片状细胞培养物的制造方法技术

本发明专利技术的目的在于提供一种细胞因子产生能力等活性高的片状细胞培养物及其制造方法。本发明专利技术涉及片状细胞培养物的制造方法、利用该制造方法制造的高活性片状细胞培养物、利用该片状细胞培养物对与组织的异常相关的疾病进行处理的方法，所述片状细胞培养物的制造方法包括将细胞冷冻的步骤、将冷冻的细胞解冻的步骤、及形成片状细胞培养物的步骤。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及高活性的片状细胞培养物的制造方法、用该制造方法制造的片状细胞培养物、包含该片状细胞培养物的医药组合物、使用该片状细胞培养物的疾病处理方法等。
技术介绍
近年来，为了修复损伤的组织等，进行了移植各种细胞的尝试。例如，为了修复因心绞痛、心肌梗塞等缺血性心脏病而导致损伤的心肌组织，尝试利用了胎儿心肌细胞、骨骼肌成肌细胞、间充质干细胞、心脏干细胞、ES细胞等(非专利文献1)。作为上述尝试的一环，开发出了利用支架(scaffold)形成的细胞结构物、使细胞形成为片状而得的片状细胞培养物(专利文献1)。关于片状细胞培养物在治疗中的应用，已开展了下述研究：针对由烧伤等导致的皮肤损伤的培养表皮片的利用、针对角膜损伤的角膜上皮片状细胞培养物的利用、针对食道癌内窥镜切除的口腔黏膜片状细胞培养物的利用等。为了使片状细胞培养物植入所移植的组织中并发挥所期望的功能，需要向该培养物供给氧、营养等，就此而言，已知具有血管新生作用的HGF(肝细胞生长因子，Hepatocytegrowthfactor)、VEGF(血管内皮生长因子，Vascularendothelialgrowthfactor)等各种细胞因子的作用是有用的(专利文献1)。因此，可以认为如果能使基于片状细胞培养物的这些细胞因子的产生能力提高，就可以提高片状细胞培养物的植入率、功能性。另外，已知这些细胞因子对组织的再生有用(非专利文献2)，因此，也可以认为由片状细胞培养物产生的细胞因子对移植靶标的组织发挥作用，从而促进该组织的再生。但是，成本低且简单的提高片状细胞培养物的细胞因子产生能力的方法尚未为人所知。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特表2007-528755号公报非专利文献非专利文献1：Haraguchietal.,StemCellsTranslMed.2012Feb；1(2):136-41非专利文献2：Nakagamietal.,JAtherosclerThromb.2006Apr；13(2):77-81
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供细胞因子产生能力等活性高的片状细胞培养物、其制造方法、包含该片状细胞培养物的医药组合物、及使用该片状细胞培养物的疾病处理方法。本申请的专利技术人在为解决上述课题而进行锐意研究的过程中，发现通过在制造片状细胞培养物时设置将细胞冷冻·解冻的步骤，可以提高片状细胞培养物的细胞因子产生能力等活性，从而完成了本专利技术。即，本专利技术涉及以下内容。(1)片状细胞培养物的制造方法，所述方法包括：将细胞冷冻的步骤；将冷冻的细胞解冻的步骤；及形成片状细胞培养物的步骤。(2)如(1)所述的方法，其中，细胞为自体细胞或异体细胞。(3)如(1)或(2)所述的方法，其中，细胞为自体细胞。(4)如(1)～(3)中任一项所述的方法，其中，在将细胞解冻的步骤之后，在不使细胞实质性增殖的情况下形成片状细胞培养物。(5)如(1)～(4)中任一项所述的方法，其中，在形成片状细胞培养物的步骤之后，还包括回收片状细胞培养物的步骤，并且，将细胞解冻的步骤是在回收片状细胞培养物的步骤前的48小时以内进行的。(6)如(1)～(5)中任一项所述的方法，其中，在将细胞冷冻的步骤之前，包括使细胞增殖的步骤。(7)如(1)～(6)中任一项所述的方法，在将冷冻的细胞解冻的步骤之后、且在形成片状细胞培养物的步骤之前，包括清洗细胞的步骤。(8)如(1)～(7)中任一项所述的方法，其中，细胞选自成肌细胞、间充质干细胞、心肌细胞、成纤维细胞、心脏干细胞、胚胎干细胞、iPS细胞、滑膜细胞、软骨细胞、上皮细胞、内皮细胞、肝细胞、胰细胞、肾细胞、肾上腺细胞、牙周韧带细胞、牙龈细胞、骨膜细胞及皮肤细胞组成的组。(9)如(1)～(8)中任一项所述的方法，所述方法获得活性比利用不包括将细胞冷冻的步骤和将冷冻的细胞解冻的步骤的方法制造的片状细胞培养物高的片状细胞培养物。(10)如(9)所述的方法，其中，活性选自细胞因子产生能力、植入能力、血管诱导能力及组织再生能力组成的组。(11)如(10)所述的方法，其中，细胞因子选自HGF及VEGF组成的组。(12)片状细胞培养物，其是利用(1)～(11)中任一项所述的方法制造的。(13)医药组合物，其包含(12)所述的片状细胞培养物。(14)对与对象中组织的异常相关的疾病进行处理的方法，所述方法包括将有效量的(12)所述的片状细胞培养物或(13)所述的医药组合物施予至需要处理的对象。(15)如(14)所述的方法，其中，组织选自心肌、角膜、视网膜、食道、皮肤、关节、软骨、肝脏、胰、牙龈、肾脏、甲状腺、骨骼肌及中耳组成的组。(16)如(14)所述的方法，其中，疾病选自心脏疾病、角膜疾病、视网膜疾病、食道疾病、皮肤疾病、关节疾病、软骨疾病、肝疾病、胰疾病、牙科疾病、肾脏疾病、甲状腺疾病、肌肉疾病及中耳疾病组成的组。利用本专利技术的方法制造的片状细胞培养物，由于细胞因子产生能力等活性高，向组织中的植入及植入后的存活性、功能性、功能的持续性等优异，因此，可以实现对各种疾病的有效处理。另外，通过利用本专利技术的方法制造的片状细胞培养物所产生的细胞因子对移植靶标的组织发挥作用，还可以促进该组织的再生。另外，本发明中的冷冻·解冻操作与以往的片状细胞培养物制造方法的相容性高，所需的劳力和时间、成本极少，因此，本专利技术的制造方法可以广泛用于片状细胞培养物的制造。附图说明图1是表示片化培养步骤中被分泌至培养液中的VEGF及HGF的浓度的图。图2是表示制造后的片状细胞培养物分泌至培养液中的VEGF的浓度的图。图3是表示制造后的片状细胞培养物分泌至培养液中的HGF的浓度的图。图4是表示利用例9的制造方法制作的片状间充质干细胞培养物的照片图像。在中央的4个连续的孔内可观察到片状细胞培养物。具体实施方式本说明书中，只要未另行定义，则本说明书中使用的所有技术用语及科学用语均具有与本领域技术人员通常理解的意思相同的含义。本说明书中提到的所有专利、申请、已公开的申请及其他出版物均通过引用全部并入本说明书中。本专利技术一方面涉及一种片状细胞培养物的制造方法，所述制造方法包括下述步骤：将细胞冷冻的步骤、将冷冻的细胞解冻的步骤、本文档来自技高网...

【技术保护点】
片状细胞培养物的制造方法，所述方法包括：将细胞冷冻的步骤；将冷冻的细胞解冻的步骤；及形成片状细胞培养物的步骤。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.05.17 JP 2013-1052041.片状细胞培养物的制造方法，所述方法包括：
将细胞冷冻的步骤；
将冷冻的细胞解冻的步骤；及
形成片状细胞培养物的步骤。
2.如权利要求1所述的方法，其中，细胞为自体细胞或异体细
胞。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中，细胞为自体细胞。
4.如权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，在将细胞解冻
的步骤之后，在不使细胞实质性增殖的情况下形成片状细胞培养物。
5.如权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，在形成片状细
胞培养物的步骤之后，还包括回收片状细胞培养物的步骤，并且，
将细胞解冻的步骤是在回收片状细胞培养物的步骤前的48小时以内
进行的。
6.如权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，在将细胞冷冻
的步骤之前，包括使细胞增殖的步骤。
7.如权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，在将冷冻的细
胞解冻的步骤之后、且在形成片状细胞培养物的步骤之前，包括清
洗细胞的步骤。
8.如权利要求1～7中任一项所述的方法，其中，细胞选自成肌
细胞、间充质干细胞、心肌细胞、成纤维细胞、心脏干细胞、胚胎
干细胞、iPS细胞、滑膜细胞、软骨细胞、上皮细胞、内皮细胞、肝
细胞、胰细胞、肾细...

【专利技术属性】
技术研发人员：坂本健太，赖纮一郎，
申请(专利权)人：泰尔茂株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP