用于测量选自由AGPAT9、ANXA10、IGF2BP3、PTGER2、ITGA11、PAWR和SFRP2组成的组中至少一种基因的mRNA或蛋白质水平本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测标记物的组合物，所述标记物能够检测培养于含有表皮生长因子(EGF)或碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的培养基的脂肪源性干细胞的治疗潜能，所述组合物包含用于测量至少一种基因的mRNA或蛋白质水平的试剂，所述至少一种基因选自由1‑酰基甘油‑3‑磷酸O‑酰基转移酶9(AGPAT9)、膜联蛋白A10(ANXA10)、胰岛素样生长因子2结合蛋白3(IGF2BP3)、前列腺素E受体2(PTGER2)、整合素α11(ITGA11)、PRKC细胞凋亡WT1调节子(PAWR)和分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)组成的组。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.06.12 KR 10-2013-00673651.一种用于检测标记物的组合物，所述标记物能够检测培养于含
有表皮生长因子(EGF)或碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的培养基的
脂肪源性干细胞的治疗潜能，所述组合物包含用于测量至少一种基因的
mRNA或蛋白质水平的试剂，所述至少一种基因选自由1-酰基甘油-3-磷
酸O-酰基转移酶9(AGPAT9)、膜联蛋白A10(ANXA10)、胰岛素样生
长因子2结合蛋白3(IGF2BP3)、前列腺素E受体2(PTGER2)、整合
素α11(ITGA11)、PRKC细胞凋亡WT1调节子(PAWR)和分泌型卷曲相
关蛋白2(SFRP2)组成的组。
2.一种用于检测标记物的组合物，所述标记物能够检测培养于含有
EGF或bFGF的培养基中的脂肪源性干细胞的增殖潜能，所述组合物包含
用于测量选自由AGPAT9、ANXA10、IGF2BP3、PTGER2、ITGA11、PAWR和
SFRP2组成的组中至少一种基因的mRNA或蛋白质水平的试剂。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中用于测量所述基因的
mRNA水平的试剂包括特异性结合所述基因的引物对或探针。
4.根据权利要求1或2所述的组合物，其中用于测量所述蛋白质水
平的试剂包括特异性针对所述蛋白质的抗体。
5.一种用于检测标记物的包含根据权利要求1所述的组合物的试剂
盒，所述标记物能够检测培养于含有EGF或bFGF的培养基中的脂肪源性
干细胞的治疗潜能。
6.一种用于检测标记物的包含根据权利要求2所述的组合物...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑璟淑，金美亨，
申请(专利权)人：韩国生命工学研究院，安特罗根有限公司，
类型：发明
国别省市：韩国;KR